En dépit des améliorations significatives dans la thérapie, le nombre de patients qui développent l’insuffisance cardiaque suivant l’infarctus aigu de myocarde augmente toujours. Pour observer la transition de l’IM aiguë à l’insuffisance cardiaque, nous avons besoin de modèles animaux reproductibles. Nous démontrons un modèle d’IM qui est relativement facile, reproductible et cause un inconfort minimal aux animaux.
En outre, l’appareil cardiaque isolé fournit une préparation hautement reproductible qui peut être étudiée d’une manière rapide et rentable. En collaboration avec d’autres groupes de recherche dans le monde entier, nous utilisons cette technique pour clarifier l’innocuité et l’efficacité de nouveaux médicaments et approches thérapeutiques qui améliorent la réparation et la fonction myocardiques après la démonstration MI.Visual des étapes les plus critiques de ce protocole telles que l’intubation ou le niveau d’occlusion de LAD peut aider à prévenir les pièges communs. La description étape par étape permet des résultats reproductibles même s’ils sont effectués par des chercheurs non formés.
Milat Inci, technicien de laboratoire, effectue les mesures cardiaques de travail, et Michael Koch, mathématicien et ingénieur électronique, contribue à l’analyse computationnelle. Après anesthésier le rat, intuber avec un tube de calibre 14 et une ventilation contrôlée par le volume avec un mélange d’oxygène, d’air et d’isoflurane. Placez le rat sur une table d’opération chauffée en position supine et fixez les membres antérieurs avec du ruban adhésif.
Placez ensuite les sondes ECG sous-cutanées dans les extrémités de l’animal. Utilisez un scalpel pour faire une incision commençant deux millimètres parasternal sur le thorax gauche au niveau du troisième espace intercostal et continuant à la ligne axillaire antérieure au niveau du cinquième espace intercostal. Déplacez doucement les muscles superficiels de sorte que les côtes puissent être vues.
Effectuer la thoracotomie au niveau du quatrième espace intercostal et insérer un rétracteur pour gagner en visibilité du cœur et du poumon. Ensuite, ouvrez soigneusement le péricarde pour éviter les saignements. Pour induire la reperfusion d’ischémie sur un temps défini, occlusez l’artère descendante antérieure gauche avec un tourniquet.
Après avoir brisé le myocarde, identifier l’artère gauche et placer la suture de deux à trois millimètres sous sa bordure à la marge ventrale du cœur. Rouvrir l’artère en enlevant le garrot après 30 minutes. Alternativement, l’artère peut être occluse en permanence en faisant six à sept noeuds avec une suture de 6-0 pour fermer la ligature.
Utilisez une suture monofilament unique 4-0 pour fermer le thorax avec trois sutures à bouton unique. Avant de serrer la dernière suture, retirez tout air résiduel du thorax à l’aide d’une seringue de 10 millimètres pour éviter un pneumothorax. Remplacez les muscles et éteignez l’anesthésie volatile.
Puis suture de la peau avec une suture continue 4-0. Administrer un spray antiseptique pour se protéger contre l’infection et le mordant de la suture. Pour l’anesthésie profonde, administrer un mélange de xylazine quatre milligrammes par kilogramme de poids corporel et de kétamine 100 milligrammes par kilogramme de poids corporel intraperitoneally avant l’échocardiographie ou de travail des mesures cardiaques.
Pour l’échocardiographie, placez le rat en position supine sur le plateau chauffant et obtenez des vues parasternales à axe court de la cavité ventriculaire gauche au niveau du muscle papillaire. Effectuez ensuite une échocardiographie en mode M afin de mesurer la fraction et la morphologie de l’éjection ventriculaire gauche. Pour récolter les organes, effectuer une injection intraveineuse d’héparine.
Ensuite, utilisez un scalpel pour faire une incision cutanée sous le xyphoïde et étendu parallèlement aux côtes des deux côtés avec des ciseaux. Couper les côtes dans la ligne axillaire avant et saisir le xiphoïde pour soulever la poitrine. Enlevez les adhérences anatomiques ou fibrotiques de tissu en rupturing soigneusement le tissu avec deux paires de forceps.
Prélevez des échantillons de sang dans le cava vena avec une seringue de cinq millilitres. Ensuite, effectuez l’excision de tout le cœur au niveau de l’entrée et de la sortie. Plongez le cœur dans le tampon krebs-henseleit glacé et montez-le sur le système cardiaque isolé perfusé d’érythrocytes en cannulant l’aorte.
Commencez par le mode Langendorff. Et après 15 minutes, passez au mode coeur de travail. Cannulate l’atrium gauche par une veine pulmonaire.
Puis changer la direction du flux en ouvrant le clip qui occluse la canule auriculaire qui entraîne une perfusion à l’atrium gauche et un flux sanguin physiologique dans le cœur gauche. Enregistrez les mesures hémodynamiques pendant 20 minutes en mode coeur de travail, recueillant des gouttes de sang des coronaires avec une seringue de deux millilitres pour mesurer le flux coronaire toutes les cinq minutes. Effectuez des mesures continues du flux auriculaire gauche et du flux aortique à l’l’insurgée d’une sonde.
Si nécessaire, insérez rétrogradement un cathéter haute fidélité par l’intermédiaire de la valve aortique dans le ventricule gauche et mesurez la pression systolique ventriculaire gauche. Conclure l’analyse en calculant le volume de course et le travail cardiaque externe tel que décrit dans le manuscrit du texte. Des coupures et des taches histologiques ont été exécutées pour prouver la reproductibilité de la procédure.
La cicatrice fibrotique chez mir et les animaux traités était comparable à la formation de cicatrice des animaux factices tandis que la différence dans la fibrose entre les groupes de feinte et de MIR était significative. En outre, mir et les animaux traités ischémiques à distance par conditionnement ont montré la fibrose sensiblement réduite comparée aux animaux MIR-traités. L’échographie in vivo a été utilisée pour mesurer la fraction d’éjection, les diamètres fin-diastoliques et systoliques de fin de LV.
L’analyse a montré la fonction cardiaque sensiblement réduite due au traitement de MIR, mais des paramètres hémodynamiques ont été préservés par RIPerc. Les données hémodynamiques ex vivo ont montré l’efficacité de la procédure pendant que le groupe mir a montré des diminutions significatives de la pression systolique de LV, du output cardiaque, du volume d’accident vasculaire cérébral, et du travail externe de coeur. Lors de la tentative de cette procédure, il est important de se rappeler que le positionnement approprié de la suture occluding et le montage du cœur à l’appareil cardiaque isolé augmentent considérablement les chances d’obtenir des résultats reproductibles.
Il existe de nombreuses façons d’évaluer la fonction cardiaque chez l’animal intact par l’instrumentation aiguë ou chronique ou même non invasive par échocardiographie ou IRM. Cependant, le cœur reperfusé isolé reste un outil d’enquête de premier plan et offre toute une gamme d’avantages uniques.
