O Teste de Velocidade Locomotor Planarian é um meio para avaliar rapidamente os efeitos estimulantes e possíveis de retirada para uma variedade de agentes modificadores biológicos que podem afetar a motilidade. Este ensaio é facilmente controlado e fornece um método simples e acessível para gerar dados comportamentais confiáveis até mesmo nas configurações de pesquisa mais básicas. Uma vez que o sistema nervoso planário tem um cérebro rudimentar centralizado, uma simetria bilateral e sistemas neurotransmissores análogos, estudos comportamentais usando esses organismos oferecem insights pré-clínicos sobre possíveis respostas de vertebrados.
Experimentos podem ser ainda mais afetados por modificadores fisiológicos, drogas ou mesmo planários geneticamente modificados para fornecer informações sobre os mecanismos biológicos associados. É importante ter o planário para que as transferências entre os contêineres não os enfatizem e padronizem as curvas da linha de grade entre os membros do laboratório. A melhor maneira de obter resultados consistentes a partir deste experimento de ensaio comportamental, é vendo como os usuários experientes os realizaram.
Depois de criar uma cultura planária, alimente os vermes ad libitum em um cronograma regular duas vezes por semana de ovos cozidos orgânicos picados ou fígado de carne orgânica misturado por uma a duas horas. Após a alimentação, remova qualquer água suja do recipiente e use uma escova de tinta de aquarela plana para transferir quaisquer detritos alimentares e lodo aderindo ao recipiente para uma toalha de papel. Use água de nascente fresca e suave rodopiagem ou agitação para desalojar os planários e descampar os vermes em um recipiente limpo.
Deslize uma dica de pipeta larga sob quaisquer planários que permaneçam aderidos ao recipiente antigo para facilitar sua transferência para o novo prato e decantar cuidadosamente a água de transferência. Em seguida, cubra os planários no novo recipiente com água fresca da fonte. Para realizar um Teste de Velocidade Locomotor Planarian, primeiro assegure-se de que os planários famintos de cinco a dez dias estejam totalmente formados com cabeças e caudas completas e pigmentadas.
Se os planários estiverem prontos coloque uma placa de Petri de 10 centímetros de diâmetro limpo em um pedaço de papel de grade pré-laminado com quadrados de 0,5 centímetros por grupo experimental e adicione 20 mililitros de água de mola não adulterada para o grupo controle ou 20 mililitros de água de nascente contendo a concentração apropriada do produto natural que está sendo testado em cada prato. Posicione uma câmera acima da placa de estimulação de velocidade locomotor preparada e adicione cinco a 10 mililitros de água de nascente não adulterada ou água de nascente contendo a concentração apropriada do composto experimental a um recipiente de habitação de tamanho apropriado. Em seguida, use uma pequena escova de tinta de aquarela limpa para transferir suavemente um planário do recipiente de cultura para o recipiente de habitação preparado e permitir que o planário se habituar à solução no recipiente por dois minutos.
A pesquisa permitirá que os planários se movam para o mato e levantem cuidadosamente os animais sem forçá-los. Ao final do período de habituação, use o pincel para transferir cuidadosamente o planário para o centro do prato de estimulação de velocidade locomotor preparado contendo a mesma solução do recipiente de habitação e inicie a câmera para gravar de 10 a 11 minutos de movimento do planário. Para testar os efeitos da retirada ao final do período de habituação, enxágue o planário em um prato de cinco centímetros contendo apenas água de nascente.
Antes de transferir o verme para o centro do prato de velocidade locomotor preparado contendo água de mola fresca e iniciar a câmera para gravar 10 a 11 minutos de movimento. A configuração da câmera permite uma visão clara do planário e do papel da grade e permite uma avaliação precisa do progresso do animal durante a duração do experimento. A coleta de dados deve incluir o número total de linhas de grade cruzadas, bem como o número total acumulado de linhas cruzadas por minuto do experimento.
Para padronizar os resultados de cada ensaio, as velocidades locomotores planárias podem ser calculadas e traçadas à medida que o número de caixas cruzadas em relação ao progresso do worm de controle correspondente. Como referência, os planários em água de nascente normalmente cobrem aproximadamente 25 caixas em três minutos. Uma série de concentrações de reagentes de teste podem ser examinadas para determinar a motilidade planária em resposta aos compostos de teste de interesse.
Os dados de retirada podem ser avaliados quantificando o número de linhas de rede cruzadas em águas de nascente em relação ao controle de água da nascente após a habitaçãoria no produto bio modulador que está sendo examinado. Os planários de controle de água da primavera se movem sobre as linhas de rede durante a duração do experimento. Às vezes, porém, os planários de teste deixam de cruzar linhas de grade durante o ensaio com comportamentos característicos do produto que está sendo testado.
Isso sugere que um método diferente de análise pode ser necessário. Tais instâncias podem ser rastreadas e os dados podem ser ilustrados como a porcentagem do número total de animais expostos a uma determinada concentração de reagentes. É essencial lidar com o planário para que eles não sejam danificados durante a transferência entre os pratos.
Após determinar os efeitos de diferentes concentrações de um produto natural, modificadores de vias biológicas podem ser adicionados para observar quaisquer alterações dinâmicas nos resultados iniciais. O Teste de Velocidade Locomotor Planarian foi usado para testar estimulação e retirada usando agentes farmacológicos conhecidos. Adaptamos o sistema para estudar esses mesmos conceitos com produtos naturais.
