Lesão por isquemia-reperfusão de órgãos simulando alterações hemodinâmicas no modelo de transplante de fígado de rato. A lesão de isquemia-reperfusão é uma aplicação comum após o transplante de fígado. Pacientes com envolvimento extrahático de órgãos tendem a ficar mais tempo no hospital, gastam mais e têm um prognóstico pior.
O desenvolvimento da complicação está intimamente relacionado com a duração da fase anháptica do transplante hepático. No entanto, pesquisas básicas sobre a lesão de reperfusão isquemia após o transplante de fígado mostraram que a taxa de sobrevivência após o transplante de fígado está inversamente relacionada ao grau de lesão a órgãos extrahapticos. Com base na definição da fase anhaptica, simulamos a mudança hemodinâmica no transplante hepático resultando em lesão isquemia-reperfusão de órgãos extrahapticos.
Deste artigo é fornecer uma descrição detalhada de como construir um modelo animal da fase anhaptica em ratos, pesquisa básica sobre a lesão isquemia-reperfusão após o transplante hepático. Yuan Yuan é responsável por todas as operações de animais de vídeo. Dois fórceps oftálmicos, retos e curvados, e lentes interoculares, fórceps IOL, tesoura oftalmómica, um a dois retrólos, cotonetes de algodão, suturas cirúrgicas 3-0, gaze iodoform, agulhas de sutura, biossistemas quando necessário, e lentes interoculares, fórceps IOL são usados para separar vasos sanguíneos por causa de cabeças redondas.
Máquina de anestesia animal, máquina de desgagar, máquina de incorporar, fatiador patológico, máquina congelada, cortador de tecido, forno de secagem de ar, microscópio óptico neural, scanner, enflurane para anestesia geral, solução de 4%paraformaldeído, etanol puro-fino, xileno, cera de parafina de alta eficiência, solução de corante hematoxylin-eosin, ácido clorídrico, amônia, slide, vidro de cobertura, goma neutra e reagentes moribundos, e materiais consumíveis. Pipetas, centrífugas, analisador bioquímico automático, alanina amino transferase, kit ALT, aspartato, amino transferase, kit AST, kit creatinina. Após a pesagem, os ratos são anestesiados com isoflurano por uma máquina de anestesia animal.
Após a desinfecção abdominal, faça uma incisão mediana de três centímetros abaixo do processo xifoide usando fórceps e tesouras. Abra a cavidade abdominal, exponha o fígado usando um retrátil e mobilize o ligamento hepatogastrico. Use cotonetes de algodão para virar o lobo médio do fígado suavemente e vire-o para cima para expor o porta habitis.
Identifique o ducto biliar, a veia portal e a artéria hepática. Empurre o intestino delgado em direção à cavidade abdominal inferior esquerda usando trocas de algodão e mova a veia inferior para a veia renal direita, isole a veia portal, a artéria hepática e a veia inferior cava acima da veia renal direita com uma lente intraocular, IOL, fórceps marcados com fio de seda 3-0 cada um com um nó de deslizamento. Corte a pele da extremidade inferior esquerda e direita e exponha a veia femoral usando fórceps oftálmicos.
Injete lentamente heparina de baixo peso molecular 625 UI/kg através da veia femoral para heparinar todo o corpo. Ligate a veia portal, artéria hepática e veia cava inferior acima da veia renal direita com suturas número 3-0, com duração de 45 minutos. Substitua o intestino delgado na cavidade abdominal e cubra-o com gaze.
A anestesia da inalação é reduzida durante esses períodos. Após 45 minutos, solte a veia portal, artéria hepática e a veia cava inferior acima da veia renal direita. Suturar o músculo e a camada da pele por camada e terminar a anestesia inalatória.
Forneça analgesia pós-operatória usando morfina subcutânea de 5 mg/kg a cada quatro horas Observe o rato até acordar e mantenha alimentado sob uma temperatura de 25 mais ou menos dois graus Celsius e umidade de 50 mais ou menos 10% Lâmpadas de aquecimento animal são necessárias. Neste modelo animal, os ratos foram divididos aleatoriamente em cinco grupos de acordo com a isquemia por 15 minutos, eu 15 grupo, 30 minutos, eu grupo 30, 45 minutos, eu grupo 45, 60 minutos, eu 60, e um grupo falso com 10 ratos em cada grupo. Sua taxa de sobrevivência de cada grupo foi observada 14 dias após a operação.
Todos os ratos sobreviveram nos grupos I 15, I 30 e Sham. Oito sobreviveram por 14 dias no grupo I 45 e apenas dois sobreviveram no grupo I 60. Os resultados sugeriram que os ratos poderiam tolerar a fase anháptica por 45 minutos no máximo.
Durante o experimento, o Biossistema foi utilizado para registrar as alterações da frequência cardíaca e da pressão arterial, intubação da artéria carótida interna direita antes e depois da fase anháptica. Descobrimos que a frequência cardíaca e a pressão arterial média, MAP de ratos, mudaram drasticamente após a ligadura vascular. Após a ligadura, isquemia hepática, congestionamento e edema nos intestinos, varizes gástricas e esplenomegalia eram evidentes.
80 ratos foram divididos aleatoriamente em oito grupos, incluindo isquemia por 45 minutos, T0, reperfusão por seis horas, T6, 12 horas, T12, 24 horas, T24, 48 horas, T48, 72 horas, T72, sete dias, T7, em 14 dias, T14, respectivamente. O rim, pâncreas, intestino delgado, coração e pulmão foram levados e manchados com HE depois que ratos foram sacrificados. Com exceção do coração, os escores patológicos foram dados de acordo com as referências, respectivamente.
Os resultados mostraram que o tempo de lesão máxima dos órgãos extraháticos variou. Foram de seis a 24 horas após a operação para o pâncreas e de 24 a 48 horas para os pulmões. O trato intestinal e o rim foram mais gravemente feridos após 45 minutos de isquemia.
Não houve anormalidade óbvia da mucosa intestinal 24 horas após a operação e os rins se recuperaram após 48 horas. Quanto ao coração, com a passagem do tempo após a reperfusão, narcose celular miocárdio local, fragmentação e dissolução celular, infiltração celular inflamatória e vasodilatação local e congestão foram encontrados no tecido por 24 a 48 horas após a operação. Foram coletados soros e detectados os níveis de ALT, AST, creatinina e amilase por um analisador bioquímico automático.
Todos os indicadores atingiram o pico de 24 a 48 horas, ao contrário das mudanças patológicas. Embora os níveis estivessem basicamente normais 48 horas após a operação, os danos patológicos continuavam. Para resumir, o modelo em ratos é simples e mais fácil de usar sem microcirurgia e fornece base para pesquisas fundamentais da lesão isquemia-reperfusão de órgãos extraháticos após isquemia hepática.
