O sistema permite que os pesquisadores construam facilmente um sistema de iluminação barato e versátil para experimentos optogenéticos. As vantagens desta técnica incluem a capacidade de programar o tempo de iluminação LED com comprimentos de onda disponíveis que abrangem o espectro visível perto do IR, e que os LEDs podem ser usados em uma variedade de contextos Para construir um circuito elétrico, prender a placa de circuito impresso nas mãos amigas e inserir os fios do jumper, conectando-os para formar os orifícios A1 e A3 ao solo, o fio do jumper D2 no orifício D6 e a fonte de alimentação mais os fios do jumper número sete no orifício A7. Dobre os terminais 45 graus e adicione fluxo.
Após a solda, apare as costas dos fios. Insira uma extremidade do conector fêmea fio a fio soldado no orifício A5. Em seguida, conecte uma extremidade do resistor ao orifício A5.
Conecte a outra extremidade do conector ao aterramento. Em seguida, conecte a outra extremidade do resistor ao solo e solde a conexão. Para o conector Arduino, aperte as extremidades dos conectores fio a fio e empurre as extremidades crimpadas através do conector retangular.
Para configurar os LEDs, estanhe um fio aquecendo por baixo enquanto adiciona solda a partir do topo. Coloque uma quantidade generosa de solda sobre a grande ponta de solda e use a ponta para aquecer a base do LED no contato que contém o fluxo. Depois de alguns segundos, arraste individualmente a solda em cada contato e fixe o fio preto no cátodo usando um grampo de cabelo.
Coloque uma quantidade generosa de solda na grande ponta de solda e pressione a ponta no fio até que a solda na base do LED derreta. Segure o fio e remova o ferro de solda enquanto mantém o fio no lugar. Coloque uma pequena quantidade de pasta de solda nas almofadas para as conexões LED e use fórceps para colocar o LED sobre as almofadas.
Segure o fio vermelho pré-estanhado no ânodo e use um grampo de cabelo para prender o fio. Adicione solda à ponta grande, conforme demonstrado, e pressione a ponta na conexão até que a solda na base do LED derreta e a pasta de solda derreta e se torne prata. Para fazer os fios de LED, coloque um tubo de encolhimento de 4,76 milímetros sobre o fio cortado no comprimento e um tubo de encolhimento de 3,18 milímetros sobre o conector fio a fio.
Retire e adicione fluxo às extremidades do fio. Use as mãos que ajudam para prender o conector fio a fio e torça a extremidade do conector com uma extremidade de fio. Solde os materiais juntos e prenda o outro fio à configuração da mesma maneira e solde.
Em seguida, prenda os fios de LED para as mãos de ajuda com fita adesiva sob a base do LED. Em seguida, misture o epóxi de acordo com as instruções do fabricante e espalhe o epóxi sobre a parte superior do LED soldado. Usando a broca de pá, faça um furo de 1,5 centímetro através da parte superior da caixa na qual o LED será colocado e use uma ferramenta rotativa de alta velocidade para fazer um entalhe em um lado do furo para abrir espaço para o fio LED.
Cole um pedaço de filme de privacidade de 25 a 30 milímetros na caixa preta que cobre o orifício através do qual o LED acenderá e cole o LED fora da caixa preta em cima do buraco. Para um sistema de controle de quatro LEDs, faça quatro furos de 0,83 centímetro a 3,81 centímetros de distância na tampa da caixa e use uma ferramenta rotativa de alta velocidade para cortar um orifício retangular de 1,19 por 1,90 centímetro no canto superior esquerdo. Usando uma broca de pá, faça um furo de 1,5 centímetro na parte de trás da caixa e insira um grommet no furo.
Para os LEDs controlados por computador, lixa a área onde o microcontrolador será colado na caixa, bem como o lado inferior do suporte do microcontrolador. Encaixe o microcontrolador no suporte epóxi e, em seguida, epóxi o suporte e a caixa juntos antes de prender o suporte na caixa preta. Em seguida, coloque fita dupla face no clipe e prenda o clipe dentro da caixa.
Em amostras transfectadas para expressar o fitocromo B, mas não a ficocianina bilina, o vazamento aumenta à medida que a quantidade de DNA do repórter aumenta. Além disso, quando todo o interruptor do gene do fitocromo B, incluindo o plasmídeo produtor do cromoquatro bilina ficocianina, é iluminado com luz vermelha distante, a expressão de luciferase também aumenta com as quantidades crescentes de construção do repórter dentro da mistura de transfecção. Da mesma forma, quando as células sensíveis à luz são iluminadas com luz vermelha, a expressão de luciferase também aumenta com o aumento da quantidade de repórteres.
Ao comparar os níveis de indução das células tratadas com a luz vermelha com as células tratadas com a luz vermelha distante, uma pequena diminuição na ativação da dobra é encontrada com quantidades crescentes de repórter. É essencial seguir cuidadosamente cada passo ao construir o circuito elétrico e verificar novamente os números do pinhole linha por linha antes de soldar cada componente. Este protocolo pode ser usado para a estimulação óptica de muitos tipos de amostras ou ferramentas optogenéticas usando uma variedade de comprimentos de onda e permite a programação de horários de iluminação.
