Nosso protocolo é significativo porque garante a pureza como uma verificação de controle de qualidade. Também promove o desempenho de fermentação severa e a consistência do rendimento na fermentação de bactérias do ácido láctico. A principal vantagem desta técnica é que ela pode melhorar o desempenho de fermentação de bactérias do ácido láctico através da pureza, viabilidade e funcionalidade celular.
Esta técnica é fácil de usar e pode ser facilmente realizada por qualquer pessoa devido ao uso de apenas equipamentos básicos, sem muitos requisitos técnicos. Philip Yeboah é nosso assistente de pesquisa de pós-graduação e demonstrará o procedimento. Para começar, pegue o estoque de glicerol preparado de bactérias do ácido láctico, ou cepas LAB, em tubos de centrífuga de dois mililitros do congelador ultrabaixo de 80 graus Celsius negativos.
Não permita que descongelem antes de usar. Limpe e desinfete a abertura dos tubos de centrífuga com álcool a 70% e suavemente vórtice antes do uso. Pipetar cerca de 250 microlitros da cultura LAB de estoque dos tubos de centrífuga para tubos de ensaio MRS frescos de dois mililitros.
Vórtice suavemente os tubos de ensaio, parafilmeize-os e incube-os anaerobicamente durante a noite a 42 graus Celsius por 12 a 16 horas. Em seguida, pegue cerca de 500 microlitros das culturas cultivadas durante a noite dos tubos de ensaio MRS de dois mililitros para tubos de ensaio MRS frescos de sete mililitros, vortex-os e incube-os anaerobicamente durante a noite a 42 graus Celsius por 12 a 16 horas. Avaliar o crescimento microbiano medindo a densidade óptica ou o crescimento das culturas a 610 nanômetros com um espectrofotômetro visível UV e registrar resultados aceitáveis entre 0,7 e 0,9.
Fixe as culturas noturnas dos tubos MRS de sete mililitros em placas de ágar MRS e MRCMPYR e incube-as anaerobicamente por 72 horas a 42 graus Celsius. Escolha as colônias isoladas das placas de ágar, transfira-as para tubos de ensaio MRS frescos de sete mililitros, suavemente vórtice e incube-as anaerobicamente durante a noite a 42 graus Celsius por 12 a 16 horas. Armazene as placas de ágar contendo as cepas isoladas a quatro graus Celsius na geladeira por uma semana.
Em seguida, meça e confirme a densidade óptica dos tubos de ensaio MRS de sete mililitros das culturas LAB isoladas das placas estriadas a 610 nanômetros e use-as como culturas de trabalho para todos os experimentos relacionados. Use nove mililitros de água peptona para realizar contaminações dez vezes maiores das culturas LAB cultivadas dos tubos de ensaio MRS finais de sete mililitros para obter uma proporção de 1 a 10. Pegue cerca de 250 microlitros dos delírios seriais apropriados para todos os experimentos de fermentação e ative o caldo contendo as cepas, transferindo-as para caldo MRS fresco de sete mililitros e incubando-as anaerobicamente a 42 graus Celsius por 16 horas.
Repita as etapas para garantir um crescimento celular viável e superior a partir de culturas LAB. O crescimento morfológico celular das cepas S9 e LB6 lactobacillus bulgaricus cultivadas com o protocolo de controle de qualidade e as cepas S9 lactobacillus bulgaricus cultivadas sem o protocolo de controle de qualidade são mostradas aqui. As cepas foram listradas em triplicados e incubadas anaerobicamente a 42 graus Celsius por 72 horas.
Ao tentar este procedimento, certifique-se de desinfetar os tubos de cultura de estoque do freezer com álcool a 70% para evitar a contaminação cruzada. A medição da densidade óptica das culturas de crescimento deve estar sempre entre 0,7 e 0,9. Seguindo este protocolo, fermentações LAB eficientes ou operações de bioprocessamento com uso superior de cultura podem ser alcançadas.
