Notre protocole est important car assure la pureté en tant que contrôle de la qualité. Il favorise également les performances de fermentation sévères et la constance du rendement dans la fermentation des bactéries lactiques. Le principal avantage de cette technique est qu’elle peut améliorer les performances de fermentation des bactéries lactiques via la pureté, la viabilité et la fonctionnalité des cellules.
Cette technique est conviviale et peut être facilement effectuée par n’importe qui en raison de l’utilisation d’un équipement de base sans beaucoup d’exigences techniques. Philip Yeboah est notre assistant de recherche diplômé et il fera la démonstration de la procédure. Pour commencer, prenez le stock de glycérol préparé de bactéries lactiques, ou souches de laboratoire, dans des tubes à centrifuger de deux millilitres du congélateur ultra-bas de moins 80 degrés Celsius.
Ne les laissez pas décongeler avant utilisation. Nettoyez et désinfectez l’ouverture des tubes de centrifugation avec de l’alcool à 70% et un vortex doux avant utilisation. Pipeter environ 250 microlitres de la culture LAB de stock des tubes à centrifuger aux tubes à essai MRS frais de deux millilitres.
Tourbillonner doucement les tubes à essai, les parafilmer et les incuber en anaérobiose pendant la nuit à 42 degrés Celsius pendant 12 à 16 heures. Ensuite, prenez environ 500 microlitres des cultures cultivées pendant la nuit des tubes à essai MRS de deux millilitres aux tubes à essai MRS frais de sept millilitres, tourbillonnez-les et incuberez-les en anaérobiose pendant la nuit à 42 degrés Celsius pendant 12 à 16 heures. Évaluer la croissance microbienne en mesurant la densité optique ou la croissance des cultures à 610 nanomètres avec un spectrophotomètre UV visible et enregistrer les résultats acceptables entre 0,7 et 0,9.
Étaler les cultures de nuit des tubes MRS de sept millilitres sur des plaques de gélose MRS et MRCMPYR et les incuber en anaérobiose pendant 72 heures à 42 degrés Celsius. Prélevez les colonies isolées dans les plaques de gélose, transférez-les dans des tubes à essai MRS frais de sept millilitres, tourbillonnez doucement et incuberez-les en anaérobiose pendant la nuit à 42 degrés Celsius pendant 12 à 16 heures. Conservez les plaques de gélose contenant les souches isolées à quatre degrés Celsius au réfrigérateur pendant une semaine.
Ensuite, mesurez et confirmez la densité optique des tubes à essai MRS de sept millilitres des cultures LAB isolées des plaques striées à 610 nanomètres et utilisez-les comme cultures de travail pour toutes les expériences connexes. Utilisez neuf millilitres d’eau peptonée pour multiplier par dix les cultures LAB cultivées à partir des tubes à essai MRS finaux de sept millilitres afin d’obtenir un rapport de 1 à 10. Prenez environ 250 microlitres des délires en série appropriés pour toutes les expériences de fermentation et activez le bouillon contenant les souches en les transférant dans un bouillon MRS frais de sept millilitres et en les incubant en anaérobiose à 42 degrés Celsius pendant 16 heures.
Répétez les étapes pour assurer une croissance cellulaire viable et supérieure à partir de cultures LAB. La croissance morphologique cellulaire des souches S9 et LB6 lactobacillus bulgaricus cultivées avec le protocole de contrôle de la qualité et des souches S9 lactobacillus bulgaricus cultivées sans le protocole de contrôle de qualité est indiquée ici. Les souches ont été striées en trois exemplaires et ont été incubées en anaérobiose à 42 degrés Celsius pendant 72 heures.
Lorsque vous essayez cette procédure, assurez-vous de désinfecter les tubes de culture mère du congélateur avec de l’alcool à 70% pour éviter la contamination croisée. La mesure de la densité optique des cultures de croissance doit toujours être comprise entre 0,7 et 0,9. En suivant ce protocole, des fermentations LAB efficaces ou des opérations de biotraitement avec une utilisation supérieure de la culture peuvent être réalisées.
