بروتوكولنا مهم لأنه يضمن النقاء كفحص لمراقبة الجودة. كما أنه يعزز أداء التخمير الشديد واتساق المحصول في تخمير بكتيريا حمض اللاكتيك. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها يمكن أن تعزز أداء التخمير لبكتيريا حمض اللاكتيك عبر نقاء الخلية وصلاحيتها ووظائفها.
هذه التقنية سهلة الاستخدام ويمكن لأي شخص تنفيذها بسهولة بسبب استخدام المعدات الأساسية فقط دون العديد من المتطلبات الفنية. فيليب يبواه هو مساعد أبحاث الدراسات العليا لدينا وسيوضح الإجراء. للبدء ، خذ مخزون الجلسرين المحضر من بكتيريا حمض اللاكتيك ، أو سلالات LAB ، في أنبوبي طرد مركزي ملليلتر من الفريزر المنخفض للغاية 80 درجة مئوية تحت الصفر.
لا تسمح لهم بالذوبان قبل الاستخدام. قم بتنظيف وتطهير فتحة أنابيب الطرد المركزي بنسبة 70٪ كحول ودوامة بلطف قبل الاستخدام. ماصة حوالي 250 ميكرولتر من مخزون ثقافة LAB من أنابيب الطرد المركزي إلى أنابيب اختبار MRS الجديدة بسعة 2 ملليلتر.
قم بتحريك أنابيب الاختبار برفق ، وقم بتصويرها ، واحتضانها لاهوائيا طوال الليل عند 42 درجة مئوية لمدة 12 إلى 16 ساعة. بعد ذلك ، خذ حوالي 500 ميكرولتر من المزارع المزروعة بين عشية وضحاها من أنابيب اختبار MRS المليلتر إلى أنابيب اختبار MRS الطازجة سعة سبعة ملليلتر ، وقم بتدويرها ، واحتضانها لاهوائيا طوال الليل عند 42 درجة مئوية لمدة 12 إلى 16 ساعة. تقييم النمو الميكروبي عن طريق قياس الكثافة البصرية أو نمو الثقافات عند 610 نانومتر باستخدام مقياس الطيف الضوئي المرئي للأشعة فوق البنفسجية وتسجيل نتائج مقبولة بين 0.7 و 0.9.
قم بترتيب المزارع الليلية من أنابيب MRS سعة سبعة ملليلتر على ألواح أجار MRS و MRCMPYR واحتضانها لاهوائيا لمدة 72 ساعة عند 42 درجة مئوية. اختر المستعمرات المعزولة من ألواح الآجار ، وانقلها إلى أنابيب اختبار MRS جديدة سعة سبعة ملليلتر ، ودوامة بلطف ، واحتضنها لاهوائيا طوال الليل عند 42 درجة مئوية لمدة 12 إلى 16 ساعة. قم بتخزين ألواح الآجار التي تحتوي على السلالات المعزولة عند أربع درجات مئوية في الثلاجة لمدة أسبوع.
بعد ذلك ، قم بقياس وتأكيد الكثافة البصرية من أنابيب اختبار MRS سعة سبعة ملليلتر لمزارع LAB المعزولة من الألواح المخططة عند 610 نانومتر واستخدمها كمزارع عمل لجميع التجارب ذات الصلة. استخدم تسعة ملليلتر من ماء الببتون لإجراء تلوثات عشرة أضعاف لمزارع LAB المزروعة من أنابيب اختبار MRS النهائية سعة سبعة ملليلتر للحصول على نسبة 1 إلى 10. خذ حوالي 250 ميكرولتر من الأوهام التسلسلية المناسبة لجميع تجارب التخمير وقم بتنشيط المرق الذي يحتوي على السلالات عن طريق نقلها إلى مرق MRS الطازج سعة سبعة ملليلتر واحتضانها لاهوائيا عند 42 درجة مئوية لمدة 16 ساعة.
كرر الخطوات لضمان نمو الخلايا القابلة للحياة والمتفوقة من مزارع LAB. يظهر هنا نمو مورفولوجيا الخلية لسلالات S9 و LB6 lactobacillus bulgaricus المزروعة ببروتوكول مراقبة الجودة وسلالات S9 lactobacillus bulgaricus المزروعة بدون بروتوكول مراقبة الجودة. تم تقريب السلالات في ثلاث نسخ وتم تحضينها لاهوائيا عند 42 درجة مئوية لمدة 72 ساعة.
عند محاولة هذا الإجراء ، تأكد من تطهير أنابيب زراعة المخزون من الفريزر بنسبة 70٪ كحول لمنع التلوث المتبادل. يجب أن يكون قياس الكثافة البصرية لمزارع النمو دائما بين 0.7 و 0.9. باتباع هذا البروتوكول ، يمكن تحقيق عمليات تخمير LAB الفعالة أو عمليات المعالجة الحيوية مع الاستخدام الفائق للاستزراع.
