Este protocolo descreve um modelo animal de grande porte de doação após morte circulatória seguida de perfusão regional normotérmica toracoabdominal que mimetiza com precisão o transplante cardíaco clínico. Isso poderia ser usado para avaliar potenciais estratégias em pesquisa translacional. A principal vantagem deste protocolo é que ele fornece um modelo pré-clínico adequado para transplante cardíaco, dadas as semelhanças das técnicas anatômicas e cirúrgicas entre os corações suínos suínos e humanos.
Comece usando uma caneta cauterizada para realizar uma incisão na linha média em um animal anestesiado da região cervical média até o xifoide. Em seguida, divida a gordura subcutânea, camada por camada, ao longo da linha média, utilizando eletrocautério para alcançar o peresterno. Depois de cortar ao redor da fúrcula esternal, use um dedo para retrair e varrer os tecidos moles sob o esterno.
Abra o esterno com uma serra óssea, garantindo que o esterno esteja completamente dividido, tendo cuidado com a veia abaixo da parte superior do osso esternal. Em seguida, cauterizar o esterno ou aplicar cera de osso para garantir hemostasia adequada. Em seguida, com o uso do eletrocautério, dissecar e remover o timo, levantando-o do pericárdio e cauterizar os vasos que irrigam o timo da aorta e da veia cava superior para evitar sangramento.
Cortar cuidadosamente o pericárdio aberto com cautério. Durante o corte, insira os dedos sob o pericárdio para evitar lesões no coração. Em seguida, administrar 300 unidades por quilograma de heparina por via intravenosa para obter anticoagulação sistêmica.
Se o teste estiver disponível, verifique se o tempo de coagulação ativado é superior a 300 segundos. Administrar um bolus de três miligramas por quilograma de propofol por via intravenosa. Em seguida, interrompa a ventilação mecânica e desconecte o tubo endotraqueal.
Monitorar a pressão arterial e a saturação periférica de oxigênio. Quando a pressão sistólica for inferior a 50 milímetros de mercúrio, inicie o tempo de isquemia quente funcional. Estabelecer parada circulatória quando houver assistolia e ausência de pulsatilidade arterial.
Após a suspensão das terapias de manutenção da vida e confirmação do óbito, retrair inferiormente a via de saída do ventrículo direito, a artéria pulmonar à esquerda e a aorta à direita. Em seguida, dissecar cuidadosamente o espaço pulmonar da aorta com uso de cautério. Aplicar uma pinça cruzada grande sobre os vasos supra-aórticos para evitar e excluir a perfusão cerebral.
Em seguida, com a pinça de Metzenbaum e ângulo reto, dissecar delicadamente entre a veia cava superior e a artéria inominada e entre a veia cava inferior e o pericárdio. Circundar as veias cavas superior e inferior com fita umbilical ou sutura simples de seda zero e fixá-las com torniquete. Com sutura 3-0, colocar dois fios concêntricos em bolsa na adventícia da aorta ascendente distal, evitando pontos de espessura total.
Em seguida, coloque uma sutura em bolsa no átrio direito antes de fixar todas as suturas com um torniquete. Em seguida, montar e acionar o sistema de perfusão regional normotérmico. Em seguida, canular a aorta com cânula arterial francesa de 17 a 21 e fixá-la no lugar apertando o torniquete, segurando a sutura em bolsa.
Crie uma incisão de cinco milímetros no centro da corda da bolsa no átrio direito e dilate-a usando um pequeno instrumento angulado, como um ângulo reto ou estalo. Cubra a incisão com um dedo para evitar sangramento excessivo. Em seguida, utilizar cânula venosa de duplo estágio para canular o átrio direito.
Em seguida, prenda a cânula apertando as suturas da bolsa com torniquete. Conecte as cânulas à linha venosa do circuito de perfusão regional normotérmico usando um conector de meia a três sobre oito polegadas, garantindo a desarejamento completa para evitar um bloqueio de ar no sistema. Garantir que tenha decorrido um mínimo de 15 minutos entre a declaração de óbito e o início da perfusão regional normotérmica para abranger o tempo necessário no preparo da prática clínica, no drapeamento e no acesso ao coração.
15 minutos após o início do tempo de isquemia quente funcional, iniciar a perfusão regional normotérmica e ajustar progressivamente as taxas de fluxo para atingir um índice de perfusão de 2,5 litros por minuto por metro quadrado. Reinicie a ventilação mecânica com uma fração inspirada de 50% de oxigênio e seis mililitros por quilograma de volume corrente. Quando os critérios de desmame forem atendidos, interrompa a perfusão regional normotérmica.
Retire a cânula do átrio direito e aperte rapidamente a sutura em bolsa para minimizar a perda de sangue. Fixar a sutura com nós. Em seguida, siga o mesmo procedimento para remover a cânula aórtica.
Analise a função cardíaca através da ecocardiografia utilizando uma sonda transesofágica padrão e uma sonda transtorácica colocada diretamente sobre o coração. Resultados representativos da função cardíaca demonstraram um declínio significativo da função cardíaca após a doação após morte circulatória. Entretanto, esses órgãos demonstraram recuperação funcional semelhante após o transplante quando comparados aos corações transplantados convencionalmente.
As medidas de oximetria cerebral durante a perfusão regional normotérmica com os vasos supra-aórticos pinçados confirmaram a ausência de perfusão cerebral adequada, enquanto as medidas de complacência pulmonar durante a perfusão regional normotérmica e após o desmame do suporte não mostraram alteração significativa em relação aos valores basais. O desenvolvimento dessa técnica introduziu a importância de avaliar a transplantabilidade de outros órgãos, como pulmões, rins e fígado, no contexto da doação após morte circulatória e perfusão regional normotérmica.
