Esse protocolo ajuda a estabelecer modelos de ATC e HNSCC PDX que melhor refletem a heterogeneidade tumoral, a diversidade molecular e predizem desfechos clínicos. A técnica é simples de operar, tem uma alta taxa de sucesso e também pode ser adequada para outros modelos PDX. Esta técnica pode ser estendida para o rastreamento de sensibilidade a drogas anti-câncer para orientar o tratamento personalizado de pacientes com câncer.
Um indivíduo que nunca realizou esta técnica pode encontrar algumas dificuldades e recomenda-se prestar atenção a cada detalhe do esquema. Após a obtenção de amostras tumorais de ATC e CEC de cabeça e pescoço em tubo centrífugo de 50 milímetros contendo solução estéril de HTK, desinfetá-las com álcool a 75%. Use pinças oftálmicas esterilizadas para transferir o tecido tumoral para uma placa de Petri de seis centímetros cheia de soro fisiológico e corte-os em pequenos pedaços usando uma lâmina.
Em seguida, transfira as peças para uma nova placa de Petri de seis centímetros contendo o soro fisiológico e envolva-a com filme selante. Coloque o prato embrulhado em uma caixa de gelo, leve-o para a sala de animais livre de patógenos com tesouras, pinças e agulhas de inoculação. Depois de anestesiar o rato, remova os pelos no tórax lateral direito e desinfete a área com álcool a 75%.
Use uma tesoura para fazer uma incisão de dois milímetros no meio do tórax lateral direito. Com a pinça, retire o tecido da placa de Petri e coloque-o na agulha do trocarte. Segure o rato e aperte a pele no local da punção.
Insira o trocarte com a peça do tumor na incisão para o espaço subcutâneo, em seguida, mova-se para a parte de trás do ombro e empurre o núcleo do trocarte. Para reservar o tecido restante usando uma gaze estéril, remova o soro fisiológico da superfície do tumor, garantindo que não esteja excessivamente úmido. Coloque de quatro a seis pedaços de tecido em um tubo de criopreservação celular de dois mililitros e adicione um mililitro de solução de criopreservação no tubo.
Em seguida, coloque o tubo em uma caixa de resfriamento gradiente e congele-o a menos 80 graus Celsius durante a noite. Por fim, transfira-o para nitrogênio líquido. Para ressuscitar os tumores modelo PDX, utilizar paquímetro de Vernier para medir o comprimento e a largura do tumor subcutâneo uma vez por semana.
Calcular o volume do tumor e desenhar a curva de crescimento do tumor. Em seguida, usando tesoura, corte a pele de camundongo eutanasiada ao redor do tumor. Retire o tumor com pinça e coloque-o em uma placa de Petri.
Realizar o transplante tumoral até a quinta geração de camundongos, conforme demonstrado anteriormente. Selecionar o tecido tumoral de um camundongo modelo ATC PDX de geração P5. Corte-o em pedaços de dois a quatro milímetros cúbicos.
Inocular essas peças por via subcutânea, como demonstrado anteriormente, na parte de trás direita de um camundongo BALB/c fêmea nu, de quatro a seis semanas. Quando o tumor crescer de 50 a 150 milímetros cúbicos, divida os camundongos em três grupos. Depois de administrar lenvatinib, cisplatina e controle duas vezes por semana, meça o peso corporal do camundongo.
Além disso, meça o volume do tumor. A análise de correlação mostrou que a taxa de sucesso da construção do modelo ATC PDX não foi dependente da idade, sexo, diâmetro do tumor, grau e diferenciação tumoral. A taxa de tomada tumoral na construção do modelo PDX de CEC de cabeça e pescoço demonstrou que o grau de diferenciação foi associado com a taxa de sucesso do modelo, enquanto os outros parâmetros não afetaram a taxa de tomada do tumor.
As curvas de crescimento tumoral para cada modelo de PDX ilustraram que as amostras de ATC foram passadas de forma estável para a geração P3, enquanto dois casos de amostras de CEC de cabeça e pescoço não formaram tumores após passarem para a geração P1. A taxa de crescimento tumoral da geração P0 para a maioria dos modelos PDX foi relativamente mais lenta do que para as passagens posteriores, provavelmente devido à adaptação do microambiente de camundongos. O exame histopatológico demonstrou que os tumores PDX mantêm as características morfológicas dos tumores primários.
O tratamento com lenvatinib inibiu significativamente o crescimento tumoral e mostrou menor peso tumoral no modelo ATC PDX em comparação com o grupo controle. Além disso, os camundongos tratados com lenvatinibe não exibiram mudanças perceptíveis em seu peso total. A dosagem excessiva de cisplatina resultou em toxicidade significativa, evidenciada pela perda de peso e até morte.
Os tumores frescos devem ser lavados várias vezes com soro fisiológico normal antes de serem cortados em pedaços. A mistura por amostras tumorais biopsiadas com e inoculá-las provavelmente causará a formação de tumores. Este modelo pode ser usado para pesquisa de biologia tumoral, triagem de drogas, terapia personalizada.
