Este é um modelo de periodontite experimental em ratos, baseado nas técnicas de injeção de lipopolissacarídeos combinados com a colocação de ligaduras, oferecendo um método eficaz para estudar a progressão da doença e avaliar tratamentos para periodontite. A combinação de ambas as técnicas com métodos individuais culmina em uma rápida indução da doença, amplificando a resposta inflamatória destrutiva e aumentando a perda de tecido conjuntivo e reabsorção óssea alveolar. Este método fornece uma oportunidade valiosa para avaliar o impacto dos tratamentos de periodontite.
Quem demonstrará o procedimento será o Dr. Oscar Villa, PhD. Comece esterilizando todos os instrumentos cirúrgicos antes da cirurgia. Prepare uma mistura de cetamina e xilazina misturando 1,6 mililitros de cetamina com um mililitro de xilazina, diluído em PBS ou soro fisiológico, e armazene o estoque a quatro graus Celsius.
Diluir atipamezol para uma concentração final de 0,25 miligramas por mililitro e buprenorfina para uma concentração final de 0,03 miligramas por mililitro em PBS ou soro fisiológico, e armazenar os estoques a quatro graus Celsius. Prepare um mililitro de PG-LPS em soro fisiológico estéril e armazene o estoque a menos 20 graus Celsius. Use ratos Wistar fêmeas e machos para o experimento.
Manter os animais alojados em grupos em ambiente adequado, com ração e água padrão oferecidas ad libitum. Após o rato ser anestesiado, coloque o animal de costas em uma plataforma cirúrgica aquecida. Cubra o corpo do animal durante o procedimento para evitar a perda de calor.
Administrar oxigênio a 100% usando um pequeno cone nasal e monitorar a frequência de pulso e a saturação de oxigênio por oximetria de pulso. Agora, abra a boca do rato usando uma mordaça de boca de alumínio ao redor dos incisivos. Retrair a língua com ela e estabilizar a maxila e a mandíbula em uma posição de trabalho aberta e confortável, permitindo o acesso aos molares inferiores.
Coletar GCF utilizando um total de quatro papel absorvente ponto número 30, inserindo-o na fenda gengival ao redor do mesiopalatal do M1 até obter ligeira resistência. Mantenha o ponto de papel na mesma posição por 30 segundos antes da remoção imediata. Após a coleta, transfira o ponto de papel imediatamente para um frasco plástico e armazene a 80 graus Celsius negativos até o desempenho do ensaio.
Posicionar a cauda distal da sutura na face palatina da dentição e inserir o segmento proximal entre o contato de M1 e os segundos molares superiores. Utilizar o elevador microcirúrgico periosteal para inserir a sutura dentro do sulco. Enrole a ligadura ao redor da superfície bucal do M1 com muito cuidado, pois os tecidos neste nível apresentam uma estreita zona de gengiva aderida.
Certifique-se de que a sutura seja apertada em ambas as extremidades para ser conduzida para o sulco gengival. Em seguida, amarre as extremidades da sutura com um nó do cirurgião e corte as caudas o mais curto possível. Insira o nó no sulco.
Após o posicionamento da ligadura, injetar 40 microlitros de PG-LPS em solução salina estéril no tecido subgengival na face mesiopalatal do M1 bilateralmente. Para examinar e ajustar a ligadura, colocar o animal anestesiado de costas e utilizar um pequeno cone nasal durante o procedimento com isoflurano a 1% e oxigênio a 100% para manutenção da anestesia do animal. Abra a boca envolvente com o engasgo bucal de alumínio ao redor dos incisivos, retraindo a língua com ela e estabilizando a maxila e a mandíbula em uma posição de trabalho aberta e confortável, permitindo o acesso às ligaduras.
Aperte as ligaduras contra a gengiva com a ajuda de um elevador microcirúrgico periosteal e certifique-se de que a sutura das ligaduras seja inserida, criando inflamação ao redor da gengiva. Após o ajuste da ligadura, injetar-se bilateralmente 40 microlitros de PG-LPS no tecido subgengival da face mesiopalatal de M1, conforme demonstrado anteriormente. Após sacrificar o animal no 14º dia, coletar GCF como mostrado anteriormente.
Transfira o ponto de papel imediatamente para um frasco de plástico e armazene a menos 80 graus Celsius até o desempenho do ensaio. As imagens bidimensionais do osso alveolar dos molares superiores mostram maior volume ósseo no controle basal e maior perda óssea alveolar após o estabelecimento da periodontite. A análise das imagens sagitais destaca uma perda óssea alveolar mais significativa na área óssea inter-radicular de M1 e M2 após o estabelecimento da periodontite, em comparação com o grupo controle basal.
Após o sacrifício, o palato apresentou diferenças na recessão gengival em M1 entre os diferentes grupos. O grupo periodontite apresenta migração gengival apical e inflamação da gengiva ao redor dos molares superiores mais acentuada quando comparado ao grupo controle basal. Além disso, o grupo periodontite mostrou uma liberação significativamente maior de citocina pró-inflamatória 1L-1 beta do GCF do que o grupo controle.
Etapas cruciais no procedimento são o correto posicionamento da sutura e nó no sulco, ajuste adequado da ligadura e injeção precisa de lipopolissacarídeo durante o protocolo de 14 dias.
