Hibridização da Reação em Cadeia de RNA Fluorescência de Monte Inteiro Hibridização in situ de Genes Quimiossensoriais em Apêndices Olfativos de Mosquitos

Nosso grupo está interessado no sistema quimio-sensorial de mosquitos. Esperamos que, ao atingir um mosquito com paladar e olfato, possamos impedir que ele nos encontre e nos morda. A hibridização fluorescente in situ por reação em cadeia de hibridização é um desenvolvimento recente.

Essa tecnologia é altamente sensível, robusta e capaz de multiplexar vários alvos gênicos de forma que possamos visualizar a expressão e localização desses genes simultaneamente dentro de seu ambiente nativo. A transcriptômica especial é um método de ponta utilizado no campo da biologia espacial. Essa tecnologia é capaz de multiplexar milhares de genes, e é possível visualizar a expressão desses genes simultaneamente.

Nosso protocolo nos permite visualizar diretamente quais neurônios na antena expressam qualquer um dos cerca de 50 possíveis receptores ionotrópicos. Isso nos fornece um roteiro fundamental para orientar nossa compreensão de como esses receptores de fator clássicos podem mediar comportamentos. Os neurônios olfativos dentro dos órgãos olfativos de um inseto, como a antena, são tipicamente enterrados dentro de uma casca quitinosa protetora.

Isso torna a visualização da expressão do receptor olfatório nesses neurônios muito desafiadora. Nosso protocolo usa uma combinação de tratamentos com quitinase e protocolos de fluorescência e transparência de última geração para superar esses desafios.