JoVE Logo
АВТОРЫ
СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

Войдите в систему

Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.

В этой статье

  • Резюме
  • Аннотация
  • Введение
  • протокол
  • Результаты
  • Обсуждение
  • Раскрытие информации
  • Благодарности
  • Материалы
  • Ссылки
  • Перепечатки и разрешения

Резюме

Эта статья содержит подробные методологии использования трехмерных (3D) анализах для количественного вторжение клеток рака молочной железы. В частности, мы обсудим процедуры, необходимые для настройки таких анализах количественную и анализа данных, а также методы для изучения потерю целостности мембраны, которая возникает, когда клетки вторгнуться.

Аннотация

В настоящее время хорошо известно, что клеточной и тканевой микросреда являются важнейшими регуляторами, влияющие инициации и прогрессии опухоли. Кроме того, внеклеточного матрикса (ECM) было продемонстрировано, чтобы быть критическим регулятором поведения клеток в культуре и гомеостаза в естественных условиях. Нынешний подход культивирования клеток на двумерной (2D), пластиковые поверхности приводит к нарушению и потери сложных взаимодействий между клетками и их микросреды. Благодаря использованию трехмерной (3D) Культура анализов, условия для клеток микроокружения взаимодействия устанавливаются напоминающие микросреды в естественных условиях. В данной статье приводится подробная методика расти клетки рака молочной железы в матрице 3D базальной мембраны белка, иллюстрирующих потенциал 3D культуры в оценке вторжения клеток в окружающую среду. Кроме того, мы обсудим, как эти 3D анализы есть потенциал, чтобы изучить потерю Molec сигнализацииULES которые регулируют эпителиальных морфологию по иммуноокрашивания процедуры. Эти исследования помогают определить важные механистические детали в процессы, регулирующие вторжение, необходимых для распространения рака молочной железы.

Введение

Миграция и вторжение в индивидуальных или коллективных клеток два клейма рака, и требуется для метастазирования раковых клеток 1-4. Способность раковых клеток, чтобы инициировать метастазов зависит от их способности к миграции и вторжение в соседнюю ткань с использованием invadopodia деградировать базальную мембрану клеток. Invadopodia динамические актина богатых деградации матрица выступы, которые позволяют деградацию внеклеточного матрикса через выпуск матричных разрушающих протеаз 5. Вторжение Раковая клетка включает деградацию матрицы с последующим миграции раковых клеток, и это сопровождается реорганизацией трехмерное (3D) матрицы среды 2. Таким образом, чтобы проникнуть через матрицу, клетка должна преобразовывать свою форму и взаимодействуют с внеклеточным матриксом (ECM) 2.

Поддержание целостности ткани молочной железы зависит от плотно Controlleд архитектура ткани с клеточной ECM и межклеточной адгезии переходы влиять на экспрессию генов и разрушение эпителиальной полярности может привести к возникновению рака 6-10. Тем не менее, большинство в пробирке миграции и вторжения анализы, такие как Transwell камерных анализов или рана царапин анализов являются двумерные (2D) и, следовательно, они пренебрегают сложные взаимодействия между клетками и их прилегающей среды 3,6,8,11-14. Значительные морфологические и функциональные различны в том числе изменений в клеточной морфологии, клеточной дифференцировки, клетка-матрикс спаек и паттернов экспрессии генов были обнаружены путем культивирования клеток в 3D культур, которые обычно отсутствуют в 2D анализах 2,6,8,11. Таким образом, использует 3D-анализов значительно полезным в обобщал более физиологичным в естественных состоянии, что приводит к лучшему переводе новаторских находок в фундаментальных исследованиях в клинику 6-10. Тем не менее, следует отметить,, Несмотря на многие преимущества, полученных с использованием 3D-культур, эта модель не может учесть все сложности в естественных условиях опухоли микроокружения, что включает в себя различные типы клеток. Тем не менее, можно включить стромальных клеток в 3D-модели (например, фибробласты, лейкоциты и макрофаги) для изучения влияния опухолевых-стромальных взаимодействий на адгезии раковых клеток и вторжения 15-17.

Грудные эпителиальные клетки в культуре расти наиболее эффективно, когда ECM белки, такие как ламинин и коллагена присутствуют. При этом известно, имеющийся в продаже матрица смесь была получена из Engelbreth-Холм-Рой (EHS) мышиного опухоли и известен как Матригель базальной мембраны матрицы 2,8. Ряд методов были созданы расти эпителиальные клетки как 3D колоний в базальной мембраны матрицы 2,8. В подвале матричная модель 3D мембрана является эффективным для установления и злокачественной и не злокачественной клетки грудирост, напоминающее то, что происходит в окружающей среде в естественных 18,19. MCF10A клетки доброкачественных эпителиальные клетки молочной железы. При выращивании в базальной мембраны матрицы, эти клетки демонстрируют в естественных черт нормальных клеток молочной железы и пройти под контролем пролиферации клеток, клеток поляризацию, и апоптоз о создании просвета пространство 8,12,20. Кроме того, внешний вид ядрах клеток MCF10A клеток, образующих ацинусов в 3D культур больше напоминают те из эпителиальных клеток молочной железы в ткани, чем те, культивировали в монослое 21. Исследования Бисселл и коллегами были первыми, чтобы показать, что злокачественные клетки молочной железы могут быть дифференцированы от доброкачественных клеток молочной железы при выращивании в ламинином богатых окрестностях, так как злокачественные клетки отображать высоко дезорганизованы фенотип, увеличение распространения, снижение клетки к клеточной адгезии, повышенная экспрессия мезенхимальных маркеров и увеличение числа инвазивного структуру, образованную 3,6,22.

Аномалии окружающей среды клеток может влиять на формирование опухоли 20. Способ 3D культура может быть использована для эффективной изучить взаимодействие, которое происходит между опухолевыми клетками и окружающей их среды и определить, как влияет на экспрессию белка такой 14,20,21,23 связи. В данной статье приводится подробная методика расти MDA-MB-231 клеток рака молочной железы в 3D культур для анализа инвазивность и учиться потерю эпителиального морфологии с использованием эпителиальных маркеров ламинин, компонент клеточной базальной мембраны 18,19,24, 25. Подробное описание процедур обеспечивают возможность точно и воспроизводимо количественно звездчатый (инвазивный) формирование структуры на любой инвазивной раковой клетки и не ограничивая этим клеточных линий рака молочной железы общий (например, MDA-MB-231, HS578T, MCF-7 или T47D ). Таким образом, этот анализ может служить в качестве платформы для оценки того, как экспрессии белка в клетках или лечение с про-или анти-инвазивные соединения регулируют внеклеточный деградации матрицы, по одной или нескольких клеток.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

протокол

1. Трехмерная Культура клеток рака молочной железы в базальной мембраны Matrix (анкеровки Техника)

  1. Обращение Матригель базальной мембраны матрица: Оттепель на льду в течение ночи при 4 ° С. Базальная мембрана матрица является жидкостью при низкой температуре, но затвердевает при комнатной температуре. Держите базальной мембраны матрицу на льду (фиг.1А-B).
  2. Накройте конфокальной № 1 со стеклянным дном блюдо с 50 мкл базальной мембраны матрицы с помощью распространения матрицу с помощью кончика Р-200 Pipetman в виде спирали (рис. 1в). Соблюдайте осторожность при распространении базальной мембраны матрицу, чтобы избежать образования воздушных пузырей. Кроме того, во избежание распространения матрицу к близко к границам стеклянным дном блюдо, чтобы предотвратить образование мениска. Если неопытный обработка базальная мембрана матрица, то предварительно охлажденный блюдо, P-200 Pipetman и пипетки может быть на льду (в качестве альтернативы оставили на ночь в холодильнике при 4 ° С). На этом этапе предложениядополнительное время для распространения базальной мембраны матрицу до затвердевания. Место блюдо (адреса) в инкубаторе для клеточных культур (при 37 ° С с 5% СО 2) в течение не менее 30 мин для того, чтобы базальной мембраны матрицу, чтобы укрепить (рис. 1D).
  3. В то время как матрица претерпевает затвердевание, Trypsinize 70-80% сливной 100-мм пластины клеток. Как только клетки начали подъема от пластины, ресуспендируют их в 10 мл среды RPMI 1640 среде, содержащей 10% (объем / объем) фетальной бычьей сыворотки (FBS), чтобы инактивировать трипсин (рис. 1E). Затем передавать ресуспендировали клетки в 15 мл коническую пробирку (рис. 1F).
  4. Вращайте клетки (присутствующие в конической трубе) при 100 мкг в течение 3 мин в специальной культуры клеток центрифуги (рис. 1G-H).
  5. В то время как клетки центрифугировали время, аликвоту 50 мкл матрицы в 1 мл микроцентрифужных трубки (примечание: каждый стеклянным дном тарелки выделяется один микроцентрифужную пробирку, следовательно, еслиэксперимент требуется 3 блюда, то из этого следует, что 3 микроцентрифужные пробирки необходимы, а), а затем поместить трубку на льду (рис. 1В).
  6. Аспирируйте среды из коническую пробирку со стадии 1.4, в то время как оставляя осадок ненарушенных (рис. 1I). Ресуспендируют клеток (которые были центрифугировали) в 1 мл FBS-дополненной RPMI среде (рис. 1j).
  7. После того, как клетки подсчитывают с помощью гемоцитометра (рис. 1K) или встречный аликвоты клеток частиц 2,5 х 10 4 клеток в микроцентрифужных трубки и довершение всего с помощью соответствующего средства массовой информации так, чтобы получить общий объем 50 мкл (рис. 1 л).
  8. Смешайте клетки от стадии 1.7 (25000 клеток в 50 мкл) с матрицей, содержащей микроцентрифужных трубки с шагом 1,5 в соотношении 1:1; Конечный объем будет 100 мкл (Рисунок 1M).
  9. Осторожно пластина 100 мкл матрицы: смесь клеток из стадии на 1,8 секolidified базальной мембраны матрица покрытием блюдо с шага 1.2 (рис. 1 н). Это позволяет клетки для встраивания в базальной мембраны матрицы.
  10. Передача блюдо (адреса) в инкубаторе для клеточных культур (при 37 ° С с 5% CO 2) и позволяют матрица: смесь клеток затвердеть в течение по крайней мере 30 мин.
  11. После того, как матрица: смесь клеток затвердевает, добавить 2 мл FBS-дополненных RPMI СМИ к блюду (Рисунок 1O) и возьмите блюдо назад инкубатор, где она будет храниться в течение оставшейся части эксперимента (рис. 1P).
  12. Изменение носитель каждый день в течение 5 дней (или в соответствии с требуется для анализа; продолжительность анализа на MDA-MB-231 клеток 5 дней в длину).
  13. Использование светового микроскопа, принять дифференциального интерференционного контраста (DIC) изображения колоний MDA-MB-231, взвешенных в базальной мембраны матрицы (рис. 3А). Image 20 репрезентативных районов в 10 раз Цель раз в деньв течение пяти дней, чтобы определить колонии морфогенез (рис. 3C).
  14. Анализ изображений слепо определить колонии клеток образование звездчатый (рис. 3б). Колония считается севрюга, если один или более выступов от сфероида клеток воспринимаются. Чтобы определить процент инвазивных колоний звездчатых, разделить количество звездчатых колоний общего числа клеточных колоний на получившемся изображении, а затем усреднить звездчатые колонии процент 20 изображений на каждый день.

figure-protocol-4863
Рисунок 1. Трехмерная культуру MDA-MB-231 клеток рака молочной железы в базальной мембраны матрицы (техника посадки). А.Б.) Схема экспериментальной установки (выполненного в вытяжной шкаф). C) а из стеклянным дном блюдо с покрытием50 мкл базальной мембраны матрицы. D) Dish (а) помещают в инкубаторе для клеточных культур (при 37 ° С с 5% CO 2), чтобы разрешить матрицу затвердеть в течение по крайней мере 30 мин обрабатывали трипсином. E) клеток. F ) Клетки ресуспендировали в 15 мл коническую пробирку. GH) Клетки (присутствующие в коническую пробирку) центрифугировали при 100 х г в течение 3 мин в центрифуге тканевой культуры. I) Клеточный осадок J). Клетки (которые были центрифугировали) ресуспендировали в 1 мл FBS-дополненной RPMI среде. K) Клетки подсчитывали с помощью гемоцитометра. L) 2,5 х 10 4 клеток на аликвоты в центрифужную пробирку и завершенный с помощью соответствующего средства массовой информации так, чтобы получить общий объем 50 мкл. M ) Смешать клетки от стадии 1.7 (25000 клеток в 50 мкл) с матрицей, содержащей микроцентрифужных трубки с шагом 1,5 в соотношении 1:1; Конечный объем будет 100 μ.; Л N) Осторожно пластина 100 мкл матрицы: смесь клеток из стадии 8 на затвердевшего матрицы покрытием блюдо из стадии 1,2 O) После того, как матрица: смесь клеток затвердевает, добавляют 2 мл FBS-дополненной RPMI массовой информации. блюдо. Р) Место блюдо в инкубаторе, где она будет храниться в течение оставшейся части эксперимента.

2. Экспертиза морфогенный Особенности 3D культур с иммунофлуоресценции

  1. Установка фразу лоток, холодный растворе с фосфатным буфером (PBS), 20% ацетон: 80% метанол (фиксирующий раствор), а 3% бычьего сывороточного альбумина (BSA; блокирующий раствор) (рис. 2а) до вынимая блюдо (адреса) из инкубатора.
  2. Место блюдо (адреса) на лед в трее и аспирации СМИ, затем промыть 3 раза с 2 мл холодной PBS (рис. 2В).
  3. После того, как последний PBS мытья отсасывают, добавить 2 мл 20% ацетона: 80% раствор метанола в блюдо (ов) (рис. 2С ), чтобы зафиксировать клетки в течение 20 мин при 4 ° С (либо на льду, либо в холодильнике) (рис. 2D).
  4. После 20 мин фиксации прекращается, довести посуду обратно при комнатной температуре, аспирации фиксатор, а затем промыть 3 раза с PBS. После того, как окончательный мытья PBS отсасывают, добавить 2 мл 3% БСА к блюду (ов), чтобы заблокировать в течение по крайней мере 30 мин при комнатной температуре (рис. 2Е).
  5. В течение периода блокировки подготовки разведений первичного (ламинина V 1:100) и вторичными антителами (при соответствующем разведении), растворенного в 3% бычьего сывороточного альбумина (BSA) блокирующем буфере. Обратите внимание, что 400-500 мкл на 'БСА + первичное антитело »решения должны быть добавлены непосредственно на матрице: смесь клеток.
  6. После 30 мин блокировки истек, добавьте первичных антител и инкубируют в течение по крайней мере 1 часа при комнатной температуре (рис. 2F). Обратите внимание, что PBS моет не следует проводить после 30 мин blockinг период.
  7. После завершения этапа 2.6, удалите 'БСА + первичное антитело "решение, и промыть 3 раза с PBS.
  8. Добавьте вторичного антитела, растворенного в 3% БСА (в соответствующем разведении) непосредственно на матрице: смесь клеток, покрыть посуду и выдержать в течение 1 часа при комнатной температуре (рис. 2G).
  9. Снимите 'BSA + вторичное антитело "решение, и промыть 3 раза с PBS.
  10. Добавить 2 мл Hoechst 33258 (1:10000), растворенных в PBS для окрашивания ядер, и инкубировать 5 мин при алюминиевой фольги (или накройте непрозрачным контейнер, чтобы ограничить фотообесцвечивания) (рис. 2H).
  11. После 5 мин инкубации с Hoechst 33258t истекли, мыть посуду (а) 5x с PBS.
  12. Добавить монтажную среду непосредственно на матрице: смесь клеток в конфокальной блюдо и накройте покровным стеклом тщательно, чтобы предотвратить вызывая каких-либо нарушений целостности колоний в базальной мембраны Матрих: смесь клеток (рис. 2I).
  13. Разрешить блюдо (ы) для высыхания на ночь (или 24 ч) при комнатной температуре (рис. 2i). После высыхания, блюдо (а) может храниться при -20 ° С, но настоятельно рекомендуется, что они должны быть отображены как можно быстрее.
  14. Получение изображений с помощью флуоресцентного микроскопа с соответствующими длинами волн лазерного антител, используемых (фиг. 3D-E).

figure-protocol-9935
Рисунок 2. Экспертиза 3D культур по иммунофлюоресценции. .) Схема экспериментальной установки Б) Блюдо (а) помещен на лоток льда и СМИ атмосферный; Впоследствии клетки промывали три раза с 2 мл холодного PBS C) 2 мл 20% ацетона. 80% раствор метанола добавили в чашку (ов) D) фиксации клеток на.20 мин при 4 ° С (либо на льду, либо в холодильнике). E) 2 мл 3% БСА добавлен к чашке (ов), чтобы блокировать, по крайней мере 30 мин при комнатной температуре. F) После 30 мин блокирования истекло, добавьте первичных антител и инкубируют в течение по крайней мере 1 часа при комнатной температуре G) Вторичные антитела, растворенного в 3% БСА (в соответствующем разведении) добавляли непосредственно на базальной мембраны матрицы. смесь клеток; . впоследствии блюда закрывали и инкубировали в течение 1 часа при комнатной температуре H) 2 мл Hoechst (1:10000; растворенного в PBS) добавляется к dishe (ов) и клетки инкубируют в течение 5 мин при алюминиевой фольги I) Монтаж среда добавляется непосредственно. на матрице: смесь клеток в конфокальной блюдо и блюдо покрывается покровным стеклом. Dish (а) оставляют сохнуть в течение ночи (или 24 ч) при комнатной температуре.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Результаты

Примером MDA-MB-231 клеток вторжения в 3D матрицы показана на рисунке 3C. Клетки встроены в матрицу (день 1) и начало формирования инвазивных (звездчатые) структур на 3-й день, и полностью вторжение в матрицу на 5-й день (фиг. 3C). Количество звездчатых колоний, образованных подсч?...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Обсуждение

Развитие 3D методы культивирования клеток позволило исследователям изучить трансформацию молочной эпителиальных клеток, что позволяет нам визуализировать драматические морфологические изменения. Кроме анализа вторжение клеток, единичные или многоклеточные эпителиальные сфероиды ...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Раскрытие информации

Нам нечего раскрывать.

Благодарности

This work was conducted with funds to M.B. from the Canadian Institutes of Health Research (CIHR) grant MOP 107972. M.B. is a recipient of a CIHR New Investigator Salary Award. D.C. is a recipient of studentships from the Translational Breast Cancer Research Unit and the CIHR Strategic Training Program in Cancer Research and Technology Transfer, London Regional Cancer Program. C.G. is recipient of studentships from the Translational Breast Cancer Research Unit, London Regional Cancer Program and from the CIHR- Strategic Training Program in Cancer Research and Technology Transfer. SGD.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Материалы

NameCompanyCatalog NumberComments
1.5 ml tubesVWRCA10011-700Sterile, disposable
100-mm culture dish BD353003VWRCABD353003Sterile, disposable
15 ml Falcon tubeVWRCA21008-918Sterile, disposable
1 ml filtered tipsVWR10011-350Sterile, disposable
200 μl filtered tipsVWR22234-016Sterile, disposable
20 μl filtered tipsVWR22234-008Sterile, disposable
35-mm glass-bottomed Confocal No.1 culture dishes MatTek CorporationP35G-1.0-14-CPrecooled before use
Bovine serum albumin (BSA)BioShopALB003.100Used at 3% for IF
Alexa Fluor 488 Goat Anti-Mouse IgG (H+L) Antibody, highly cross-adsorbedLife Technologies A110291:250 for IF
Alexa Fluor 568 Goat Anti-Rabbit IgG (H+L) AntibodyLife Technologies A110111:1,200 for IF
Anti-Beta-Catenin BD Transduction Laboratories610153Mouse-monoclonal; Used at 1:100 for IF
Fetal bovine serum (FBS)SigmaF1051Used at 10% (v/v) 
Hoechst 33258, Pentahydrate (bis-Benzimide) - 10 mg⁄ml Solution in WaterLife TechnologiesH3569Used at 0.1% (1:10,000 dilution)
InVivo Analyzer Suite Media CyberneticsUsed for 3D culture imaging (DIC images at 10X and 40X)
Kisspeptin-10 (KP-10)EZ BiolabsPT0512100601Used at 100 nM 
Anti-Laminin CedarlaneAB19012(CH)Rabbit-polyclonal full length human; Used at 1:100 for IF
LSM-510 META laser scanning microscope ZeissUsed at 63X objective; oil immersion lens
Matrigel phenol red free (BD356237)VWRCACB356237 Lot No.2180819; 10.4 mg/ml
Olympus IX-81 microscope OlympusUsed for 3D culture imaging (DIC images at 10X and 40X)
Penicillin-streptomycin (10,000 U/ml)Life Technologies15140-122Antibiotic (added to media; used at 0.01%)
10 ml pipetteVWRCA53300-523Sterile, disposeable
RPMI 1640 Medium with GlutamineLife Technologies11875-119Used for culturing of MDA-MB-231 cells
0.25% Trypsin-EDTA (1x), Phenol RedLife Technologies25200-072Used to trypsinize MDA-MB-231 cells
MEGM (bullet kit): MEBM (CC3151)+Single quots (CC4136)LonzaCC-3150Used for culturing of MCF10A cells

Ссылки

  1. Chambers, A. F., Groom, A. C., MacDonald, I. C. Dissemination and growth of cancer cells in metastatic sites. Nat Rev Cancer. 2, 563-572 (2002).
  2. Kramer, N., et al. In vitro cell migration and invasion assays. Mutat Res. 752, 10-24 (2013).
  3. Shaw, K. R., Wrobel, C. N., Brugge, J. S. Use of three-dimensional basement membrane cultures to model oncogene-induced changes in mammary epithelial morphogenesis. J Mammary Gland Biol Neoplasia. 9, 297-310 (2004).
  4. Eccles, S. A., Welch, D. R. Metastasis: recent discoveries and novel treatment strategies. Lancet. 369, 1742-1757 (2007).
  5. Poincloux, R., Lizarraga, F., Chavrier, P. Matrix invasion by tumour cells: a focus on MT1-MMP trafficking to invadopodia. Journal of cell science. 122, 3015-3024 (2009).
  6. Bissell, M. J., Labarge, M. A. Context, tissue plasticity, and cancer: are tumor stem cells also regulated by the microenvironment. Cancer Cell. 7, 17-23 (2005).
  7. Burgstaller, G., Oehrle, B., Koch, I., Lindner, M., Eickelberg, O. Multiplex Profiling of Cellular Invasion in 3D Cell Culture Models. PLoS One. 8, (2013).
  8. Debnath, J., Muthuswamy, S. K., Brugge, J. S. Morphogenesis and oncogenesis of MCF-10A mammary epithelial acini grown in three-dimensional basement membrane cultures. Methods. 30, 256-268 (2003).
  9. Mroue, R., Bissell, M. J. Three-dimensional cultures of mouse mammary epithelial cells. Methods Mol Biol. 945, 221-250 (2013).
  10. Vidi, P. A., Bissell, M. J., Lelievre, S. A. Three-dimensional culture of human breast epithelial cells: the how and the why. Methods Mol Biol. 945, 193-219 (2013).
  11. Bissell, M. J., Rizki, A., Mian, I. S. Tissue architecture: the ultimate regulator of breast epithelial function. Curr Opin Cell Biol. 15, 753-762 (2003).
  12. Debnath, J., et al. The role of apoptosis in creating and maintaining luminal space within normal and oncogene-expressing mammary acini. Cell. 111, 29-40 (2002).
  13. Weaver, V. M., Bissell, M. J. Functional culture models to study mechanisms governing apoptosis in normal and malignant mammary epithelial cells. J Mammary Gland Biol Neoplasia. 4, 193-201 (1999).
  14. Weaver, V. M., Howlett, A. R., Langton-Webster, B., Petersen, O. W., Bissell, M. J. The development of a functionally relevant cell culture model of progressive human breast cancer. Semin Cancer Biol. 6, 175-184 (1995).
  15. Kenny, H. A., Krausz, T., Yamada, S. D., Lengyel, E. Use of a novel 3D culture model to elucidate the role of mesothelial cells, fibroblasts and extra-cellular matrices on adhesion and invasion of ovarian cancer cells to the omentum. Int J Cancer. 121, 1463-1472 (2007).
  16. Cougoule, C., et al. Blood leukocytes and macrophages of various phenotypes have distinct abilities to form podosomes and to migrate in 3D environments. European journal of cell biology. 91, 938-949 (2012).
  17. Sung, K. E., et al. Understanding the Impact of 2D and 3D Fibroblast Cultures on In Vitro Breast Cancer Models. PLoS One. , (2013).
  18. Li, T. T., et al. Beta-arrestin/Ral signaling regulates lysophosphatidic acid-mediated migration and invasion of human breast tumor cells. Mol Cancer Res. 7, 1064-1077 (2009).
  19. Zajac, M., et al. GPR54 (KISS1R) transactivates EGFR to promote breast cancer cell invasiveness. PLoS One. 6, (2011).
  20. Underwood, J. M., et al. The ultrastructure of MCF-10A acini. J Cell Physiol. 208, 141-148 (2006).
  21. Lelievre, S. A., et al. Tissue phenotype depends on reciprocal interactions between the extracellular matrix and the structural organization of the nucleus. Proc Natl Acad Sci U S A. 95, 14711-14716 (1998).
  22. Petersen, O. W., Ronnov-Jessen, L., Howlett, A. R., Bissell, M. J. Interaction with basement membrane serves to rapidly distinguish growth and differentiation pattern of normal and malignant human breast epithelial cells. Proc Natl Acad Sci U S A. 89, 9064-9068 (1992).
  23. Weaver, V. M., et al. beta4 integrin-dependent formation of polarized three-dimensional architecture confers resistance to apoptosis in normal and malignant mammary epithelium. Cancer Cell. 2, 205-216 (2002).
  24. Cvetkovic, D., et al. KISS1R Induces Invasiveness of Estrogen Receptor-Negative Human Mammary Epithelial and Breast Cancer Cells. Endocrinology. , 1999-2014 (2013).
  25. Alemayehu, M., et al. beta-Arrestin2 regulates lysophosphatidic acid-induced human breast tumor cell migration and invasion via Rap1 and IQGAP1. PLoS One. , (2013).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи

Запросить разрешение

Смотреть дополнительные статьи

88ECM3D

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Конфиденциальность

Условия эксплуатации

Политика

СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

РЕКОМЕНДОВАТЬ БИБЛИОТЕКЕ

НОВОСТИ JoVE

Исследования

Образование

АВТОРЫ

Библиотекарь

О JoVE

Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены