JoVE Logo
АВТОРЫ
СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

Войдите в систему

Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.

В этой статье

  • Резюме
  • Аннотация
  • Введение
  • протокол
  • Результаты
  • Обсуждение
  • Раскрытие информации
  • Благодарности
  • Материалы
  • Ссылки
  • Перепечатки и разрешения

Резюме

Это биологический анализ использует модель хищной рыбы, чтобы оценить наличие питания, сдерживания метаболитов из органических экстрактов тканей морских организмов на природных концентраций с использованием питательно, сравнимую пищи матрицу.

Аннотация

Marine chemical ecology is a young discipline, having emerged from the collaboration of natural products chemists and marine ecologists in the 1980s with the goal of examining the ecological functions of secondary metabolites from the tissues of marine organisms. The result has been a progression of protocols that have increasingly refined the ecological relevance of the experimental approach. Here we present the most up-to-date version of a fish-feeding laboratory bioassay that enables investigators to assess the antipredatory activity of secondary metabolites from the tissues of marine organisms. Organic metabolites of all polarities are exhaustively extracted from the tissue of the target organism and reconstituted at natural concentrations in a nutritionally appropriate food matrix. Experimental food pellets are presented to a generalist predator in laboratory feeding assays to assess the antipredatory activity of the extract. The procedure described herein uses the bluehead, Thalassoma bifasciatum, to test the palatability of Caribbean marine invertebrates; however, the design may be readily adapted to other systems. Results obtained using this laboratory assay are an important prelude to field experiments that rely on the feeding responses of a full complement of potential predators. Additionally, this bioassay can be used to direct the isolation of feeding-deterrent metabolites through bioassay-guided fractionation. This feeding bioassay has advanced our understanding of the factors that control the distribution and abundance of marine invertebrates on Caribbean coral reefs and may inform investigations in diverse fields of inquiry, including pharmacology, biotechnology, and evolutionary ecology.

Введение

Химическая экология, разработанные в рамках сотрудничества химиков и экологов. В то время как раздел науки земного химической экологии была вокруг в течение некоторого времени, что морской химической экологии только несколько десятилетий назад, но при условии, важную информацию в эволюционной экологии и сообщества структуры морских организмов 1-8. Воспользовавшись тем, что возникающих технологий подводного плавания и ЯМР-спектроскопии, химики-органики быстро породил множество публикаций, описывающих новые метаболитов из донных морских беспозвоночных и водорослей в 1970-х и 1980-х годов 9. Если предположить, что вторичные метаболиты должны служить какой-то цели, многие из этих публикаций, приписываемых экологически важных свойства новых соединений без эмпирического доказательства. Примерно в то же время, экологи также воспользовавшись появлением подводное плавание и описания распределений и изобилие донных животных и растений, ранее известных сюдам относительно неэффективные методы отбора проб, например дноуглубительных работ. Предположение этих исследователей в том, что ничего сидячие и мягкотелые должны быть химически защищена, чтобы избежать потребления хищниками 10. В попытке ввести эмпиризма, что было иначе описательный работа по видам распространенности, некоторые экологи начали экстраполяции химической защиты от анализов токсичности 11. Большинство анализов токсичности участие экспозицию целая рыба или другие организмы в водной суспензии сырых органических экстрактов беспозвоночных тканей, с последующим определением сухих массовых концентраций экстрактов, ответственных за убийство половиной анализа организмов. Тем не менее, токсичность анализы не подражать манеру, в которой потенциальные хищники воспринимают добычу в естественных условиях, а последующие исследования не обнаружили никакой связи между токсичностью и вкусовых 12-13. Удивительно, что публикации в престижных журналах использовали методы, имеющие мало или вообще не Ecológicaл актуальность 14-15, и что эти исследования все еще ​​широко цитируется сегодня. Это еще более тревожный отметить, что исследования, основанные на данных о токсичности продолжают издаваться 16-18. Метод биоанализ описано здесь был разработан в конце 1980-х годов, чтобы обеспечить экологически соответствующую подход к морской химических экологов оценить antipredatory химической защиты. Метод требует модель хищника попробовать сырой органический экстракт из целевого организма в естественной концентрации в питательной ценности, сравнимой пищевой матрицы, обеспечивая вкусовые данные, которые являются более экологически значимым, чем данные о токсичности.

Общий подход к оценке antipredatory деятельность тканях морских организмов включает в себя четыре важных критериев: (1) соответствующая широкого хищник должен использоваться в кормлении анализов, (2) органические метаболиты все полярности должна быть исчерпывающим, извлеченный из ткани организма-мишени, (3) метаболиты должны бе смешивают в соответствующей питательной ценности экспериментальной пищи, в то же объемной концентрации, как обнаружено в организме, из которого они были извлечены, и (4) опытно-конструкторских и статистический подход должен обеспечить смысл метрики указывают относительную distastefulness.

Процедура, описанная ниже, предназначена специально для оценки antipredatory химической защиты в Карибском морских беспозвоночных. Мы используем bluehead хейлин, Thalassoma bifasciatum, в качестве образца хищных рыб, потому что этот вид встречается на Карибских коралловых рифов и, как известно попробовать широкий ассортимент донных беспозвоночных 19. Ткань из организма-мишени сначала экстрагируют, а затем в сочетании с пищевой смеси, и, наконец, предложено групп Т. bifasciatum наблюдать отказаться ли они извлекать обработанные пищевые продукты. Аналитические данные, используя этот метод предоставили важную информацию в оборонительной химии морских организмов 12,20-21, лИстория IFE компромиссы 22-24, и экологии сообществ 25-26.

протокол

ПРИМЕЧАНИЕ: Шаг 3 этого протокола включает позвоночных предметы животного. Процедура была разработана таким образом, чтобы животные получали наиболее гуманное обращение возможно и был одобрен уходу и использованию комитета за животными (IACUC) при Университете Северной Каролины Уилмингтон мимо.

1) Ткань Добыча

  1. Используйте ткань, которая в своем естественном состоянии гидратации и не сдавливается, Сухие или чрезмерно влажным, так как это приведет к изменению объемной концентрации вторичных метаболитов. Нарезать на куски ткани или кусочков, которые могут быть вставлены в 50 мл центрифужную пробирку. Примечание: свежей ткани могут быть использованы в некоторых случаях, но это часто лучше, чтобы нарезать замороженной ткани, которое не подлежит сжатию при разрезании.
  2. Добавить кусочки ткани с 30 мл 1: 1 смеси дихлорметана (DCM) и метанола (MeOH) в градуированной центрифужной пробирке до конечного объема 40 мл достигается. Будьте уверены, чтобы провести все этапы, связанные с переходомрастворитель в вытяжку с достаточной вентиляцией.
  3. Закройте пробирку крышкой и перевернуть ее несколько раз, а затем агитировать повторно в течение периода извлечения 4 ч. Примечание: В течение этого периода, вода соединяется с MeOH и полученный метанол: водная фаза отделяется от фазы DCM. Ткань попеременно подвергается воздействию ДХМ и MeOH: вода в виде эмульсии в пробирки перемешивают.
  4. Передача экстракт DCM в круглодонную колбу и упаривают досуха на роторном испарителе с использованием медленном огне (<40 ° С). Используя минимальное растворитель, передавать высушенного экстракта в сцинтилляционный флакон 20 мл. Установить флакон с помощью роторного испарителя адаптера и снова выпаривают досуха на роторном испарителе с использованием медленном огне (<40 ° С).
    Примечание: следующий шаг требует использования самодельной сжатия инструмент, который может быть собран путем завинчивания следующие пункты в последовательном порядке на конец резьбового стержня: (1) гайкой (2) Стиральная машина и (3) желудь гайки. Машина должна быть либо перфорирована илиустановлены таким образом, что она меньше, чем внутренний диаметр в 50 мл центрифужную пробирку.
  5. Возвращаясь к градуированной центрифужной пробирке, содержащей ткани и МеОН: водный экстракт, выжать экстракционной среды из ткани в результате сжатия. Передача МеОН: водный экстракт с тем же круглодонную колбу и хранить охлажденной (<10 ° С).
  6. Добавить МеОН в градуированной центрифужной пробирке до теперь обезвоженной ткани погружают на второй экстракции 2 до 6 продолжительности ч, а затем передать новый МеОН извлечь к охлажденной круглодонную колбу, содержащую метанол: водный экстракт. Если есть какие-либо опасения, что ткань не была полностью извлечена, повторите от 2 до 6 ч добычу MeOH.
  7. Высушите MeOH на роторном испарителе, используя слабом огне (<40 ° C). Передача оставшийся водный экстракт из круглодонную колбу в сцинтилляционный флакон, содержащий высушенный неполярный экстракт, используя минимальный объем метанола, чтобы промыть колбу с круглым дном.
  8. Еvaporate водного экстракта досуха с использованием слабом огне (<40 ° C) на вакуумном концентраторе. Сцинтилляционный флакон теперь содержит общую сухую сырой органический экстракт 10 мл ткани. Эвакуировать из головы пространство флакона с N 2 газа для предотвращения окисления, плотно прилегают и хранить замороженные (-20 ° C).

2) Приготовление блюд

  1. Подготовка замораживания-сушеных кальмаров мантии порошок.
    Замечание: Squid мантии служит источником питания, который сопоставим с другими донными беспозвоночными, и будет использоваться в качестве ингредиента в подэтапы 2,2.
    1. Размораживайте кольца кальмаров мантии в теплой деионизированной (DI) водой, а затем протрите их в высокоскоростной смеситель.
    2. Налейте тонкий слой пюре из кальмаров мантии на мелкой листа и замораживания (-20 ° C) печенья, затем перерыв лист замороженного кальмара пюре на мелкие кусочки, чтобы быть лиофилизированы.
    3. Лиофилизации замороженного кальмара мантии пюре По итогам работы процедур FREeze-осушитель.
    4. Распылить лиофилизированные кусочки кальмара мантии пюре в высокоскоростном смесителе с образованием порошка.
    5. В вытяжном шкафу, залить порошкообразного кальмара мантию во вращательное муки сито и просеять, чтобы отделить большие куски ткани из тонкого порошка.
    6. Передача тонкий порошок кальмар мантию в герметичный контейнер. Эвакуировать из головы пространство контейнера с N 2 газа, чтобы предотвратить окисление и сохранить в замороженном состоянии (-20 ° C).
  2. Готовить пищу смеси.
    Примечание: При выполнении нескольких последовательных анализов, целесообразно готовить ~ 100 мл пищевой смеси, однако этот рецепт может быть расширена до меньших объемах, если это необходимо.
    1. Зерноуборочный смесь 3 г альгиновой кислоты и 5 г высушенных вымораживанием кальмара мантии порошка с 100 мл дистиллированной воды в химическом стакане объемом 150 мл. Перемешивают энергично с microspatula в течение нескольких минут, пока порошок не является полной гидратации и смесь однородна.
      Примечание: Если необходимо, пищевой краситель может быть добавлен в этом стEP: это проще добавить краситель пищевой смеси, которая будет генерировать и лечил и смеси управления (маскировка естественный пигмент экстракта в экстракте обработке смеси), а не пытаться соответствовать цвету экстракта обрабатывают смесью, добавив краситель с контрольной смесью. Зеленоватого или коричневатого пищевой краситель часто желательно, чтобы замаскировать любые пигменты в неочищенного экстракта.
    2. Загрузка ровно 10 мл пищевой смеси в градуированный шприц. Будьте осторожны, чтобы избежать включения пузырьков воздуха во время этого процесса.
    3. Снимите 20 мл сцинтилляционный флакон с сухим сырой органический экстракт из морозильника. Добавить каплю или две метанола, затем добавьте экстракт в виде гомогенной смеси с microspatula.
    4. Извлеките загруженную 10 мл шприц пищевой матрицы в сцинтилляционный флакон 20 мл и перемешать с microspatula для гомогенизации экстракт обработанного пищевого смеси.
      Примечание: Это может помочь извлечь шприц с меньшим шагом (т.е. извлечь 2 мл и гомогенизации, затем R.EPEAT, пока все 10 мл были гомогенизировали).
  3. Подготовка анализа гранул.
    1. Загрузка очень маленький объем экстракта смеси (~ 1 мл) в шприц, и погрузить наконечник шприца в растворе 0,25 М CaCl 2. Извлечь содержимое шприца, чтобы сформировать длинный, спагетти, как прядь.
    2. Через несколько минут, снимите затвердевший прядь, рубить его на 4 мм в длину гранул на стекло разделочная доска с бритвенным лезвием, затем смойте в морской воде.
    3. Повторите шаги 2.3.1 и 2.3.2, не включая экстракт ткани, чтобы сделать контроля гранул. Обязательно для лечения управления гранул с эквивалентным объемом растворителя (см добавление МеОН в обработанной смеси на стадии 2.2.3) для контроля того растворителей. Если отрицательный контроль желательно, чтобы подтвердить, что анализ рыба может быть удержаны от кормления, добавьте Денатониум бензоат в концентрации 2 мг мл -1 в смеси сырых продуктов 27.

3) ВкусовыеБиопробы

  1. Выполните кормления анализов с пойманной желто-фазы bluehead губанов, Thalassoma bifasciatum, держали в группах по три в непрозрачной односторонних отсеков лабораторного аквариумах.
  2. Доставка пищевых гранул из химическом стакане морской воды с помощью стеклянной пипетки с резиновой грушей. Примечание: Это может занять несколько дней, чтобы обучить рыбу получить пищу таким образом. Условного стимула (например, несколькими нажатиями пипетки на стекле аквариума), который предшествует доставку продовольствия может быть полезно для обучения рыбу ожидать добавление пищевых гранул.
  3. Забив гранул. Рассмотрим осадок принятым, если быстро поглощается рыбами. Рассмотрим осадок отклонены, если не ел после как минимум трех попыток одним или несколькими рыбе, чтобы взять ее в свою полости рта, или если осадок подошел и игнорируются после одной такой попытки.
  4. Скоринг образцы. Примечание: процедура анализа изображается в виде блок-схемы на рисунке 1 группы рыб, которые отказываются есть.управления гранулы на любом этапе в протоколе не рассматриваются. Есть два потенциальных результатов одного прогона анализа: Образец приняты или отклонены.
    1. Начните с контрольной гранулы подтвердить, что группа рыбы кооператива. Предложение обработанного осадка. Если рыба принять обработанного осадка, оценка образца, как принято. Если рыба отклонить обработанного осадка, предлагают последующее осадок управления, чтобы определить, была ли рыба перестала подавать. Если рыба принять последующий контроль осадок, оценка образца отклоненным.
  5. Репликация. Повторите процедуру анализа с десяти независимых групп рыб для каждого экстракта.

4) оценка значимости

  1. Оценка значимости различий в потреблении контроля против обработанных гранул с модифицированной версии точного критерия Фишера 26. Изменить тест, так что маргинальные суммы для контрольных и обработанных гранулы фиксированной, Рассматривая их как в виде случайных выборок. Примечание: Это обеспечивает р = 0,057 при 7 гранулы едят; Следовательно, любая экстракт считается сдерживающим фактором, если 6 или меньше гранулы едят, и приемлемым, если 7 или более гранулы едят.
  2. Для сравнения относительной вкусовой привлекательности среди групп экстрактов, вычислить среднее количество гранул, съеденного в пределах каждой группы. Хранить порог в 6 таблеток, так группа повторных экстрактов считаются сдерживающим фактором, если среднее количество гранул ел + стандартная ошибка (SE) ≤6. Примечание: В представительных результатов, назначение группа видов, так копируют экстракты приходят из разных людей, и относительно вкусовых качеств можно сравнить между видами.

Результаты

Здесь мы сообщаем результаты этого биотестирования для шести видов общих Карибского бассейна губки (рис 2). Эти данные первоначально были опубликованы в 1995 году Павлика и др. 12 и продемонстрировать силу этого подхода для обследования различия в химических оборонной...

Обсуждение

Процедура описана здесь, обеспечивает относительно простой, экологически соответствующий лабораторный протокол для оценки antipredatory химические защитные в морских организмов. Здесь мы рассмотрим важные критерии, которые удовлетворяют этим набором методов:

(1) Подходит

Раскрытие информации

The authors declare that they have no competing financial interests.

Благодарности

We thank James Maeda and Aaron Cooke for assistance with the filming and editing of this video. Funding was provided by the National Science Foundation (OCE-0550468, 1029515).

Материалы

NameCompanyCatalog NumberComments
DichloromethaneFisher ScientificD37-20
MethanolFisher ScientificA41220
Anhydrous Calcium ChlorideFisher ScientificC614-500
Cryocool Heat Transfer FluidFisher Scientific20-548-146For vacuum concentrator
Alginic Acid Sodium Salt High ViscosityMP Biomedicals154723
Squid mantle ringsN/AN/ACan be purchased at grocery store
Denatonium benzoateAldrichD5765
50 ml graduated centrifuge tubeFisher Scientific14-432-22
20 ml scintillation vialFisher Scientific03-337-7
Disposable Pasteur pipetsFisher Scientific13-678-20D
Rubber bulbs for Pasteur pipetsFisher Scientific03-448-24
Red bulbs for pellet deliveryFisher Scientific03-448-27
250 ml round-bottom flaskFisher Scientific10-067E
Scintillation vial adapter for rotavapFisher ScientificK747130-1324
WeightboatsFisher Scientific02-202B
MicrospatulaFisher Scientific21-401-10
5 ml graduated syringeFisher Scientific14-817-53
10 ml graduated syringeFisher Scientific14-817-54
Razor bladeFisher ScientificS17302

Ссылки

  1. Paul, V. J., ed, . Ecological roles of marine natural products. , (1992).
  2. Pawlik, J. R. Marine invertebrate chemical defenses. Chemical Reviews. 93 (5), 1911 (1993).
  3. Hay, M. E. Marine chemical ecology: what's known and what's next. Journal of Experimental Marine Biology and Ecology. 44 (5), 476-476 (1996).
  4. McClintock, J. B., Baker, B. J. . Marine Chemical Ecology. , (2001).
  5. Amsler, C. D. . Algal Chemical Ecology. , (2008).
  6. Hay, M. E. Marine chemical ecology: Chemical signals and cues structure marine populations, communities, and ecosystems. Annual Review of Marine Science. 1, 193-212 (2009).
  7. Pawlik, J. R. The chemical ecology of sponges on Caribbean reefs: Natural products shape natural systems. BioScience. 61 (11), 888 (2011).
  8. Pawlik, J. R. Antipredatory Defensive Roles of Natural Products from Marine Invertebrates. Handbook of Marine Natural Products. , 677-710 (2012).
  9. Pawlik, J. R., Amsler, C. D., Ritson-Williams, R., McClintock, J. B., Baker, B. J., Paul, V. J. Marine Chemical Ecology: A Science Born of Scuba. . Research and Discoveries: The Revolution of Science through Scuba. 39, 53-69 (2013).
  10. Randall, J. E., Hartman, W. D. Sponge-feeding fishes of the West Indies. Marine Biology. 1, 216-225 (1968).
  11. Bakus, G. J., Green, G. Toxicity in sponges and holothurians — geographic pattern. Science. 185, 951-953 (1974).
  12. Pawlik, J. R., Chanas, B., Toonen, R. J., Fenical, W. Defenses of Caribbean sponges against predatory reef fish. 1. Chemical deterrency. Marine Ecology Progress Series. 127, 183-194 (1995).
  13. Schulte, B. A., Bakus, G. J. Predation deterrence in marine sponges — laboratory versus field studies. Bulletin of Marine Science. 50, 205-211 (1992).
  14. Jackson, J. B. C., Buss, L. Allelopathy and spatial competition among coral reef invertebrates. Proceedings of the National Academy of Sciences. 72, 5160-5163 (1975).
  15. Bakus, G. J. Chemical defense mechanisms on the great barrier reef. Australia. Science. 211, 497-499 (1981).
  16. Gemballa, S., Schermutzki, F. Cytotoxic haplosclerid sponges preferred: a field study on the diet of the dotted sea slug Peltodoris atromaculata (doridoidea: nudibranchia). Marine Biology. 144, 1213-1222 (2004).
  17. Voogd, N. J., Cleary, D. F. R. Relating species traits to environmental variables in Indonesian coral reef sponge assemblages. Marine and Freshwater Research. 58, 240-249 (2007).
  18. Mollo, E., et al. Factors promoting marine invasions: a chemolecological approach. Proceedings of the National Academy of Sciences. 105, 4582-4586 (2008).
  19. Randall, J. E. Food habits of reef fishes of the West Indies. Studies in Tropical Oceanography. 5, 665-847 (1967).
  20. O'Neal, W., Pawlik, J. R. A reappraisal of the chemical and physical defenses of Caribbean gorgonian corals against predatory fishes. Marine Ecology Progress Series. 240, 117-126 (2002).
  21. Hines, D. E., Pawlik, J. R. Assessing the antipredatory defensive strategies of Caribbean non-scleractinian zoantharians (Cnidaria): is the sting the only thing. Marine Biology. 159 (2), 389-398 (2012).
  22. Walters, K. D., Pawlik, J. R. Is there a trade-off between wound-healing and chemical defenses among Caribbean reef sponges. Integrative and Comparative Biology. 45 (2), 352-358 (2005).
  23. Leong, W., Pawlik, J. R. Evidence of a resource trade-off between growth and chemical defenses among Caribbean coral reef sponges. Marine Ecology Progress Series. 406, 71-78 (2010).
  24. Leong, W., Pawlik, J. R. Comparison of reproductive patterns among 7 Caribbean sponge species does not reveal a resource trade-off with chemical defenses. Journal of Experimental Marine Biology and Ecology. 401 (1-2), 80-84 (2011).
  25. Pawlik, J. R., Loh, T. -. L., McMurray, S. E., Finelli, C. M. Sponge Communities on Caribbean Coral Reefs Are Structured by Factors That Are Top-Down, Not Bottom-Up. PLoS ONE. 8 (5), e62573 (2013).
  26. Loh, T. -. L., Pawlik, J. R. Chemical defenses and resource trade-offs structure sponge communities on Caribbean coral reefs. Proceedings of the National Academy of Science. 111, 4151-4156 (2014).
  27. Miller, A. M., Pawlik, J. R. Do coral reef fish learn to avoid unpalatable prey using visual cues. Animal Behaviour. 85, 339-347 (2013).
  28. Pawlik, J. R., Fenical, W. A re-evaluation of the ichthyodeterrent role of prostaglandins in the Caribbean gorgonian coral, Plexaura homomalla. Marine Ecology Progress Series. 52, 95-98 (1989).
  29. Fenical, W., Pawlik, J. R. Defensive properties of secondary metabolites from the Caribbean gorgonian coral Erythropodium caribaeorum. Marine Ecology Progress Series. 75, 1-8 (1991).
  30. Pawlik, J. R., Fenical, W. Chemical defense of Pterogorgia anceps, a Caribbean gorgonian coral. Marine Ecology Progress Series. 87, 183-188 (1992).
  31. Chanas, B., Pawlik, J. R. Does the skeleton of a sponge provide a defense against predatory reef fish. Oecologia. 107 (2), 225-231 (1996).
  32. Chanas, B., Pawlik, J. R., Lindel, T., Fenical, W. Chemical defense of the Caribbean sponge Agelas clathrodes (Schmidt). Journal of Experimental Marine Biology and Ecology. 208 (1-2), 185-196 (1997).
  33. Wilson, D. M., Puyana, M., Fenical, W., Pawlik, J. R. Chemical defense of the Caribbean reef sponge Axinella corrugata against predatory fishes. Journal of Chemical Ecology. 25 (12), 2811-2823 (1999).
  34. Chanas, B., Pawlik, J. R. Defenses of Caribbean sponges against predatory reef fish II. Spicules, tissue toughness, and nutritional quality. Marine Ecology Progress Series. 127 (1), 195-211 (1995).
  35. Albrizio, S., Ciminiello, P., Fattorusso, E., Magno, S., Pawlik, J. R. Amphitoxin, a new high molecular weight antifeedant pyridinium salt from the Caribbean sponge Amphimedon compressa. Journal of Natural Products. 58 (5), 647-652 (1995).
  36. Assmann, M., Lichte, E., Pawlik, J. R., Köck, M. . Chemical defenses of the Caribbean sponges Agelas wiedenmayeri and Agelas conifera. Marine Ecology Progress Series. 207, 255-262 (2000).
  37. Kubanek, J., Fenical, W., Pawlik, J. R. New antifeedant triterpene glycosides from the Caribbean sponge Erylus Formosus. Natural Product Letters. 15 (4), 275-285 (2001).
  38. Pawlik, J. R., McFall, G., Zea, S. Does the odor from sponges of the genus Ircinia protect them from fish predators. Journal of Chemical Ecology. 28 (6), 1103-1115 (2002).
  39. Waddell, B., Pawlik, J. R. Defenses of Caribbean sponges against invertebrate predators. I. Assays with hermit crabs. Marine Ecology Progress Series. 195, 125-132 (2000).
  40. Waddell, B., Pawlik, J. R. Defense of Caribbean sponges against invertebrate predators. II. Assays with sea stars. Marine Ecology Progress Series. 195, 133-144 (2000).
  41. Burns, E., Ifrach, I., Carmeli, S., Pawlik, J. R., Ilan, M. Comparison of anti-predatory defenses of Red Sea and Caribbean sponges. I. Chemical defense. Marine Ecology Progress Series. 252, 105-114 (2003).
  42. Jones, A. C., Blum, J. E., Pawlik, J. R. Testing for defensive synergy in Caribbean sponges: Bad taste or glass spicules. Journal of Experimental Marine Biology and Ecology. 322 (1), 67 (2005).

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи

Запросить разрешение

Смотреть дополнительные статьи

95

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Конфиденциальность

Условия эксплуатации

Политика

СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

РЕКОМЕНДОВАТЬ БИБЛИОТЕКЕ

НОВОСТИ JoVE

Исследования

Образование

АВТОРЫ

Библиотекарь

О JoVE

Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены