Использование сенсорного вызванной реакции и локомоции Анализы для оценки производительности мышц и функции в данио рерио

Резюме

Zebrafish are an excellent model to study muscle function and disease. During early embryogenesis zebrafish begin regular muscle contractions producing rhythmic swimming behavior, which is altered when the muscle is disrupted. Here we describe a touch-evoked response and locomotion assay to examine swimming performance as a measure of muscle function.

Аннотация

Развитие рерио мышц высоко консервативен с системами млекопитающих делает их отличной моделью для изучения мышечной функции и болезни. Многие миопатия, влияющие на функции скелетных мышц может быть быстро и легко оценить в данио в течение первых нескольких дней эмбриогенеза. К 24 ч после оплодотворения (ФВЧ), дикого типа данио спонтанно сокращаться свой хвост мышцы и на 48 часов после оплодотворения, данио экспоната контролируемое плавание поведения. Снижение частоты, или другие изменения в эти движения могут свидетельствовать о дисфункции скелетной мускулатуры. Для анализа поведения плавания и оценить работу мышц в начале данио развития, мы используем оба прикосновению вызвали отклика и локомоции анализы побега.

Анализы ответа эвакуации Сенсорные вызванные могут быть использованы для оценки производительности мышц во время коротких движений лопнувших в результате сокращения быстро сокращающихся мышечных волокон. В ответ на внешний стимул, который в данном случае является нажатие наголова, дикого типа данио через 2 дня после оплодотворения (DPF), как правило, обладают мощным всплеском купанием, сопровождающееся резкими поворотами. Наш метод квантифицирует функции скелетных мышц путем измерения максимального ускорения во время движения плавательного взрыв, ускорение прямо пропорционально силе, вызванной сокращением мышц.

В противоположность этому, локомоции анализы на ранних стадиях развития данио личиночной используются для оценки производительности мышц в течение длительных периодов активности мышц. С помощью системы слежения, чтобы отслеживать поведение плавание, мы получим автоматизированный расчет частоты активности и расстояния в 6-дневного возраста данио, отражающую их функции скелетных мышц. Измерения производительности плавания являются ценными для оценки фенотипического моделей заболеваний и высокопроизводительного скрининга мутаций или химических обработок, влияющих на функции скелетных мышц.

Введение

За последнее десятилетие данио все чаще используется для изучения биологии клетки мышц и болезни. Быстрое внешнее развитие данио эмбриона, в сочетании с его оптической прозрачностью, позволяет прямой визуализации формирования мышц, роста и функции. Процесс развития мышц высоко консервативен в данио , и это позволило успешное моделирование целого ряда мышечных заболеваний , в том числе мышечной дистрофии и врожденных миопатий ^1-8. Подробное исследование данио моделей не только обеспечил новые идеи в патобиологии этих условий , но и предоставляет платформу для тестирования подходящих методов лечения ^6,9-13.

Анализ данио моделей мышечных заболеваний зависит от надежных и воспроизводимых анализов для измерения производительности мышц. Предыдущие исследования показали, успешно измерили генерирующую способность силы данио ствола мышцы у рыб между 3 и 7 DPF путемэлектрически стимулируя сокращение иммобилизованной рыбы , прикрепленной к системе ¹⁴ силы трансдукции. Это может обеспечить детальные измерения силы, но не идеально подходят для более высоких экспериментов пропускной способности и есть преимущества для измерения производительности мышц во время плавания. На 2 DPF данио мышцы является полностью функциональной и рыба может вызвать взрыв плавательные движения в ответ на раздражители. Анализ реакции побег сенсорный -позволяют используется для измерения ускорения во время движения плавательного взрыв, который может быть использован в качестве меры сжимающей силы.

Одним из наиболее используемых мер мышечной функции в миопатия пациентов тест прогулки 6 мин, который записывает общее расстояние ходил по твердой ровной поверхности ^15,16. Мы применили сопоставимый тест для измерения мышечной функции в 6 денье, данио личинок, в результате чего мы контролируем общее расстояние плавал, а общее количество движений, сделанных каждым личинку в течение 10 мин. Это выполняетсяс помощью автоматизированной системы слежения, которая обеспечивает надежную и высокую пропускную способность измерения производительности мышц. Обе мышечные тесты хорошо воспроизводимым и были использованы для количественной оценки различий в производительности мышц в данио миопатия моделей ^8.

протокол

1. Сенсорный вызванных Анализ отклика

1. Получение 2 денье Эмбрионы для сенсорного вызванных Пробирной Response
   1. Убедитесь в том, что время суток , при котором проводится испытание согласуется между экспериментами , потому что активность может резко меняться в течение дня ^17,18.
      Примечание: Эксперимент следует проводить ослеплен и порядок испытаний рандомизированы для минимизации экспериментальных артефактов.
   2. Назначают рыбы штаммов число, которое неизвестно для человека проведения эксперимента. После этого, используя свободно доступные онлайновые инструменты генерируют случайный список, который диктует порядок тестирования.
   3. По крайней мере за один час до тестирования, dechorionate эмбрионов, разрывая отверстие в хориона и осторожно потянув хориона друг от друга с помощью пары тонких пинцетом. Удалите мусор из чашек Петри, прежде чем вернуться к 28 ° С инкубатор.
2. Выполнение Touch-вызванных Пробирной Response
   1. Тепло STAGE до 28 ° С, по меньшей мере 15 минут до начала тестирования.
      Примечание: Этот этап контролируется температура и останется на уровне 28   ° C на время тестирования. Температура будет влиять на активность, и поэтому важно поддерживать постоянную температуру. Если нагретый стадия не доступна, то температура воды должна контролироваться и все эксперименты должны проводиться при той же температуре.
   2. Поместите чашку Петри , наполненную эмбриона среды (5 мМ NaCl, 0,17 мм KCl, 0,33 мМ CaCl _2, 0,33 мМ MgSO ₄ в воде) на освещенной сцене и смонтировать камеру высокоскоростной над чашку Петри.
   3. Запустите программное обеспечение для записи видео камеры (например, поток Pix 5, описанной здесь) и на вкладке "рабочее пространство" выберите 1000 кадров в секунду (1000 кадров в секунду) в качестве скорости захвата, чтобы обеспечить быстрое действие плавание рыбы записывается.
   4. Работая с одним эмбрионом в то время, поместите эмбриона в Middле чашки Петри с данио хорошо видны в поле зрения.
      Примечание: Если эмбрион уплывает до начала эксперимента заменить его на другой, так как улавливании и позиционирование эмбриона может привести к ее становится нечувствительным к стимулу и повторных реакций лопнувших может способствовать мышечной слабости в некоторых моделях болезни.
   5. Начните запись, нажав на кнопку "запись" и доставить механосенсорных стимул к эмбриону, прикоснувшись к нему осторожно тупой иглой на верхней части головы.
   6. Остановить запись после того, как эмбрион плавал из поля зрения или возвращен в состоянии покоя.
      Примечание: Пики ускорения в пределах первой 0,2 сек всплеска реакции убегания следующие механического стимула. Поэтому убедитесь, что по крайней мере в течение первой 0,2 сек побега ответа записи рыба находится в поле зрения. С помощью программного обеспечения, описанного в шаге 1.2.3, данные автоматически будут сохраненыкак .avi видео файл. Альтернативное видео захвата программного обеспечения, такие как Free Video Capture или Softonic, оба из которых находятся в свободном доступе для скачивания, также могут быть использованы.
   7. Возвращение эмбриона в новую чашку Петри и выбрать другой эмбриона для тестирования. Проводим тестирование на минимум 15 рыб.
3. Количественное плаванию поведения
   1. Для количественной оценки поведения бассейн, запустите программу и выберите "Single личинками Locomotion без вычитания фона" модуль , чтобы открыть сохраненный .avi видео файл.
   2. Используя "или" от руки "Полигон" инструмент в строке меню выберите областей фильма, которые будут использоваться для анализа. Убедитесь в том, что регион включает в себя как исходное положение рыбы и области, что рыба будет плавать в. Убедитесь, что зонд исключен из области, которые необходимо проанализировать. Программное обеспечение будет автоматически отслеживать траекторию рыбы в нужной области.
   3. Для выполнения тон анализ, нажмите на "эксперимент" в строке меню и выберите пункт "выполнить". При запросе сохранения файла необработанных анализа данных (.phr формат) в нужном месте. После сохранения, нажмите на кнопку "Пуск", чтобы начать анализ. Завершить анализ, нажав на "стоп" в рамках "эксперимента" в раскрывающемся меню. На экране появится окно, содержащее результаты.
   4. Выделите вправо, чтобы получить "Максимальное ускорение" значение. При желании экспортировать эти данные, закрыв окно результатов и нажав на кнопку "Экспорт мгновенный результат" под "результатами" в раскрывающемся меню. Выберите соответствующий файл необработанного анализа данных и нажмите на открытой. Текстовый файл, который можно открыть в программе электронных таблиц будут сохранены в папке назначения.
   5. Повторите этот процесс для каждой отдельной рыбы и в среднем , чтобы получить среднее максимальное ускорение для каждого штамма (см рисунок 1).
      Примечание: В качестве альтернативы Усинг программное обеспечение, описываемое здесь, подобные пакеты, такие как свободно доступное программное обеспечение ImageJ могут быть использованы для извлечения соответствующих данных о движении. Плагин 3D Particle Tracker может быть использован для отслеживания траектории плавания.

2. Передвижение Анализ - 10 мин плавательного теста

1. Получение 6 денье зародыши для плавания анализа
   1. При необходимости, своего рода зародыши для требуемого генотипа, например путем анализа экспрессии флуоресцентного белка или по фенотипу, и помещают в отдельную чашку Петри (25-30 эмбрионов на чашку). В качестве альтернативы, генотип может быть определена после завершения анализа передвижению.
   2. В 3 денье, перепроверять чашку Петри и удалить невыведенное эмбрионов и мусора. возвращения чашки Петри 28 ° C инкубаторе до 6 денье.
   3. Проводим тестирование всех штаммов с 9 утра до 12 часов вечера, что время, в которое данио личинки являются наиболее активными. Перемешать порядок тестирования и позиции в рв конце дикого типа и мутантных образцов, чтобы минимизировать влияние циркадных различий и других экспериментальных смещения.
      Примечание: Важно, чтобы время тестирования согласуется между экспериментами, потому что активность может резко меняться в течение дня.
   4. По крайней мере за 30 минут до тестирования, место личинок в 48-луночного планшета с одной личинкой на лунку. После переноса, заполняют скважины, так что поверхность воды чуть ниже верхней части скважины, обеспечивая нет пузырьков. Возврат пластины до 28 ° С инкубатор.
   5. Возьмите пластины из инкубатора и акклиматизации в свете в течение пяти минут перед тестированием.
2. Выполнение локомоции Пробирной
   1. Поместите 48-луночный планшет в камеру записи, которая оснащена инфракрасной цифровой камерой, захват до 60 кадров / с, так что личинки могут быть обнаружены в темноте. Убедитесь, что все скважины размещены внутри круговой сетки на программном обеспечении передвижением, что все личинки являются CLEарли обнаружению.
   2. Запустите программу и выберите "отслеживания" модуль. Под "файл" нажмите на кнопку "Создать новый протокол" и изменить количество скважин, используемых для эксперимента. Установить как продолжительность эксперимента и период интеграции до 10 мин, нажав на "Параметры" в раскрывающемся меню и выбрать "параметры протокола", а впоследствии вкладку "время". На том же "параметры протокола" диалоговом окне перейдите на вкладку "Параметры" и убедитесь, что флажок "Numeriscope" нажата после чего, то "Параметры протокола" диалоговое окно может быть закрыто.
   3. Для установки зон записи выделить всю сетку и дважды щелкните на одной из скважин. Нажмите на кнопку "рисовать районах» и обведите в левом верхнем углу, в правом верхнем углу, и нижней левой скважин и нажмите кнопку "сборки", которая позволяет программное обеспечение для автоматического определения положения каждой лунки. Кроме того, рисовать в масштабебар и нажмите на кнопку "Применить к группе". После завершения, нажмите на кнопку "DRAW области".
   4. Визуально определить порог обнаружения, сдвинув "порог обнаружения" бар до уровня, при котором только движения рыбы выделяются без каких-либо фоновых сигналов.
      Примечание: Порог обнаружения будет варьироваться между штаммами и, таким образом, пороговые значения должны быть определены, когда новый штамм тестируется. В представительные данные представлены порог обнаружения 25 мм / сек использовался.
   5. Перед началом испытания ввести пороги движения для обнаружения активности, а также малых и больших движений.
      Примечание: В репрезентативные данные представлены порог бездеятельности 6 мм / сек и залповой активности порог 30 мм / сек использовался. Пороги определяют минимальное движение считается активным, и уровень, необходимый для рассмотрения залповой активности и позволяют проводить классификацию деятельности на малые (активный, но ниже разрывного деятельноти пороги) и крупные (больше, чем порог залповой активности) движений. Пороговые значения могут быть изменены в зависимости от активности конкретных рыб штаммов проанализированных.
      Примечание: Хотя анализ может быть выполнен либо в светлых или темных условиях данио личинок было показано , что быть более активными в темноте ^18.
   6. Установите интенсивность света внутри камеры, чтобы быть на уровне 0%, нажав на кнопку "Настройки подсветки вождения" под "параметрами" в раскрывающемся меню. В результате диалоговое окно, добавить необходимые настройки света.
      Примечание: Интенсивность света внутри камеры может быть вызвана, чтобы включать и выключать во время тестирования, чтобы стимулировать активность личиночной
   7. Закройте дверь записи камеры и начать запись видео.
3. Количественное плаванию поведения
   1. После того, как эксперимент завершится, нажмите на кнопку "стоп" в рамках "эксперимента" в раскрывающемся меню. Диалог бобудет отображаться х со всеми результатами.
   2. Для того, чтобы получить доступ к этим результатам в Excel Нажмите кнопку "Открыть папку, содержащую" и откройте файл первенствовать, который появляется в результате папке. Важными параметрами являются "smlct" (малое кол-движение), "larct" (большое кол-движение), "smldist" (всего расстояние, пройденное рыбы в небольших движениях) и "lardist" (всего расстояние, пройденное рыбы в больших движений ).
      Примечание: После записи, программное обеспечение также возвращает два дополнительных выходных файлов в виде .avi файла (содержащий видео записи на 10 мин) и файл .png изображения (содержащий визуальное представление локомоции в течение 10- мин эксперимент, см рисунок 2).
   3. После того, как значения локомоции вычисляются, повторного воспроизведения .avi и .png файлы для последующего просмотра , будут ли значения локомоции , рассчитанные точно изображают плавательные движения рыбы (см рис3).
      Примечание: В качестве альтернативы, используя программное обеспечение, описанное здесь, пакеты, такие как свободно доступное программное обеспечение ImageJ может использоваться для отслеживания двигательную поведение.

Результаты

Сенсорный анализ вызвал ответ может быть использован для определения скорости и ускорения плавательных движений, которая является пропорциональной мерой мышечной силы. В ответ на механический стимул, такой как небольшой кран на голове 2 DPF дикого типа данио демонстрируют быстрое действие плавание. Видео были захвачены и проанализированы на двух различных моделях данио миопатия: Tg (ACTA1 ^D286G -eGFP), модель немалиновой миопатия , что было показано, обладают значительной мышечной слабости и модели мышечной дистрофии Дюшенна , в котором были описаны серьезные дефекты мышц на 5 DPF ^19,20. Изображения из видео типичного прикосновения вызвали анализа представлены на рисунке 1А. Ускорение данио исследовали и обнаружили пика в течение первого 0,2 секунды ответа плавание взрыв побега (рис 1B). Этот пик максимальное ускорение обеспечивает измерение, которое пропорционально силе гenerating способность скелетных мышц. Максимальные значения ускорения были усреднены для получения среднего максимального значения ускорения (± стандартная ошибка среднего значения) для каждого штамма: Tg (ACTA1 ^D286G -eGFP): среднее = 276,0 ± 28,8 м / сек ^2, п = 3 независимых экспериментов , содержащий повторностей 15 отдельных рыб; контроль дикого типа: средняя = 500,8 ± 50,28 м / сек ^2, п = 3 независимых экспериментов повторностей , содержащие 15 отдельных рыб; DMD ^{PC2 - / -} мутант: среднее = 249,9 ± 19,1 м / сек ^2, п = 3 независимых экспериментов повторностей , содержащие 12-19 отдельных рыб; DMD ^{PC2 +/-} гетерозигот: среднее = 235,9 ± 8,7 м / сек ^2, п = 3 независимых экспериментов повторностей , содержащие 16-27 отдельных рыб; DMD ^{рс2 + / +} гомозигот дикого типа: среднее = 230,9 ± 8,7 м / сек ^2, п = 3 независимых экспериментов повторностей , содержащие 8-27 отдельных рыб (рис. 1C) Как и ожидалось, Tg (ACTA1 ^D286Были найдены G -eGFP) рыбы , чтобы иметь существенное уменьшение максимального ускорения , указывающего снижение функции мышц, что согласуется с моделями мыши и данных пациента ^8,21,22. ДМД ^{PC2 - / -} мутант рыба однако, не показали никакой разницы в максимальном ускорении, в 2 денье, в соответствии с обнаружением мышечных дефектов от 3 DPF ²⁰ (рис 1D).

Локомоции анализы проводили в 6 денье для определения активности и расстояния купался путем данио штаммов как показатель производительности мышц. После тестирования, схематическое представление движений плавания в течение десяти-минутного периода тестирования был создан, с красными и зелеными линиями , представляющими периоды медленного и быстрого движения соответственно и черных линий , представляющих периоды бездействия (рисунок 2). Индивидуальные дикого типа данио проявляют высокую активность с относительно каких-либо периодов бездействия как opposред к Tg (ACTA1 ^D286G -eGFP) рыбы, которые являются менее активными в течение периода тестирования (рис 2B).

Поведение плавание количественно путем усреднения индивидуальных значений числа движений и расстояния плавал каждой рыбы (рисунок 3). Были обнаружены мутант рыбы (рис 3C и 3D) , чтобы иметь существенное уменьшение среднего числа движений и расстояния плавал по сравнению с их соответствующими ^- Оба, Tg (ACTA1 ^D286G -eGFP) рыба (рис 3A и 3B) и DMD ^{PC2 - /} управления: Tg (ACTA1 ^D286G -eGFP) рыбы: среднее число движений = 94,3 ± 13,6, среднее расстояние плавал = 112,9 ± 18,4 мм, п = 3 независимых экспериментов повторностей , содержащие 45 рыб; Контроли дикого типа: среднее количество движений = 177,4 ± 14,0, среднее расстояние плавал = 300,2 ± 22,8 мм, п = 3 независимы гeplicate эксперименты, включающие 45 рыбы; DMD ^{PC2 - / -} мутант: среднее число движений = 163,3 ± 30,0, среднее расстояние купался: 298,4 ± 60,37 мм, п = 3 независимых экспериментов повторностей , содержащие 12-20 рыбу; DMD ^{рс2 +/-} гетерозигот: среднее число движений = 362,3 ± 38,8, среднее расстояние купался: 660,3 ± 86.1mm п = 3 независимых экспериментов дублирующие , содержащих 17-27 рыб; DMD ^{рс2 + / +} гомозигот дикого типа: среднее число движений = 341,9 ± 91,6, среднее расстояние купался = 574,3 ± 170.9mm п = 3 независимых экспериментов повторностей , содержащие 8-25 рыбу.

Рисунок 1:. Количественное оторваны -позволяют анализа ответа на 2 денье эмбрионов данио (А) Снимок изображения контрольной данио во время прикосновения -позволяют анализов на 2 денье. (B) профиль ускорения для первого 0.2 сек о наличииодиночный Tg (ACTA1 ^D286G -eGFP) (красный) и единый орган управления (синий) данио после применения сенсорного стимула. Максимальное ускорение представлено пунктирными линиями. (C, D) Количественное максимального ускорения (м / с ²⁾ , записанные от сенсорных вызванных анализов отклика (C) Tg (ACTA1 ^D286G -eGFP) данио и (D) DMD ^{PC2 - / -} мутант рыбы по сравнению с контрольными данио в 2 денье. Планки погрешностей представляют ± SEM для 3 экспериментов дублирующих, * р <0,05. Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.

Рис . 2: Представление локомоции анализов для эмбрионов данио (А) Эмбрионы рыбок данио помещаются в 48-луночные планшеты и локомоции записывается сверху с использованием инфракрасной цифровой камеры. (B) Схема данио движения во время тестирования с красными линиями , изображающие быстрые движения, зеленые линии , изображающие медленные движения и черные линии , изображающие неактивность (как определено порогов обнаружения введенных в программном обеспечении). Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы увидеть увеличенную версию эта фигура.

Рис . 3: Количественное локомоции анализов на 6 денье данио личинок Количественное (А) количества движений и (В) расстояние , проходимое Tg (ACTA1 ^D286G -eGFP) данио по сравнению с контрольными данио в 6 денье.Количественная (С) количество движений и (D) расстояние , проходимое DMD ^{рс2 - / -} мутантных рыб сравнению с контрольными данио в 6 денье. Планки погрешностей представляют ± SEM для 3 экспериментов дублирующих, * р <0,05, ** р <0,01. Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.

Обсуждение

Много различных моделей на животных, включая мышей, собак, данио, мух и червей внесли свой вклад в наше понимание генетической и молекулярной основе мышечных заболеваний, а также помощь в разработке терапевтических подходов к борьбе с ними. Данио имеет ряд преимуществ для изучения болезни мышц. Данио обеспечивает генетически манипулируемо систему для оценки сложной мышечной кучность в подходящей физиологической среде, что невозможно сделать в культурах клеток. В отличие от других позвоночных животных моделей, большое количество рыбы , производимых, вместе с его оптической прозрачностью, способствует быстрому, высокой пропускной способности в естественных условиях химического и генетического скрининга.

Здесь мы опишем развитие данио анализов движения, чтобы обеспечить высокую пропускную способность и автоматизированный метод оценки производительности мышц во время данио эмбриогенеза. Для обоих анализов следует признать, что циркадные ритмы ивнешние стимулы окружающей среды существенно влияет на поведение данио плавание ^17,18. Повторное тестирование того же данио также приведет к привыканию приводит к уменьшению в ответ на тактильные стимулы ^23. Поэтому для того, чтобы достичь воспроизводимых результатов между экспериментами каждый данио эмбрион должен быть проверен только один раз, время суток и условий освещения должны быть стандартизированы, и температура воды должна быть жестко регулируется.

Использование сенсорного анализа вызвали в 2 денье мы можем непосредственно измерить максимальное ускорение плавательным разрыва действия, которая пропорциональна мышечной силы. Предыдущие методы в данио исследовали мышечную силу, связывая оба конца эмбрионов экспериментальным следующее оборудование , которое сокращение мышц стимулируется с помощью электрического поля и силовоспроизводящую способность мышцы ¹⁴ измеряется. Хотя этот метод измеряет силу установочную мощность тон личиночной мышцы, он не измеряет фактическую силу, произведенную личиночной мышцы во время плавания. Поэтому мы разработали метод косвенно оценить силу, произведенную во время нормального движения личиночной плавание, чтобы обеспечить общую меру здоровья мышц. Система видео высокой скорости, способный записывать отдельные данио движения с частотой кадров 1000 кадров / сек могут быть использованы для выявления небольших, но существенных различий в мышечной функции, которые не являются непосредственно различимы невооруженным глазом. Это будет интересно посмотреть, как сообщалось ранее изменения в электрически стимулированной силы поколения коррелируют с изменениями в производительности плавания.

Кроме того, сенсорный вызванные анализы ответа также могут быть использованы для оценки плавания кинематику, таких как форма и скорость волны тела во время движения плавательного ^24, чтобы дать количественное измерение опорно - двигательного поведения.

Из-за спонтанного движения zebrafиш личинки после того, как 3 денье, мы не смогли выполнить прикосновению вызывают анализы для измерения мышечной функции. С другой стороны, мы измерили производительность мышц в течение длительного периода путем определения расстояния купался путем данио личинок на 6 DPF. Этот тест, хотя и косвенной мерой мышечной функции, могут быть использованы для идентификации рыбы , отображающее нарушенную работу мышц ⁸ или нейродегенерации ^25,26. Этот тест не только обеспечивает измерение аналогичное испытанию на 6 мин ходьбы , но также подходит для автоматизированной высокой пропускной способностью в естественных условиях экранов наркотиков или мутагенеза.

Материалы

Name	Company	Catalog Number	Comments
21 G x 1' Blunt Needle	Terumo/Admiral Medical Supplies	TE2125
48-well plates	Sigma	M8937
90 mm Petri Dishes	Pacific Laboratory Products PT	S90001
High Speed Camera	Baumer	HXC20
http://www.randomization.com	N/A		Steps 1.1.2, 2.1.3
Incubator	Thermoline Scientific	TEI-43L
Plastic Pipette	VWR	16001-188
StreamPix5	NorPix		Step 1.2.3
Temperature Control Unit	Viewpoint
Tweezers, style 8	ProSciTech	T04-821
Zebrabox System	Viewpoint
Zebralab	Viewpoint		Steps 1.3.1, 2.2.1