JoVE Logo
АВТОРЫ
СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

Войдите в систему

Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.

В этой статье

  • Резюме
  • Аннотация
  • Введение
  • протокол
  • Результаты
  • Обсуждение
  • Раскрытие информации
  • Благодарности
  • Материалы
  • Ссылки
  • Перепечатки и разрешения

Резюме

This article describes a simple and rapid protocol to evaluate the oligomeric state of the dynamin-like GTPase MxA protein from lysates of human cells using a combination of non-denaturing PAGE with western blot analysis.

Аннотация

The formation of oligomeric complexes is a crucial prerequisite for the proper structure and function of many proteins. The interferon-induced antiviral effector protein MxA exerts a broad antiviral activity against many viruses. MxA is a dynamin-like GTPase and has the capacity to form oligomeric structures of higher order. However, whether oligomerization of MxA is required for its antiviral activity is an issue of debate. We describe here a simple protocol to assess the oligomeric state of endogenously or ectopically expressed MxA in the cytoplasmic fraction of human cell lines by non-denaturing polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE) in combination with Western blot analysis. A critical step of the protocol is the choice of detergents to prevent aggregation and/or precipitation of proteins particularly associated with cellular membranes such as MxA, without interfering with its enzymatic activity. Another crucial aspect of the protocol is the irreversible protection of the free thiol groups of cysteine residues by iodoacetamide to prevent artificial interactions of the protein. This protocol is suitable for a simple assessment of the oligomeric state of MxA and furthermore allows a direct correlation of the antiviral activity of MxA interface mutants with their respective oligomeric states.

Введение

Четвертичная структура белка, играет решающую роль во многих клеточных процессах. Сигнальных путей, экспрессии генов и ферментов активация / деактивация все полагаются на правильность сборки белковых комплексов 1-4. Этот процесс также известен как гомо- или гетеро-олигомеризации происходит из-за необратимого ковалентного или обратимых электростатических и гидрофобных взаимодействий белок-белок. Олигомеризации не только разнообразит различные клеточные процессы , без увеличения размера генома, но также обеспечивает стратегию для белков , чтобы построить устойчивые комплексы, которые более устойчивы по отношению к денатурации и деградации 5. Дефекты в олигомеризации оказывают влияние на функцию белков и может привести к развитию заболеваний. Например, фермент фенилаланин гидроксилазы образует тетрамерный комплекс. Некоторые мутации в белковом комплексе может ослабить образование тетрамерное и приводят к фенилкетонурии болезни 6.

Белок MxA человек представляет собой интерферон (ИФН) индуцированный противовирусную эффекторной белка , оказывающего широкий противовирусной активностью в отношении различных РНК, а также ДНК - вирусов 7. Он относится к надсемейства динамина подобных крупных ГТФаз и обладает способностью образовывать большие олигомерные структуры в пробирке 8. Олигомеризация было предложено , чтобы защитить MxA от быстрой деградации 9,10. Несмотря на интенсивные усилия многих исследовательских групп, молекулярный механизм действия остается в значительной степени неуловимым и роль олигомеризации состояния MxA для своей противовирусной функции находится на стадии обсуждения 9,11,12. В связи с этим, Гао и его коллеги предложили модель , где MxA проявляет свою противовирусную активность при взаимодействии с вирусными нуклеопротеидами в виде крупных кольцевых олигомерных структур 11. Тем не менее, в последнее время , мы показали , что MxA димеры обладают противовирусной активностью и взаимодействуют с нуклеопротеида вируса гриппа А 12. ВAsed на кристаллическую структуру MxA, Гао и его коллеги определили несколько аминокислотных остатков в интерфейсных областях , которые имеют решающее значение для его олигомеризации в пробирке и его противовирусной функции 11,13. Поэтому для того, чтобы выяснить, который олигомерные состояние MxA проявляет противовирусную активность, мы стремились создать простой протокол для быстрого определения oligmeric состояния интерфейса мутантов MxA, выраженные в клетках человека, а также эндогенными MxA выраженное после стимуляции IFN &.

Хотя существует много методов, которые обычно используются для исследования взаимодействия между белками , такими как белок сплит-зеленый флуоресцентный (сплит-GFP) комплементационная анализ 14, поверхностного плазмонного резонанса 15 и Ферстер резонансный перенос энергии (FRET) 16, они не обеспечивают информация о точной стехиометрии олигомерного белкового комплекса. Для исследования этого конкретного аспекта, методы, такие какмульти-угол рассеяния света (MALS) 17 и аналитической ультрацентрифугирования 18 очень полезны. Как правило, белки анализировали с помощью этих методов являются очищенные белки. Процессы олигомеризации может также зависеть от других клеточных факторов. Если эти факторы неизвестны, анализ является более трудным. Кроме того, некоторые белки трудно выразить в Е. палочки и очистить. Таким образом, эти методы не являются оптимальным выбором для анализа белка олигомеризации в клеточной среде. Кроме того, эти методы требуют дорогих инструментов, которые не легко доступны.

Non-денатурирующих электрофореза в полиакриламидном геле (ПААГ), гель -проникающей хроматографии или химического сшивания с последующим обычным додецилсульфата натрия (SDS) -page являются полезными инструментами для характеристики образования олигомеров из клеточных лизатов 2,19,20. Эти методы не требуют специального оборудования и может быть легко реrformed в стандартной лаборатории. Первоначально мы оценивали различные химические сшивающие протоколы, которые инвариантно привели к неспецифической агрегации и осаждению МХА. Таким образом, мы в следующий раз испытал протоколы СТР неденатурирующем. В качестве не денатурирующее СТР исключает использование SDS, миграция белков зависит от их родного заряда. Сине-нативный страница использует кумасси бриллиантовым синим G250 , чтобы загрузить белки с общим отрицательным зарядом, аналогично SDS, но не денатурации белка 21. К сожалению, кумасси бриллиантовый синий осаждается в присутствии высоких солей и двухвалентных катионов (например , Mg 2+) , которые часто включают в лизиса буферов. В зависимости от используемых буферов, может быть трудно анализировать образец без дальнейшей оптимизации шагов, которые могли бы оказать влияние на олигомерного белкового комплекса.

Здесь мы приведем простой протокол , основанный на ранее опубликованного метода 22 , чтобы определить , олигомеризациюбелок человеческого MxA полученный из клеточных лизатов с использованием неденатурирующем PAGE.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

протокол

Примечание: Этот протокол основан на опубликованной ранее неденатурирующих протокола стр.12. В этом исследовании олигомерного состояния белка МхА оценивали с использованием либо клеток Vero с гиперэкспрессией MxA или ИФН-альфа-стимулированных клеток A549, экспрессирующих эндогенный МХА. Протокол, описанный ниже, может быть использован для анализа олигомерного состояния любого белка в дополнение к МХА. Тем не менее, может потребоваться дальнейшей оптимизации.

1. Получение клеточного лизата для неденатурирующем ПААГ

Примечание: Для анализа олигомерного состояния человеческого белка МхА либо в Vero или клетки А549, собирали 1,0 × 10 6 клеток. В зависимости от типа клеток или от избытка белка для анализа, количество клеток должно быть отрегулировано. Кроме того, важно, чтобы защитить лизис буфера от воздействия света, как только будет добавлен светочувствительный йодацетамида.

  1. Семенной 0,3 х 10 6 А549 или Vero клеток на лунку в6 а-х блюд. Сохранить клетки в 2 мл среды для роста на лунку (таблица 1). Инкубируйте клетки в течение ночи в инкубаторе для клеточных культур (37 ° С, 5% СО 2).
  2. Сбора клеток путем промывки 1 мл фосфатно-буферного раствора (PBS) и отделяться путем добавления 0,5 мл 0,25% трипсин-этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА) 1x раствор в течение приблизительно 5 мин при комнатной температуре.
  3. Как только клетки отделяются от блюдо, добавьте 0,5 мл питательной среды и тщательно перемешать с помощью пипетки вверх и вниз.
  4. Передача клетки в каждую лунку в одну 2 мл пробирку и осадить их, используя настольную центрифугу (5000 XG, 4 ° C, 5 мин).
  5. Осторожно удалите супернатант с помощью пипетки, не нарушая клеточный осадок.
  6. Промывают клетки с 1 мл охлажденного льдом PBS, тщательно пипеткой клеточной суспензии вверх и вниз.
  7. Гранул клетки в настольную центрифугу (5000 XG, 4 ° С, 5 мин).
  8. Осторожно удалите супернатант с помощью пипетки Wiбез промежуточного отсоединением осадок клеток.
  9. Ресуспендируют клеток в 200 мкл охлажденного льдом буфера для лизиса (таблица 1) с помощью пипетки вверх и вниз и поставить на лед.
  10. Сразу же, защитить лизат от света путем покрытия труб с использованием оловянную фольгу и инкубировать в течение 30 минут на льду.
    Примечание: После инкубации в течение 30 мин на льду, он больше не является необходимым для защиты лизат от воздействия света, так как защита от свободных тиоловых групп является необратимым.
  11. Удалить остатков клеток путем центрифугирования в предварительно охлажденный настольную центрифугу (13 000 XG, 4 ° C, 20 мин).
  12. Равновесие диализных столбцы в буфере диализом (таблица 1) в холодном помещении при температуре 4 ° С в течение 20 мин во время стадии центрифугирования. Использование колонки с молекулярной массой от 10000.
    1. Прикрепите колонки к флоат буя и поместить их в стакан, наполненный диализного буфера. Для того, чтобы обеспечить осторожное перемешивание, используют магнитную мешалку. Не прикасайтесь к мембране.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Dialysкак столбцы могут быть приобретены или получены из 1,5 мл пробирки в соответствии с протоколом , описанным Фиала и его сотрудниками 19.
  13. Удалить столбцы из буфера диализ и поплавковой буем. Передача очищенных лизатов в подготовленную колонку диализной пипеткой, не касаясь мембраны. Прикрепите колонки к флоат буя и положил их обратно в стакан, наполненный диализного буфера.
  14. Диализировать лизата в химический стакан , содержащий ледяной буфера для диализа (таблица 1) , по крайней мере 4 ч (или предпочтительно в течение ночи) при температуре 4 ° С при тщательном перемешивании с использованием магнитной мешалки. Использование по меньшей мере, 100 мл буфера для диализа в течение 200 мкл лизата.
  15. Передача Диализованную пробу в 1,5 мл пробирку. Удалить преципитаты центрифугированием в настольную центрифугу (13 000 XG, 4 ° C, 20 мин). Для предотвращения диссоциации олигомерного белка комплексов продолжают с протоколом (раздел 2) сразу же после диализа. Не замораживатьподготовленные лизатов.

2. Электрофорез

Примечание: Электрофорез проводили , как описано ранее , с некоторыми изменениями 22. В протоколе, описанном ниже, были использованы предварительно литые градиентные гели (4-15% градиент). В качестве альтернативы, гели можно приготовить в лаборатории. Очень важно, чтобы исключить какого-либо денатурирующего агента, такого как SDS, чтобы предотвратить диссоциацию олигомерных белковых комплексов. Время электрофореза был оптимизирован для различных олигомерных состояний человеческого белка МхА. Тем не менее, он может варьироваться для других белков, в зависимости от размера олигомеров комплекса, а также диапазон разделения, которая должна быть достигнута, чтобы проанализировать комплекс. Таким образом, оптимальное время электрофореза должны быть определены эмпирически. Для Оптимальное разрешение олигомеров необходимо проанализировать ток не должен превышать 25 мА.

  1. Соберите гель PAGE без денатурации в гелевой камере. Заполните тон внутреннюю и внешнюю камеру с предварительно охлажденным рабочим буфером (таблица 1).
  2. Предварительно запустить гель с заранее охлажденный проточном буфере при 25 мА на гель в течение 15 мин в холодном помещении при температуре 4 ° С.
  3. Смешайте 15 мкл полученного выше лизатов с 5 мкл 4х буфера образца (таблица 1). Не кипятите образец.
  4. Нагрузка 15 мкл образца и нативный стандартного белка выбора на геле. Выполнить гель при 25 мА в течение 4 ч в холодном помещении при температуре 4 ° С.
    Примечание: Для получения полуколичестветшых анализов, протокол Количественную оценку белка (например, анализ протеина по Брэдфорду 23) могут быть выполнены для того , чтобы обеспечить загрузку равных количеств общего белка на полосу.

3. Вестерн-блот

Примечание: Ниже описан протокол мокрой западной системы блоттинга. Любая промокательной мембрана может быть использована. Активировать поливинилиденфторид (PVDF) мембраны в 100% метанола, прежде чем уравновешивания в промокательной БУФФер. Полусухое западный метод блот может быть использован в качестве альтернативы, но должна быть оптимизирована для больших олигомерных комплексов.

  1. Разберите гель и осторожно перенести его в SDS - буфере (таблица 1).
  2. Инкубировать в течение 10 мин при комнатной температуре при осторожном встряхивании.
  3. Подготовьте 2 губки, 4 листов бумаги фильтра целлюлозы и промокательной мембрану на гель. Замочите их в буфере для блоттинга (таблица 1).
  4. Соберите бутерброд следующим образом (снизу вверх): 1 губка, 2 целлюлозные фильтры бумажные листы, мембраны, гель, 2 целлюлозы фильтровальной бумаги листов, 1 губка.
  5. Положите бутерброд в промокательной бак. Убедитесь, что мембрана обращена к положительному полюсу, а гель сталкивается с отрицательным полюсом.
  6. Заполните промокательную резервуар с предварительно охлажденном буфере блоттинга.
  7. Пятно при 90 мА в течение ночи при 4 ° С для получения наилучших результатов переноса белков.
  8. Разберите бутерброд и визуализировать стандарт белка путем инкубирования мембраны в PONÇEau S раствор в течение 5 мин при комнатной температуре.
  9. Destain мембраны, тщательно смывая пунцовый S деионизированной водой, пока вы можете ясно видеть полосы белкового стандарта.
  10. Отметьте полосы стандарта белка с помощью ручки.
    Примечание: Остаточное Понсо S может помешать иммунным. Чтобы избежать этого, мембрана может быть обесцвечивают далее путем инкубации в 0,1 М NaOH в течение 1 мин и последующей промывки деионизированной водой.
  11. Блок мембраны блокирующим буфером (см таблицу 1) в течение не менее 1 ч при комнатной температуре или в течение ночи при 4 ° С.
  12. Визуализируйте (ы) белка интереса иммунным окрашиванием с использованием антител, направленных против белка для анализа.
    Примечание: Белок MxA человек визуализировали с использованием кроличьих поликлональных антител , специфичных для человеческого MX1 разводили 1: 1000 в блокирующем буфере (таблица 1). Раствор антител инкубировали в течение ночи при температуре 4 ° С. В качестве альтернативы, моноклональноеNTI-MxA антитела (клон 143) , могут быть использованы (данные не показаны) 24.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Результаты

Используя неденатурирующем PAGE, мы проанализировали олигомерного состояния дикого типа человека МхА, димерные интерфейс мутанты MxA (R640A) и MxA (L617D), а также мономерной интерфейса мутанта МхА (M527D) из клеточных лизатов 12. Клетки лизируют в буфере , содержащем 1% октилфеноксиполиэтоксиэ?...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Обсуждение

Здесь мы опишем простой метод, который позволяет быстрое определение олигомерных состояния белков, экспрессированных в клетках млекопитающих путем неденатурирующем ПААГ с последующим Вестерн-блот-анализа. Основное преимущество этого подхода состоит в том, что олигомерные состояние...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Раскрытие информации

The authors have nothing to disclose.

Благодарности

This work was funded by a Grant from the Swiss National Science foundation (Grant nr. 31003A_143834) to JP.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Материалы

NameCompanyCatalog NumberComments
Slide-A-Lyzer MINI Dialysis Units, 10K MWCO, 0.5 mlThermo Fisher Scientific69570Pre-equilibrate in dialysis buffer (if Glycerol removal is desired)
Can be self-made according to Fiala et al. 2011
4–15% Mini-PROTEAN TGX Precast Protein Gels, 10-well,Bio-Rad456-1083Pre-run in running buffer to adjust buffer system
cOmplete, Mini, EDTA-freeRoche 11836170001use 1 tablet per 50 ml
PBS, pH 7.4  bottle a 500 ml GibcoThermo Fisher Scientific14190-094
Ponceau S solutionSigma-AldrichP7170TOXIC wear gloves and protect eyes
NativeMark Unstained Protein Standard  50 µlInvitrogenP/N 57030load 5 µl/well
A549 cellsATCCATCC CCL185Grow in growth medium (see Table 1)
Vero cellsATCCATCC CCL81Grow in growth medium (see Table 1)
anti-Mx1 antibodyNovus BiologicalsH00004599_D01PUse at a 1:1,000 dilution
ECL Anti-rabbit IgG, Horseradish Peroxidase linked whole antibody (from donkey)GE-HealthcareNA934VUse at a 1:10,000 dilution
0.5% Trypsin-EDTA (1x)        Life TechnologiesThermo Fisher15400-054
Iodoacetamide   5 gSigma-AldrichI-6125stock  100 mM
BromphenolblueSigma-AldrichB0126-25G
DMEM +4.5g/l Gluc,+L-Glut,+Pyruvate life technologiesThermo Fisher Scientific41966-029
Pen  Strep 100 x     100ml               life technologiesThermo Fisher Scientific15140 - 130
Glutamax 100x Stock, 100 ml     life technologiesThermo Fisher Scientific350500-038
Fetal Bovine Serum, Dialyzed , US Origin 500 ml Gibco Lot:42G9552KThermo Fisher Scientific10270-106
Cellulose filter paperBio-Rad1703965
PVDF blotting  membraneGE-Healthcare10600022
Tris(hydroxymethyl)aminomethaneBiosolve0020092391BS
sodium fluoride (NaF)Sigma AldrichS-7920
NP-40Calbiochem492015
cOmplete, Mini, EDTA-freeRoche 11836170001
Tween 20Calbiochem6555204
CHAPS 10% solutionAmrescoN907
DL-Dithiothreitol (DTT)Sigma Aldrich43819
GlycineBiosolve0007132391BS
sodium orthovanadate (Na3VO4)Sigma Aldrich450243
GlycerolSigma AldrichG7757
β-GlycerophospateSigma AldrichG9422
Milk powderMigros/Switzerland
MethanolMillipore1.06009
sodium cloride (NaCl)Sigma Aldrich71380
magnesium chloride (MgCl2)Amresco288
Sodium dodecyl sulphate (SDS)Sigma AldrichL4509
sodium hydroxide (NaOH)Sigma AldrichS-8045

Ссылки

  1. Baisamy, L., Jurisch, N., Diviani, D. Leucine zipper-mediated homo-oligomerization regulates the Rho-GEF activity of AKAP-Lbc. J Biol Chem. 280, 15405-15412 (2005).
  2. Chen, C. P., Posy, S., Ben-Shaul, A., Shapiro, L., Honig, B. H. Specificity of cell-cell adhesion by classical cadherins: Critical role for low-affinity dimerization through beta-strand swapping. Proc Natl Acad Sci U S A. 102, 8531-8536 (2005).
  3. Jackson-Fisher, A. J., Chitikila, C., Mitra, M., Pugh, B. F. A role for TBP dimerization in preventing unregulated gene expression. Mol Cell. 3, 717-727 (1999).
  4. Torshin, I. Activating oligomerization as intermediate level of signal transduction: analysis of protein-protein contacts and active sites in several glycolytic enzymes. Front Biosci. 4, 557-570 (1999).
  5. Goodsell, D. S., Olson, A. J. Structural symmetry and protein function. Annu Rev Biophys Biomol Struct. 29, 105-153 (2000).
  6. Flydal, M. I., Martinez, A. Phenylalanine hydroxylase: function, structure, and regulation. IUBMB Life. 65, 341-349 (2013).
  7. Haller, O., Kochs, G. Human MxA protein: an interferon-induced dynamin-like GTPase with broad antiviral activity. J Interferon Cytokine Res. 31, 79-87 (2011).
  8. Haller, O., Staeheli, P., Schwemmle, M., Kochs, G. Mx GTPases: dynamin-like antiviral machines of innate immunity. Trends Microbiol. 23, 154-163 (2015).
  9. Di Paolo, C., Hefti, H. P., Meli, M., Landis, H., Pavlovic, J. Intramolecular backfolding of the carboxyl-terminal end of MxA protein is a prerequisite for its oligomerization. J Biol Chem. 274, 32071-32078 (1999).
  10. Janzen, C., Kochs, G., Haller, O. A monomeric GTPase-negative MxA mutant with antiviral activity. J Virol. 74, 8202-8206 (2000).
  11. Gao, S., et al. Structure of myxovirus resistance protein a reveals intra- and intermolecular domain interactions required for the antiviral function. Immunity. 35, 514-525 (2011).
  12. Nigg, P. E., Pavlovic, J. Oligomerization and GTP-binding Requirements of MxA for Viral Target Recognition and Antiviral Activity against Influenza A Virus. J Biol Chem. 290, 29893-29906 (2015).
  13. Gao, S., et al. Structural basis of oligomerization in the stalk region of dynamin-like MxA. Nature. 465, 502-506 (2010).
  14. Ghosh, I., Hamilton, A. D., Regan, L. Antiparallel leucine zipper-directed protein reassembly: Application to the green fluorescent protein. J Am Chem Soc. 122, 5658-5659 (2000).
  15. Patching, S. G. Surface plasmon resonance spectroscopy for characterisation of membrane protein-ligand interactions and its potential for drug discovery. Biochim Biophys Acta. 1838, 43-55 (2014).
  16. Kenworthy, A. K. Imaging protein-protein interactions using fluorescence resonance energy transfer microscopy. Methods. 24, 289-296 (2001).
  17. Wyatt, P. J. Light-Scattering and the Absolute Characterization of Macromolecules. Analytica Chimica Acta. 272 (93), 1-40 (1993).
  18. Howlett, G. J., Minton, A. P., Rivas, G. Analytical ultracentrifugation for the study of protein association and assembly. Curr Opin Chem Biol. 10, 430-436 (2006).
  19. Fiala, G. J., Schamel, W. W., Blumenthal, B. Blue native polyacrylamide gel electrophoresis (BN-PAGE) for analysis of multiprotein complexes from cellular lysates. J Vis Exp. , (2011).
  20. Zou, H., Li, Y., Liu, X., Wang, X. An APAF-1.cytochrome c multimeric complex is a functional apoptosome that activates procaspase-9. J Biol Chem. 274, 11549-11556 (1999).
  21. Schagger, H., Cramer, W. A., von Jagow, G. Analysis of molecular masses and oligomeric states of protein complexes by blue native electrophoresis and isolation of membrane protein complexes by two-dimensional native electrophoresis. Anal Biochem. 217, 220-230 (1994).
  22. Walker, J. M. Nondenaturing polyacrylamide gel electrophoresis of proteins. Methods Mol Biol. 32, 17-22 (1994).
  23. Stoscheck, C. M. Quantitation of protein. Methods Enzymol. 182, 50-68 (1990).
  24. Wisskirchen, C., Ludersdorfer, T. H., Muller, D. A., Moritz, E., Pavlovic, J. Interferon-induced antiviral protein MxA interacts with the cellular RNA helicases UAP56 and URH49. J Biol Chem. 286, 34743-34751 (2011).
  25. Stertz, S., et al. Interferon-induced, antiviral human MxA protein localizes to a distinct subcompartment of the smooth endoplasmic reticulum. J Interferon Cytokine Res. 26, 650-660 (2006).
  26. Seddon, A. M., Curnow, P., Booth, P. J. Membrane proteins, lipids and detergents: not just a soap opera. Biochim Biophys Acta. 1666, 105-117 (2004).
  27. Kochs, G., Haener, M., Aebi, U., Haller, O. Self-assembly of human MxA GTPase into highly ordered dynamin-like oligomers. J Biol Chem. 277, 14172-14176 (2002).
  28. Kochs, G., Haller, O. GTP-bound human MxA protein interacts with the nucleocapsids of Thogoto virus (Orthomyxoviridae). J Biol Chem. 274, 4370-4376 (1999).
  29. Reichelt, M., Stertz, S., Krijnse-Locker, J., Haller, O., Kochs, G. Missorting of LaCrosse virus nucleocapsid protein by the interferon-induced MxA GTPase involves smooth ER membranes. Traffic. 5, 772-784 (2004).
  30. Wisskirchen, C., Ludersdorfer, T. H., Muller, D. A., Moritz, E., Pavlovic, J. The cellular RNA helicase UAP56 is required for prevention of double-stranded RNA formation during influenza A virus infection. J Virol. 85, 8646-8655 (2011).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи

Запросить разрешение

Смотреть дополнительные статьи

116PAGEmyxovirus A

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Конфиденциальность

Условия эксплуатации

Политика

СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

РЕКОМЕНДОВАТЬ БИБЛИОТЕКЕ

НОВОСТИ JoVE

Исследования

Образование

АВТОРЫ

Библиотекарь

О JoVE

Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены