Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.
Method Article
* Эти авторы внесли равный вклад
Животные модели атеросклероза важны, чтобы понять механизм и исследовать новые подходы к предотвращению развития зубного налета или разрыв, ведущей причиной смерти в промышленно развитых странах. Этот протокол использует сочетание шар травмы и богатым содержанием холестерина чтобы побудить атеросклеротических бляшек в кролика подвздошных артерии.
Острый коронарный синдром, обусловленных коронарной окклюзии после развитие атеросклеротических бляшек и разрыв является ведущей причиной смерти в промышленно развитых странах. Новая Зеландия Белый (NZW) кроликов широко используются как животной модели для исследования атеросклероза. Они разрабатывают спонтанное поражений, когда кормили с атерогенные диеты; Однако это требует длительного времени 4-8 месяцев. Для дальнейшего укрепления и ускорения атерогенеза, часто используется сочетание атерогенные диеты и механических повреждений эндотелия. Представлена процедура заставить атеросклеротических бляшек в кроликов использует баллонного катетера сорвать эндотелия в левой подвздошной артерии NZW кроликов кормят атерогенные диеты. Такие механические повреждения, вызванные баллонного катетера вызывает цепь воспалительных реакций, инициирование neointimal накопление липидов в времени зависит от моды. Атеросклеротических бляшек после шар травмы шоу neointimal утолщение с обширной липидной инфильтрации, содержимое ячейки высокой гладких мышц и присутствие макрофагов производные ячейки пены. Этот метод прост, воспроизводимые и производит налета контролируемой длины в пределах подвздошных артерии. Вся процедура завершается в течение 20-30 мин. Процедура является безопасной с низкой смертности и также предлагает высокий успех в получении существенной интимы поражений. Процедура баллонного катетера индуцированной артериальной травмы результаты в атеросклероза в течение двух недель. Эта модель может использоваться для изучения болезни патологии, диагностической визуализации и оценить новые терапевтические стратегии.
Разрыву уязвимых атеросклеротических бляшек является одной из ведущих причин смерти в промышленно развитых странах1. Хотя исследования в течение последних десятилетий развернул несколько молекулярных и клеточных механизмов, участвующих в прогресс зубного налета, продолжали усилия по-прежнему необходимы не только для того, чтобы распутать сложный механизм прогрессирования заболевания, но и для тестирования новых терапевтических подходы. Было предложено несколько животных моделей для изучения атеросклероз. Генетические манипуляции, холестерин кормления или механической травмы эндотелия являются стандартной стратегии разделяют большинства животных моделей атеросклероза, включая мышей, кроликов или minipigs. Среди них NZW кролики чувствительны к холестерин диета, в то время как нормальных крыс и мышей значительно не впитывают диетического холестерина2,3,4. Кролики спонтанно развивать аорты поражения богата макрофагами с некоторыми волокнистого компонента когда кормили с холестерина богатых диеты5,6. Однако длительного подготовительного времени 4-8 месяцев, чтобы побудить атеросклеротической plaquesby кормления холестерина диета только6,7 является основным препятствием для большинства экспериментальных параметров. В стремлении заставить поражений в относительно короткое время сочетание высокого холестерина диеты и шар травмы был разработан Baumgarter и Studer8. Общая цель этой техники заключается в том, чтобы побудить атеросклеротических бляшек, состоящий из пены клетки (аналогично жирных испещрять в людях) в повышенным кроликов в течение 2 недель. Настоящий метод описывается процедура артериальной стенки травмы, основанный на Baumgarter в метод с помощью баллонного катетера, расширенный в подвздошные артерии NZW употреблением кроликов.
Вместе с богатыми холестерина травмы в результате индуцированной шар де endothelialization приведет к атеросклероза. Воздушный шар травмы ускоряет образование атеросклеротических поражений и производит налета одинакового размера и распределения. Интимы утолщение увеличивается в течение времени и интимы клеток инфильтрата начинается в течение нескольких дней после травмы. Жирных полос с существенной макрофаги начинают появляться после 7-10 дней шар травмы и представлены в виде поражения типа II по классификации, Американской ассоциации сердца. Воздушный шар травмы в кролика часто выполняется в аорте для изучения состава зубного налета. Neointimal эндотелием выражает высокий уровень Межмицеллярная молекула. Бляшки связаны с медиальной диссекции и adventitial изменения. Атеросклеротические поражения состоит из липидов, пролиферирующих клеток гладких мышц (SMCs), коллагеновых волокон и воспалительные клетки, которые накапливаются регенерированный эндотелия и основном типа II в природе. Топологическая распределение кролик бляшек аналогичен сообщили в человека аорты 9,10 в принципе, аорты больше по размеру, по сравнению с подвздошных артерий и будет производить таблички в большей длины. Однако основным преимуществом использования подвздошных артерии как сайт атеросклероза в кроликов является его доступность, его сходство в мышечной содержание человека коронарной артерии11, форма поражения развития12, фактор высокой ткани деятельность13 и последовательной судно измерение сопоставимы с человека коронарной артерии, позволяя оценки коммерчески производимых устройств морфометрических и ангиографическое конечные точки. Инвазивные и неинвазивные методы были исследованы для анализа бляшек в кролика подвздошных артерий в живых животных. Предыдущие отчеты описывают использование магнитно-резонансной томографии (МРТ) с помощью системы 2,35 Тесла MR 14 Кроме того, внутрисосудистого ультразвука (IVUS) или оптическая когерентная томография (Окт) катетеры могут быть надлежащим образом применяются к изображению атеросклеротических бляшек в кролика подвздошных артерий. Подвздошных артерии доступен для УЗИ, когда с помощью эхографии высокого разрешения и аорты также могут быть изучены с этой техникой.
В последнее десятилетие эта модель Кролик шар травмы помог для более глубокого понимания механизмов налета прогрессии15и налета регрессии16. Кроме того, модель использовалась для изучения влияния роман терапевтических агентов, таких как статины, стандартные антиагрегантов, антиоксидант агентов17,18 и наркотиков элюирующие стентов например эверолимус или zotarolimus элюирующие стента19,20 на neointimal утолщение. Эта модель также использовалась расследовать внутрисосудистого изображений ближней ИК-области спектра флуоресценции изображений катетер21.
Этот экспериментальный протокол был одобрен кантональная служба ветеринарии, Фрибур и Швейцарского федерального ветеринарного бюро, Швейцария (FR 2015/58).
Примечание: мужской NZW кроликов, весом от 2.8 до 3,2 кг были использованы. Животные были размещены в обычных условиях (12 h свет и темные цикла, предоставляемых ad libitum воды и продовольствия). До шар денудации животные были акклиматизировались на 1 неделю, во время которого они кормили с нормальной Чоу диеты. После 1 недели акклиматизации кролики были перешли на атерогенные рацион, состоящий из высоких жиров (8,6%) и насыщенных жирных кислот с 205 мг/кг (1%) холестерина в течение всего исследования. Воздушный шар травмы в левой подвздошной артерии была выполнена 1 неделю после начала диеты и приносили в жертву животных после 2 недель или 4 недель травмы шар.
1. предоперационная процедуры
2. Хирургический протокол
3. Послеоперационный уход
4. Ткани сбора и анализа налета состав
Шар травмы подвздошных артерии была успешно выполнена без осложнений (рис. 1). Общее время варьировал от 20 до 30 минут для травм выполнена только одна подвздошная артерия и 35 до 45 минут для травм на обеих артерий. Кролик восстанавливается в течение 1 ч посл...
Кролик подвздошных артерии атеросклероза модель широко используется в исследования атеросклероза. С этот протокол кроликов стремительно развивался более тяжелой и Дополнительные таблички по сравнению с спонтанное поражений разработаны с только холестерин диета. Важно отметить, что...
Авторы заявляют не конкурирующих финансовых интересов.
Эта работа была поддержана Швейцарской национальной науки Фонд Грант 150271.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
New Zealand White rabbits | Charles River laboratories,France | Cre:KBL(NZW) | |
Cholesterol rich diet | Ssniff spezialdiäten | Ssniff EF K High Fat and Cholesterol | |
Glass bead sterilizer-Germinator 500 | VWR, Leicestershire, UK | 101326-488 | |
Fogarty balloon embolectomy catheters, 2 French | Edwards Lifesciences, Switzerland | 120602F | For single use only |
Luer Lock Syringe | Becton, Dickinson and Company, USA | 309628 | |
Thermopad Type 226 | Solis, Switzerland AG | 397387 | |
Buprenorphine- Temgesic | Reckitt Benckiser AG, Switzerland | 7.68042E+12 | |
Isoflurane | Piramal Critical Care, Inc, Bethlehem, PA 18017 | 2667-46-7 | |
Anaesthesia machine-combi-vet Base Anesthesia System | Rothacher Medical GmbH, Switzerland | CV 30-301-A | |
Cardell touch veterinary vital signs monitor | Midmark, Ohio, USA | 8013-001 | |
Ophthalmic ointment-Humigel | Virbac, France | ||
Animal hair clippers | Aesculap AG, Germany | GT420 | |
Disinfectant-Betadine solution | MundipharmaMedicalCompany, Switzerland | 14671-1203 | |
Dumont #7 Forceps | FST Germany | 11274-20 | |
Medium and small microscissors | Medline International Switzerland Sàrl | UC4337 | |
Microvascular clamps | FST, Germany | 18051-28 | |
Papaverine | ESCA chemicals, Switzerland | RE 356 803 | |
Vein Pick | Harvard Apparatus, Cambridge, UK | 72-4169 | For single use only |
Saline | Laboratorium Dr. G. Bichsel AG, , Switzerland | 1330055 | |
Polysorb 5-0 suture | Covidien AG, Switzerland | UL 202 | Monofilament |
Sulfadoxine and Trimethoprim-Trimethazol | Werner Stricker AG, Switzerland | Swissmedic Nr. 50'361 | |
Antiseptic- Octenisept | Schülke & Mayr AG, Switzerland | GTIN: 4032651214068 | |
Phosphate Buffered Saline | Roth | 1058.1 | |
Isobutanol-2-Methylbutane | Sigma-Aldrich, Switzerland | M32631-1L | |
Optimum Cutting Temperature compound-Tissue-Tek | VWR Chemicals, Belgium | 25608-930 | |
Cryostat | Leica, Glattbrugg, Switzerland | Leica CM1860 UV | |
Glass slide- Superfrost Plus | Thermo Scientific | 4951PLUS4 | |
Mayer's Haematoxylin | Sigma-Aldrich, Switzerland | MHS32-1L | |
Eosin 0.5% aq. | Sigma-Aldrich, Switzerland | HT110232-1L | |
Oil Red O | Sigma-Aldrich, Switzerland | O0625-25G | |
α-smooth muscle actin antibody | Abcam, UK. | ab7817 | |
Macrophage Clone RAM11 antibody | DAKO, Switzerland | M063301 | |
Hoechst | Abcam, UK. | ab145596 | |
Goat polyclonal Secondary Antibody (Chromeo 546) | Abcam, UK. | ab60316 | |
Alexa Fluor 488/547 | Abcam, UK. | ||
Glycergel Mounting Medium, Aqueous | DAKO, Switzerland | C056330 | |
Hematoxylin for Movat pentachrome staining | Sigma-Aldrich, Switzerland | H3136-25G | |
Ferric chloride for Movat pentachrome staining | Sigma-Aldrich, Switzerland | 157740-100G | |
Iodine for Movat staining | Sigma-Aldrich, Switzerland | 207772-100G | |
Potassium iodide for Movat pentachrome staining | Sigma-Aldrich, Switzerland | 60400-100G-F | |
Alcian blue for Movat staining | Sigma-Aldrich, Switzerland | A5268-10G | |
Strong Ammonia for Movat pentachrome staining | Sigma-Aldrich, Switzerland | 320145-500ML | |
Brilliant crocein MOO for Movat pentachrome staining | Sigma-Aldrich, Switzerland | 210757-50G | |
Acid Fuchsin for Movat pentachrome staining | Sigma-Aldrich, Switzerland | F8129-50G | |
Sodium Thiosulfate for Movat pentachrome staining | Sigma-Aldrich, Switzerland | 72049-250G, | |
Phosphotungstic acid for Movat pentachrome staining | Sigma-Aldrich, Switzerland | 79690-100G | |
Crocin for Movat pentachrome staining | Sigma-Aldrich, Switzerland | 17304-5G | |
EUKITT for Movat pentachrome staining | Sigma-Aldrich, Switzerland | 03989-100ML |
Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи
Запросить разрешениеThis article has been published
Video Coming Soon
Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены