АВТОРЫ
СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

Войдите в систему

Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.

В этой статье

  • Резюме
  • Аннотация
  • Введение
  • протокол
  • Результаты
  • Обсуждение
  • Раскрытие информации
  • Благодарности
  • Материалы
  • Ссылки
  • Перепечатки и разрешения

Резюме

Здесь мы представляем протокол для изготовления электрода закрытого типа беспроводных Нанопор и последующих электрохимические измерения одного наночастиц столкновений.

Аннотация

Измерения внутренней функции единого наночастиц nanoelectrochemistry проводит глубокое фундаментальное значение и потенциальные последствия в нанонауки. Однако электрохимически анализа одного наночастиц является сложной задачей, как зондирования nanointerface неконтролируемой. Для решения этой проблемы, мы опишем здесь изготовления и характеристика закрытого типа беспроводных Нанопор электрода (WNE), что экспонаты очень управляемой морфологией и выдающиеся воспроизводимость. Легковесные изготовление WNE позволяет подготовке четко nanoelectrodes в общей химии лаборатории без использования чистой комнаты и дорогостоящего оборудования. Одно приложение 30 Нм, также выделяется WNE закрытого типа в анализе одного наночастиц золота в смесь, которая показывает высокое текущее разрешение 0.6 Па и высоким временным разрешением 0,01 г-жа сопровождении их отличные морфологии и малых диаметры, больше возможностей применения закрытого типа WNEs может быть расширена от характеристика наночастиц одной молекулы/Ион обнаружения и проверки одной ячейки.

Введение

Наночастицы привлекают огромное внимание из-за различных функций, таких как их каталитической способности, оптические особенности, electroactivity и высокой поверхности к объему соотношения1,2,3, 4. Электрохимический анализ одного наночастиц является прямой метод для понимания внутренней химических и электрохимических процессов на нано уровне. Для достижения высокочувствительный измерения одного наночастиц, двух электрохимических подходы применялись ранее зачитать наночастиц информацию из текущего ответы5,6,7. Один из этих подходов включает иммобилизации или захват отдельных наночастиц на интерфейсе nanoelectrode для изучения электрокатализа8,9. Другая стратегия управляется одной наночастиц столкновения с поверхностью электрода, который создает временные текущие колебания от динамических окислительно-восстановительного процесса.

Оба этих метода требуют наноразмерных сверхчувствительная зондирования интерфейса, который соответствует диаметр одного наночастиц. Однако традиционные изготовление nanoelectrodes главным образом включил микро электромеханических систем (МЭМС) или лазер потянув методы, которые являются утомительным и undisciplinable10,11,12, 13. К примеру МЭМС-изготовление nanoelectrodes дорого и требует использования чистую комнату, ограничение в массовое производство и популяризацию nanoelectrodes. С другой стороны лазер потянув изготовление nanoelectrodes опирается на опыт операторов во время уплотнения и потянув из металлической проволоки внутри капилляра. Если металлическая проволока не хорошо запечатанный в капилляр, разрыв между внутренней стенки nanopipette и проволока может резко превышение фона текущего шум и увеличить Электроактивные зондирования области. Эти недостатки основном уменьшение чувствительности nanoelectrode. С другой стороны существование разрыва может увеличить площадь электрода и уменьшить чувствительность nanoelectrode. Как следствие трудно гарантировать воспроизводимость производительности из-за неконтролируемой электрода морфологии в каждом процесс изготовления14,15. Таким образом общее производство метод nanoelectrodes с отличную воспроизводимость срочно необходима для облегчения электрохимические исследования встроенных функций единого наночастиц.

Недавно был разработан метод Нанопор как элегантный и этикетка свободный подход для одной молекулы анализ16,,1718,19,20. Благодаря контролируемым изготовление nanopipette обеспечивает наноразмерных родов, с единой диаметром от 30-200 Нм лазер капиллярного съемник21,22,23,24 . Кроме того эта процедура простой и воспроизводимое производство обеспечивает обобщение nanopipette. Недавно мы предложили беспроводной Нанопор электрода (WNE), которая не требует герметизации металлической проволоки внутри nanopipette. Через изготовление снисходительный и воспроизводимый процесс WNE обладает наноразмерных осаждения металла в nanopipette сформировать Электроактивные интерфейс25,26,27,28 . Так как WNE обладает четкой структуры и единообразных морфологии его заключения, он достигает высокой текущее разрешение, а также постоянная времени низкого сопротивления емкость (RC) для выполнения высокого временного разрешения. Мы сообщалось ранее два типа WNEs, открытого типа и закрытого типа, для реализации одной сущности анализа. Открытого типа WNE использует нанометаллов слоя, нанесенного на внутренней стенке nanopipette, который преобразует фарадических тока одну сущность ионной текущий ответ26. Как правило, диаметр открытого типа WNE составляет около 100 Нм. Для дальнейшего уменьшения диаметра WNE, мы представили WNE закрытого типа, в котором твердые металлические nanotip полностью занимает кончик nanopipette через химико электрохимический подход. Этот метод можно быстро генерировать 30 nm золота nanotip внутри Нанопор родов. Четко интерфейс на кончик области WNE закрытого типа обеспечивает высокое соотношение сигнал шум для электрохимических измерений одного наночастиц. Как взимается наночастиц золота сталкивается с WNE закрытого типа, сверхбыстрой зарядки разрядки процесс на кончик интерфейс вызывает ответ емкостной обратной связи (CFR) в ионных текущей трассировке. По сравнению с предыдущей одного наночастиц столкновения исследования через nanoelectrode с металлической проволоки внутри29, закрытого типа WNE показали выше текущее разрешение 0,6 ± 0,1 Па Па (RMS) и временным разрешением 0,01 МС.

Здесь мы описываем изготовление подробные процедуры для WNE закрытого типа, который контролируема размеры и выдающиеся воспроизводимость. В этот протокол, простой реакции между AuCl4– и BH4– предназначен для создания Золотой nanotip, что полностью блокирует отверстие nanopipette. Затем биполярный электрохимии принимается для непрерывного роста золота nanotip, который достигает длины нескольких микрометров внутри nanopipette. Эта простая процедура позволяет осуществление этой nanoelectrode изготовления, который может осуществляться в любой лаборатории общей химии без чистой комнате и дорогостоящего оборудования. Чтобы определить размер, морфология и внутренняя структура WNE закрытого типа, этот протокол обеспечивает подробную характеристику процедуры с использованием сканирующего электронного микроскопа (SEM) и флуоресцентной спектроскопии. Одним из последних примеров выделена, которая непосредственно измеряет внутренние и динамического взаимодействия наночастиц золота (AuNPs) столкновения к nanointerface WNE закрытого типа. Мы считаем, что WNE закрытого типа может проложить новый путь для будущих исследований электрохимических живых клеток, наноматериалы и датчики уровня одной сущности.

протокол

1. Подготовка решений

Примечание: Обратите внимание на общие меры предосторожности для всех химических веществ. Распоряжаться химических веществ в вытяжного шкафа и носить перчатки, защитные очки и халате. Храните легковоспламеняющиеся жидкости подальше от огня или искр. Все водные растворы были подготовлены с использованием ультрачистая вода (18,2 см MΩ при 25 ° C). Готовые решения были отфильтрованы с помощью фильтра размер пор 0,22 мкм.

  1. Приготовление раствора KCl
    1. Растворите 0,074 г хлористого калия в 100 мл деионизованной воды.
  2. Приготовление раствора4 NaBH
    1. Растворите 0,018 г натрия боргидрид в 10 мл этанола.
  3. Приготовление раствора4 HAuCl
    1. Растворите 0,010 г хлористого калия по 1 мл 1% раствора кислоты Тетрахлороауратовая.
  4. Подготовка силиконовая резина
    1. Смешайте силиконовая резина, содержащие часть А и часть B (см. Таблицу материалы) в соотношении 1:1 по объему.
    2. Используйте смешанные силиконовой резины для закрашивания области реакции на слайд сразу во время горшок 1 мин.
    3. Вылечить подготовленных силиконовая резина на слайде 5 мин.
  5. Подготовка наночастиц золота30
    1. Добавление 4,8 мл Тетрахлороауратовая кислоты с массовой долей 1% в 40 мл деионизованной воды с энергичным перемешиванием.
    2. Нагрейте раствор до кипения.
    3. Быстро добавьте 10 мл раствора цитрат натрия с массовой долей 1% в раствор.
    4. Тепла в решение для дополнительных 15 мин, до тех пор, пока окончательное решение красного цвета.
      Примечание: В нашем случае, Тетрахлороауратовая кислоты раствор быстро сократился тринатрия цитрат, и было отмечено, что решение быстро изменилось от ясно желтого до темно черного.

2. Подготовка экспериментальной установки

  1. Подготовка текущей системы измерения
    1. Включите в текущей системе измерений, содержащих Усилитель тока (см. Таблицу материалы) и система сбора данных низким уровнем шума (см. Таблицу материалы)
    2. Включите режим мембраной.
    3. Установка полосы пропускания фильтра ставку проб и 10 кГц до 100 кГц.
    4. Соберите собственной разработки конкретных домашнее меди клетке оградить внешних шумов для экспериментальной клетки и предварительный усилитель на инвертированного микроскопа (см. Таблицу материалы).
    5. Молотый оболочка клетки Фарадея, корпуса усилителя, и системы инвертированным микроскопом.
  2. Установка системы обнаружения темно поле
    1. Поколения золота nanotip внутри nanopipette контролируется в темноте – поле Микроскоп.
      Примечание: Система инвертированным микроскопом (см. Таблицу материалы) используется для изображения и спектры рассеяния. Полноцветные цифровой CCD-камера используется для получения изображений nanopipette и Нанопор электрода. Темно поле конденсатора [числовой апертуры (NA) = 0,8 – 0,95)] используется сформировать темно поле освещения. 10 X (NA = 0,3), 20 X (NA = 0,45) и 40 X (NA = 0,6) целей используются для сбора изображений WNE закрытого типа. Флуоресценции обнаружения используется для дальнейшей проверки, имеются ли пробелы между nanotip и внутренней стенки nanopipette. Этот эксперимент осуществляется другой EMCCD (см. Таблицу материалы) также интегрированы на инвертированным микроскопом, и возбуждения горит встроенный ртутная лампа с полосовой фильтр 450-490 Нм.

3. Изготовление WNE закрытого типа

  1. Изготовление nanopipettes
    1. Положите кварцевые капилляры (см. Таблицу материалы) в 15 мл пластиковых пробирок, наполненный ацетон для ультразвуковой очистки в 10 минут.
    2. Слить ацетон, затем добавить этанола в же пластиковых пробирок.
    3. Положите пластиковых пробирок в ультразвуковой очиститель для очистки в 10 минут.
    4. Положите капилляров в еще 15 мл пластиковых пробирок с дейонизированной водой для удаления этанола, с ультразвуковой очистки в 10 минут.
    5. Постоянно ультразвуковой чистой капилляров в три раза с деионизированной водой, чтобы удалить остаточные этанола.
    6. Сухие капилляров, используя поток газа азота.
    7. Держите капилляров в новой, чистой пластиковых пробирок.
    8. Включите лазер съемник CO2 (см. Таблицу материалы)
    9. Разогрейте съемник для 15-20 мин обеспечить устойчивый лазерной энергии.
    10. Установите очищенный капилляров в провокатор.
    11. Установите параметры потянув тепла, накаливания, скорости, задержка, и тяговое усилие на панели CO2 лазера съемник для определенного диаметра. Подробный параметр для буксировки 30 nanopipette диаметре Нм в этот протокол показано в таблице 1 (рис. 1).
    12. Исправить подготовленный nanopipette на чашку Петри с многоразовые клей (см. Таблицу материалы) для дальнейшей характеризации.
  2. Изготовление WNE закрытого типа
    1. Inject 10 мкл приготовленный раствор4 HAuCl в nanopipette с microloader.
    2. Центрифуга nanopipette для 5 минут около 1878 x g для удаления пузырьков воздуха в nanopipette.
      Примечание: Для этого шага, мы разместили nanopipette с наконечником, вниз в домашней держатель в 2-мл пробирку центрифуги.
    3. Исправить nanopipette на coverslip с подготовленной силиконовая резина (см. шаг 1.4) и определить область внутри nanopipette как в сторону «СНГ» и за ее пределами как сторона «транс».
    4. Подождите 5 мин, пока лечится резиновые.
    5. Положите комплексной ансамбля на объективную таблицу инвертированным микроскопом.
    6. Включите и отрегулировать освещение темно поле сосредоточиться кончик nanopipette под объектив микроскопа 10 X.
    7. Изменения до 20 X и 40 X цели более высоким пространственным разрешением.
    8. Поместите один Ag/AgCl электродов внутри nanopipette.
    9. Место других обоснованных Ag/AgCl электродов в сторону транс .
    10. Подключите Ag/AgCl электродов для предварительного усилителя.
    11. Включите текущей системы измерения и соответствующее программное обеспечение (см. Таблицу материалы) для ионных текущей записи.
    12. Установите прикладной потенциал 300 мВ.
    13. Медленно добавьте 150 мкл раствора4 NaBH в сторону транс для инициирования реакции между HAuCl4 и NaBH4 (рис. 2).
      Примечание: Со скоростью бурной реакции происходит сокращение4 NaBH в водном растворе. Таким образом поколение2 H от сокращения NaBH4 может вызвать дефектной структуры nanotip поколение полостей во время роста золота nanotip.
    14. Одновременно, электрически и оптически запись текущей трассировке и темные области изображения/рассеяния спектры с использованием текущего измерения и темно поле обнаружения систем (рис. 3).
      Примечание: Этанола раствор летучих при освещении темно поля. Обратите внимание на объем этанола в процессе изготовления.
    15. Выключить прикладной потенциал после ионного текущего отслеживания обратно до 0 Па.
    16. Мыть приготовленные WNE закрытого типа с проточной деионизированной воды от дна до кончика.
  3. Характеристика WNE закрытого типа
    1. Характеризуют WNE закрытого типа с сканирующего электронного микроскопа (SEM), который является общий метод для характеризации nanopipettes22,,3132,33,34 .
    2. Используйте кальций иона флуоресцентные эксперимент для проверки уплотнения состояние Золотой nanotip внутри nanopipette.
      1. Inject 10 мкл раствора2 CaCl в СНГ стороне закрытого типа WNE и Fluo-8 решения в сторону транс .
      2. Подключите Ag/AgCl электродов для headstage.
    3. Применить 400 МВ уклоном потенциал и использовать EMCCD (см. Таблицу материалы) для мониторинга флуоресценции ответ в области подсказки. Использовать фокус ионов пучка (FIB) лепить закрытого типа WNE от кончика на дно, а затем определить длину внутренних слоя металла или nanotip с SEM характеристика.
  4. Наночастицы одного столкновение с WNE закрытого типа
    1. Измените решение в транс и СНГ стороны раствором KCl после изготовления WNE закрытого типа.
    2. Передача 50 мкл раствора 30 Нм золотых наночастиц в сторону транс . Запишите текущий сигнал одного наночастиц столкновений на потенциал 300 мВ (рис. 5).
    3. Измените приложенного напряжения для мониторинга частоты, амплитуды и формы изменения текущего сигнала.

Результаты

Мы демонстрируем снисходительный подход для изготовления четко 30 Нм беспроводной Нанопор электрод на основе кварца коническая nanopipette. Изготовление nanopipette показана в рис 1, который включает в себя три основных действия. Микрокапиллярной с внутренним ди...

Обсуждение

Изготовление четко nanopipette является первым шагом в процессе изготовления WNE закрытого типа. Сосредоточив CO2 лазера на центр капилляра, один капилляр разделяется на две симметричные nanopipettes с наночастицами конической советы. Диаметр легко управляется, начиная от 30-200 Нм, регулируя па...

Раскрытие информации

Авторы заявляют не конфликты интересов.

Благодарности

Это исследование было поддержано Фонд национального естественных наук Китая (61871183,21834001), инновационной программы из Шанхая муниципального образования Комиссии (2017-01-07-00-02-E00023), проект «Чэнь Гуан» от Шанхай муниципального образования Комиссия и Фонд развития образования Шанхай (17CG 27).

Материалы

NameCompanyCatalog NumberComments
AcetoneSigma-Aldrich650501Highly flammable and volatile
Analytical balanceMettler ToledoME104E
Axopatch 200B amplifierMolecular Devices
Blu-Tack reusable adhesiveBostik
Centrifuge tubeCorning Inc.Centrifuge Tubes with CentriStar Cap, 15 ml
Chloroauric acidEnergy ChemicalE0601760010HAuCl4
Clampfit 10.4 softwareMolecular Devices
Digidata 1550A digitizerMolecular Devices
DS Fi1c true-color CCD cameraNikon
Ecoflex 5 Addtion cure silicone rubberSmooth-On17050377
Eppendorf Reference 2 pipettesEppendorf49200090410, 100 and 1000 µL
EthanolSigma-Aldrich24102Highly flammable and volatile
Faraday cageCopper
iXon 888 EMCCDAndor
Microcentrifuge tubesAxygen Scientific0.6, 1.5 and 2.0 mL
MicroloaderEppendorf5242 956.00320 µL
Microscope Cover GlassFisher ScientificLOT 1693820 mm*60 mm-1 mm thick
Milli-Q water purifierMilliporeSIMS00000Denton Electron Beam Evaporator
P-2000 laser pullerSutter Instrument
Pipette tipsAxygen Scientific10, 200 and 1,000 µL
Potassium chloride,+D25+A2:F2+A2:F25Sigma AldrichP9333-500GKCl
Quartz pipettesSutterQF100-50-7.5O.D.:1.0 mm, I.D.:0.5 mm, 75 mm length
RefrigeratorSiemens
Silicone thinnerSmooth-On1506330
Silver wireAlfa Aesar11466
Sodium borohydride,Tianlian Chem. Tech.71320NaBH4
Ti-U inverted dark-field microscopeNikon

Ссылки

  1. Vajda, S., et al. Subnanometre platinum clusters as highly active and selective catalysts for the oxidative dehydrogenation of propane. Nature Materials. 8 (3), 213-216 (2009).
  2. Liu, G. L., Long, Y. T., Choi, Y., Kang, T., Lee, L. P. Quantized plasmon quenching dips nanospectroscopy via plasmon resonance energy transfer. Nature Methods. 4 (12), 1015-1017 (2007).
  3. Hu, J. S., et al. Mass production and high photocatalytic activity of ZnS nanoporous nanoparticles. Angewandte Chemie International Edtion. 44 (8), 1269-1273 (2005).
  4. Martinez, B., Obradors, X., Balcells, L., Rouanet, A., Monty, C. Low temperature surface spin-glass transition in γ-Fe 2 O 3 nanoparticles. Physical Review Letters. 80 (1), 181 (1998).
  5. Fang, Y., et al. Plasmonic Imaging of Electrochemical Reactions of Single Nanoparticles. Accounts of Chemical Research. 49 (11), 2614-2624 (2016).
  6. Mirkin, M. V., Sun, T., Yu, Y., Zhou, M. Electrochemistry at One Nanoparticle. Accounts of Chemical Research. 49 (10), 2328-2335 (2016).
  7. Murray, R. W. Nanoelectrochemistry: metal nanoparticles, nanoelectrodes, and nanopores. Chemical Reviews. 108 (7), 2688-2720 (2008).
  8. Anderson, T. J., Zhang, B. Single-Nanoparticle Electrochemistry through Immobilization and Collision. Accounts of Chemical Research. 49 (11), 2625-2631 (2016).
  9. Fu, K., Bohn, P. W. Nanopore Electrochemistry: A Nexus for Molecular Control of Electron Transfer Reactions. ACS Central Science. 4 (1), 20-29 (2018).
  10. Zaino, L. P., Ma, C., Bohn, P. W. Nanopore-enabled electrode arrays and ensembles. Microchimica Acta. 183 (3), 1019-1032 (2016).
  11. Katemann, B. B., Schuhmann, W. Fabrication and Characterization of Needle-Type. Electroanalysis. 14 (1), 22-28 (2002).
  12. Penner, R. M., Heben, M. J., Longin, T. L., Lewis, N. S. Fabrication and use of nanometer-sized electrodes in electrochemistry. Science. 250 (4984), 1118-1121 (1990).
  13. Watkins, J. J., et al. Zeptomole voltammetric detection and electron-transfer rate measurements using platinum electrodes of nanometer dimensions. Analytical Chemistry. 75 (16), 3962-3971 (2003).
  14. Liu, Y., Li, M., Zhang, F., Zhu, A., Shi, G. Development of Au Disk Nanoelectrode Down to 3 nm in Radius for Detection of Dopamine Release from a Single Cell. Analytical Chemistry. 87 (11), 5531-5538 (2015).
  15. Li, Y., Bergman, D., Zhang, B. Preparation and electrochemical response of 1-3 nm Pt disk electrodes. Analytical Chemistry. 81 (13), 5496-5502 (2009).
  16. Kasianowicz, J. J., Brandin, E., Branton, D., Deamer, D. W. Characterization of individual polynucleotide molecules using a membrane channel. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 93 (24), 13770-13773 (1996).
  17. Cao, C., et al. Discrimination of oligonucleotides of different lengths with a wild-type aerolysin nanopore. Nature Nanotechnology. 11 (8), 713-718 (2016).
  18. Cao, C., Long, Y. -. T. Biological Nanopores: Confined Spaces for Electrochemical Single-Molecule Analysis. Accounts of Chemical Research. 51 (2), 331-341 (2018).
  19. Sha, J. J., Si, W., Xu, W., Zou, Y. R., Chen, Y. F. Glass capillary nanopore for single molecule detection. Science China-Technological Sciences. 58 (5), 803-812 (2015).
  20. Ying, Y. L., Zhang, J., Gao, R., Long, Y. T. Nanopore-based sequencing and detection of nucleic acids. Angewandte Chemie International Edition. 52 (50), 13154-13161 (2013).
  21. Lan, W. J., Holden, D. A., Zhang, B., White, H. S. Nanoparticle transport in conical-shaped nanopores. Analytical Chemistry. 83 (10), 3840-3847 (2011).
  22. Karhanek, M., Kemp, J. T., Pourmand, N., Davis, R. W., Webb, C. D. Single DNA molecule detection using nanopipettes and nanoparticles. Nano Letters. 5 (2), 403-407 (2005).
  23. Morris, C. A., Friedman, A. K., Baker, L. A. Applications of nanopipettes in the analytical sciences. Analyst. 135 (9), 2190-2202 (2010).
  24. Yu, R. -. J., Ying, Y. -. L., Gao, R., Long, Y. -. T. Confined Nanopipette Sensing: From Single Molecules, Single Nanoparticles to Single Cells. Angewandte Chemie Interntaional Edition. , (2018).
  25. Gao, R., et al. A 30 nm Nanopore Electrode: Facile Fabrication and Direct Insights into the Intrinsic Feature of Single Nanoparticle Collisions. Angewandte Chemie Interntaional Edition. 57 (4), 1011-1015 (2018).
  26. Ying, Y. L., et al. Asymmetric Nanopore Electrode-Based Amplification for Electron Transfer Imaging in Live Cells. Journal of the American Chemical Society. 140 (16), 5385-5392 (2018).
  27. Gao, R., Ying, Y. L., Hu, Y. X., Li, Y. J., Long, Y. T. Wireless Bipolar Nanopore Electrode for Single Small Molecule Detection. Analytical Chemistry. 89 (14), 7382-7387 (2017).
  28. Gao, R., et al. Dynamic Self-Assembly of Homogenous Microcyclic Structures Controlled by a Silver-Coated Nanopore. Small. 13 (25), (2017).
  29. Kim, B. K., Kim, J., Bard, A. J. Electrochemistry of a single attoliter emulsion droplet in collisions. Journal of the American Chemical Society. 137 (6), 2343-2349 (2015).
  30. Lee, P. C., Meisel, D. Adsorption and surface-enhanced Raman of dyes on silver and gold sols. Journal of Physical Chemistry. 86 (17), 3391-3395 (1982).
  31. Steinbock, L. J., Otto, O., Chimerel, C., Gornall, J., Keyser, U. F. Detecting DNA folding with nanocapillaries. Nano Letters. 10 (7), 2493-2497 (2010).
  32. Gong, X., et al. Label-free in-flow detection of single DNA molecules using glass nanopipettes. Analytical Chemistry. 86 (1), 835-841 (2013).
  33. Cadinu, P., et al. Double Barrel Nanopores as a New Tool for Controlling Single-Molecule Transport. Nano Letters. 18 (4), 2738-2745 (2018).
  34. Bell, N. A., Keyser, U. F. Digitally encoded DNA nanostructures for multiplexed, single-molecule protein sensing with nanopores. Nature Nanotechnology. 11 (7), 645-651 (2016).

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи

Запросить разрешение

Смотреть дополнительные статьи

145

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Конфиденциальность

Условия эксплуатации

Политика

СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

РЕКОМЕНДОВАТЬ БИБЛИОТЕКЕ

НОВОСТИ JoVE

Исследования

Образование

АВТОРЫ

Библиотекарь

О JoVE

Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены