Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.
Здесь мы предоставляем полезный подход для изучения механизма правого желудочкового отказа. Более удобный и эффективный подход к сужению легочной артерии устанавливается с помощью хирургических инструментов, сделанных в доме. Кроме того, предоставляются методы оценки качества этого подхода с помощью эхокардиографии и катетеризации.
Механизм правого желудочкового отказа (РВФ) требует уточнения в связи с уникальностью, высокой заболеваемостью, высокой смертностью и огнеупорным характером РВФ. Предыдущие модели крыс, имитирующих прогрессию РВФ, были описаны. По сравнению с крысами, мыши более доступны, экономичны и широко используются в экспериментах на животных. Мы разработали легочной артерии сужения (PAC) подход, который состоит из полоскания легочного ствола у мышей, чтобы вызвать право желудочков (Р.) гипертрофии. Была разработана специальная хирургическая игла для защелки, которая позволяет легче отделить аорту и легочную туловище. В наших экспериментах использование этой сфабрикованной иглы защелки снизило риск развития артериоррексиса и улучшило частоту хирургического успеха до 90%. Мы использовали различные диаметры обивки иглы точно создать количественное сужение, которое может вызвать различные степени гипертрофии Р. Мы количественно степень сужения путем оценки скорости кровотока ПА, которая была измерена неинвазивной трансторакальной эхокардиографии. Функция Р.В. была точно оценена по катетеризации правильного сердца через 8 недель после операции. Хирургические инструменты, изготовленные в доме, состояли из общих материалов, используя простой процесс, который легко освоить. Таким образом, описанный здесь подход PAC легко имитировать с помощью инструментов, сделанных в лаборатории, и может быть широко использован в других лабораториях. Это исследование представляет собой модифицированный подход PAC, который имеет более высокий показатель успеха, чем другие модели и 8-недельный постхирургии выживаемости 97,8%. Такой подход PAC обеспечивает полезную технику для изучения механизма РВФ и позволит более глубоко понять РВФ.
Дисфункция Р.В. (RVD), определяется здесь как свидетельство ненормальной структуры Р. или функции, связано с плохими клиническими исходами. РВФ, как конечная стадия функции Р.В., является клиническим синдромом с признаками и симптомами сердечной недостаточности, которые являются результатом прогрессивного РВД1. С различиями в структуре и физиологической функции, левый желудочковый (LV) отказ и РВФ имеют различные патофизиологические механизмы. Несколько независимых патофизиологических механизмов в РВФ были зарегистрированы, в том числе переэкспрессия 2-адренергического рецептора сигнализации2, воспаление3, поперечная труба ремоделирования, и Ca2 "обработка дисфункции4 .
РВФ может быть вызвано объемом или перегрузкой р.в. Предыдущие модели животных использовали SU5416 (мощный и селективный ингибитор сосудистого эндотелиального рецептора фактора роста) в сочетании с гипоксией (SuHx)5,6 или монокроталин7, чтобы вызвать легочную гипертензию, которая приводит к вторичному РВФ к легочо-сосудистому заболеванию2. Исследователи, проводящие эти исследования, сосредоточились на сосудистой, а не на патологическом прогрессировании РВФ. Кроме того, монокроталин имеет экстра-сердечные эффекты, которые не могут точно представлять сердечно-сосудистые заболевания. Другие модели использовали артериовенные шунты, чтобы вызвать перегрузку громкости и RVF8. Тем не менее, эта операция трудно выполнить и не подходит для мышей, которые требуют длительных периодов индукции для производства РВФ.
Крыса PAC модели с использованием бандажа клипы также существуют9,10. По сравнению с крысами, мыши имеют много преимуществ, как животные модели сердечных заболеваний, таких как более легкое размножение, более широкое использование, снижение затрат, и доступ к модификации гена11. Тем не менее, диаметры бандажклипов обычно варьируются от 0,5 мм до 1,0 мм, которые слишком велики для мышей9. Кроме того, клип на полоску трудно производить, подражать и популяризировать в других лабораториях.
Мы предоставляем протокол для разработки модифицированной репродуктивной модели мыши РВФ на основе зарегистрированных исследований, которая использует PAC, чтобы имитировать тетралогию синдрома Фалло и Нунана или других легочных артериальных гипертензивных заболеваний12,13, 14,15,16,17,18,19. Этот подход PAC создан путем ligating легочного ствола мышей с помощью защелки и обивка иглы, сделанные inhouse для контроля степени сужения. Игла защелки изготовлена из изогнутого инъекционного шприца на 90 градусов с плетеным шелковым швом, прятамым через шприц. Игла сделана из общих материалов, используя процесс, который легко освоить. Обивка иглы изогнутые 120 "от калибровочных иглы. Используемые надбивые иглы с различнымдиаметрами (0,6-0,8 мм) в зависимости от веса мышей (20-35 г). Кроме того, мы устанавливаем критерий оценки для определения стабильности и качества модели RVF с помощью эхокардиографии и катетеризации правого сердца. Мы используем мышей в качестве модели животного из-за их широкого использования в других экспериментах. Иглы, изготовленные в лаборатории, легко размножаются и могут широко использоваться в других лабораториях. Это исследование обеспечивает хороший подход для исследователей, чтобы исследовать механизм RVF.
Все процедуры были выполнены в соответствии с институциональными руководящими принципами для исследований на животных, которые соответствуют Руководству по уходу и использованию лабораторных животных, опубликованному Национальными институтами здравоохранения США (NIH Publication No 85-23, пересмотрено в 1996 году). C57BL/6 мышей (8-10 недель, весом 20-25 г) были предоставлены Центром животных южного медицинского университета. После прибытия, мышей были размещены под 12/12 ч темного / светового цикла, с достаточным количеством пищи и воды.
1. Подготовка хирургических инструментов и изготовление игл
2. Подготовка к операции
3. Хирургия
4. Эхокардиографическая оценка функции Р.В. после операции
ПРИМЕЧАНИЕ: Эхокардиографические изменения могут быть обнаружены через 3 дня после операции.
5. Катетеризация правого сердца для оценки функции Р.В.
ПРИМЕЧАНИЕ: Катетеризация правого сердца была выполнена через 8 недель после операции для оценки функции Р.В. с использованием катетера 1.0 F и системы мониторинга.
В этом исследовании мыши были случайным образом назначены в группу PAC (n No 9) или группу фиктивных операций (n No 10). Эхокардиография была проведена в 1, 4 и 8 недель после операции. Через восемь недель после операции, после последней оценки эхокардиографии и катетер...
Патологическое увеличение давления р.в. приводит к смещению перегородки влево, что может изменить геометрию LV21. Эти изменения способствуют снижению сердечного выброса и лВ-выброса фракции (LVEF), которые могут вызвать гемодинамическое расстройство кровеносной системы
Авторам нечего раскрывать.
Эта работа была поддержана грантами От Национального фонда естественных наук Китая (81570464, 81770271; д-р Ляо) и муниципальных проектов планирования научных технологий Гуанчжоу (201804020083) (д-р Ляо).
Name | Company | Catalog Number | Comments |
ALC-V8S ventilator | SHANGHAI ALCOTT BIOTECH CO | ALC-V8S | Assist ventilation |
Animal Mini Ventilator | Haverd | Type 845 | Assist ventilation |
Animal ultrasound system VEVO2100 | Visual Sonic | VEVO2100 | Echocardiography |
Cold light illuminator | Olympus | ILD-2 | Light |
Heat pad- thermostatic surgical system (ALC-HTP-S1) | SHANGHAI ALCOTT BIOTECH CO | ALC-HTP-S1 | Heating |
Isoflurane | RWD life science | R510-22 | Inhalant anaesthesia |
Matrx VIP 3000 Isofurane Vaporizer | Midmark Corporation | VIP 3000 | Anesthetization |
Medical braided silk suture (6-0) | Shanghai Pudong Jinhuan Medical Supplies Co. | 6-0 | Ligation |
Medical nylon suture (5-0) | Ningbo Medical Needle Co. | 5-0 | Suture |
Millar Catheter (1.0 F) | AD instruments | 1.0F | For right heart catheterization |
Pentobarbital sodium salt | Merck | 25MG | Anesthetization |
PowerLab multi-Directional physiological Recording System | AD instruments | 4/35 | Record the result of right heart catheterization |
Precision electronic balance | Denver Instrument | TB-114 | Weighing sensor |
Self-made latch needle | Separate the aorta and pulmonary trunk | ||
Self-made padding needle | Constriction | ||
Self-made tracheal intubation | Tracheal intubation | ||
Small animal microsurgery equipment | Napox | MA-65 | Surgical instruments |
Transmission Gel | Guang Gong pai | 250ML | Echocardiography |
Veet hair removal cream | Reckitt Benchiser | RQ/B 33 Type 2 | Remove hair of mice |
Vertical automatic electrothermal pressure steam sterilizer | Hefei Huatai Medical Equipment Co. | LX-B50L | Auto clean the surgical instruments |
Vertical small animal surgery microscope | Yihua Optical Instrument | Y-HX-4A | For right heart catheterization |
Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи
Запросить разрешениеСмотреть дополнительные статьи
This article has been published
Video Coming Soon
Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены