Сравнение методов выделения энтомопатогенных грибов из образцов почвы

Резюме

Энтомопатогенные грибковые колонии выделяют из образцов тропической почвы с помощью приманки Tenebrio , приманки Galleria , а также селективной искусственной среды, т. е. агара декстрозы картофеля, обогащенного дрожжевым экстрактом, дополненным хлорамфениколом, тиабендазолом и циклогексимидом (среда CTC).

Аннотация

Целью настоящего исследования является сравнение эффективности использования приманок от насекомых с искусственной селективной средой для выделения энтомопатогенных грибов (EPF) из образцов почвы. Почва является богатой средой обитания для микроорганизмов, в том числе EPF, особенно принадлежащих к родам Metarhizium и Beauveria, которые могут регулировать вредителей членистоногих. Биопрепараты на основе грибов доступны на рынке в основном для борьбы с вредителями сельскохозяйственных членистоногих. Тем не менее, несмотря на высокое эндемичное биоразнообразие, лишь немногие штаммы используются в коммерческих биопродуктах во всем мире. В настоящем исследовании 524 образца почвы были выращены на агаре декстрозы картофеля, обогащенном дрожжевым экстрактом, дополненным хлорамфениколом, тиабендазолом и циклогексимидом (среда CTC). Рост колоний грибов наблюдался в течение 3 недель. Все Metarhizium и Beauveria EPF были морфологически идентифицированы на уровне рода. Кроме того, некоторые изоляты были молекулярно идентифицированы на уровне видов. Двадцать четыре из этих 524 образцов почвы были также исследованы на предмет появления EPF с использованием метода приманки для насекомых (Galleria mellonella и Tenebrio molitor). В общей сложности 51 штамм EPF был выделен (41 Metarhizium spp. и 10 Beauveria spp.) из 524 образцов почвы. Все грибковые штаммы были выделены либо из пахотных земель, либо из лугов. Из 24 образцов, отобранных для сравнения, 91,7% были положительными на EPF с использованием приманки Galleria , 62,5% с использованием приманки Tenebrio и 41,7% с использованием CTC. Наши результаты показали, что использование приманок для насекомых для изоляции EPF от почвы более эффективно, чем использование среды CTC. Сравнение методов изоляции в дополнение к идентификации и сохранению EPF оказывает положительное влияние на знания о биоразнообразии. Улучшение коллекции EPF поддерживает научное развитие и технологические инновации.

Введение

Почва является источником нескольких микроорганизмов, в том числе энтомопатогенных грибов (EPF). Эта конкретная группа грибов признана по их способности колонизировать и часто убивать членистоногих хозяев, особенно насекомых¹. После выделения, характеризации, отбора вирулентных штаммов и регистрации EPF массово производятся для борьбы с членистоногими вредителями, что подтверждает их экономическую значимость². Соответственно, выделение EPF считается первым шагом к разработке биопестицида. Beauveria spp. (Hypocreales: Cordycipitaceae) и Metarhizium spp. (Hypocreales: Clavicipitaceae) являются наиболее ра....

протокол

Поскольку в настоящем исследовании был получен доступ к бразильскому генетическому наследию, исследование было зарегистрировано в Национальной системе управления генетическим наследием и связанными с ним традиционными знаниями (Sisgen) под кодом AA47CB6.

1. Отбор проб почвы

1. Соберите 800 г почвы (с вторичными корнями растений или без них) на глубину до 10 см с помощью небольшой лопаты. Храните их в полипропиленовых мешках при комнатной температуре до начала эксперимента.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Небольшие корни также могут быть собраны, поскольку СООБЩАЕТСЯ, что EPF обладают компетенцией в ризосфере. Чем быстрее обработка об....

Результаты

В общей сложности 524 образца почвы были взяты с лугов: пастбищ скота (165 образцов), местных тропических лесов (90 образцов), берега озера (42 образца) и культивируемых / пахотных земель (227 образцов) в период с 2015 по 2018 год в штате Рио-де-Жанейро, Бразилия. Подробная информация о географических к.......

Обсуждение

Естественные и сельскохозяйственные почвенные среды обитания являются типичными средами для EPF²² и отличным природным резервуаром. В настоящем исследовании рассматривались два метода изоляции EPF с использованием приманок от насекомых по сравнению с селективной средой. П?.......

Материалы

Name	Company	Catalog Number	Comments
Autoclave	Phoenix Luferco	9451
Biosafety cabinet	Airstream ESCO	AC2-4E3
Chloramphenicol	Sigma-Aldrich	C0378
Climate chambers	Eletrolab	EL212/3
Coverslip	RBR	3871
Cycloheximide	Sigma-Aldrich	C7698
Drigalski spatula	Marienfeld	1800024
GPS app	Geolocation app	2.1.2005
Lactophenol blue solution	Sigma-Aldrich	61335
Microscope	Zeiss Axio star plus	1169 149
Microscope camera	Zeiss Axiocam 105 color	426555-0000-000
Microscope softwere	Zen lite Zeiss 3.0
Microscope slide	Olen	k5-7105-1
Microtube	BRAND	Z336769-1PAK
Petri plates	Kasvi	K30-6015
Pipette tip	Vatten	VT-230-200C/VT-230-1000C
Pippette	HTL - Labmatepro	LMP 200 / LMP 1000
Plastic pots	Prafesta descartáveis	8314
Polypropylene bags	Extrusa	38034273/5561
Potato dextrose agar	Kasvi	K25-1022
Prism software 9.1.2	Graph Pad
Shovel	Tramontina	77907009
Tenebrio mollitor	Safari	QP98DLZ36
Thiabendazole	Sigma-Aldrich	T8904
Tween 80	Vetec	60REAVET003662
Vortex	Biomixer	QL-901
Yeast extract	Kasvi	K25-1702