Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.

В этой статье

  • Резюме
  • Аннотация
  • Введение
  • протокол
  • Результаты
  • Обсуждение
  • Раскрытие информации
  • Благодарности
  • Материалы
  • Ссылки
  • Перепечатки и разрешения

Резюме

В этой статье мы приводим подробный протокол одностадийного метода трансформации, опосредованного Agrobacterium tumefaciens , для получения сложных растений.

Аннотация

Получение сложных растений с трансгенными корнями и нетрансгенными стеблями и почками с использованием опосредованной Agrobacterium rhizogenes волосистой трансформации корня является мощным инструментом для изучения биологии корней. Волосистая корневая трансформация устанавливается у широкого круга двудольных и у нескольких однодольных видов и почти не зависит от генотипа. Традиционный метод инъекции гипокотила с A. rhizogenes для получения сложных растений является неэффективным, трудоемким, трудоемким и часто приводит к гибели нежных и крошечных растений гипокотиля. Ранее была установлена высокоэффективная одноступенчатая волосистая корневая трансформация, опосредованная A. rhizogenes , которая устраняет необходимость пересадки после образования волосистых корней. В этом исследовании частичный гипокотиль и первичный корень были удалены, место разреза гипокотиль было покрыто A. rhizogenes, а затем гипокотиль был посажен в стерильный вермикулит. Через 12 дней культивирования разрез гипокотиля расширился и были индуцированы новые волосистые корни. В данной статье представлен подробный протокол одностадийного метода трансформации, опосредованного A. rhizogenes, эффективность которого продемонстрирована на производстве композиционных растений дикой сои, Solanum americanum и тыквы.

Введение

Agrobacterium rhizogenes — грамотрицательная почвенная бактерия из семейства Rhizobiaceae. A. rhizogenes может инфицировать почти все двудольные, несколько однодольных и отдельные голосеменные через раны, образуя волосистые корни у зараженных растений. Бактерия несет плазмиду Ri (индуцирующую корень), а Т-ДНК плазмиды Ri несет ген синтеза опина и гены rol (гены корневого локуса). После того, как Т-ДНК плазмиды Ri проникает в растительную клетку и интегрируется в хромосому хозяина, экспрессия генов rol индуцирует образование волосистых корней1. Бинарный вектор экспрессии растений, несущий ген-мишень,....

протокол

1. Условия произрастания растений и культура A. rhizogenes

  1. Посев семян
    ПРИМЕЧАНИЕ: Семена дикой сои были собраны в уезде Янгу, Ляочэн, Китай; На рынке были куплены семена S. americanum и тыквы местного сорта Yinsu.
    1. Соберите семена дикой сои, S. americanum, местного сорта тыквы, посейте их в вермикулит на глубину 1 см и тщательно полейте. Посадите 20 семян в пластиковые коробки размером 8 см х 11 см х 9 см. Культивируйте растения в ростовой камере при температуре 24 ± 2 °C с циклом 16 часов света и 8 часов темноты при относительной влажности воздуха около 70%.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Оболочки семян дикой сои должн....

Результаты

Высокоэффективная одностадийная волосистая корневая трансформация A. rhizogenes, опосредованная
Волосистые корни образовывались в месте разреза гипокотиля через 12 дней после инокуляции инженерным препаратом K599. Трансгенные волосистые корни определяли на основе экспресси.......

Обсуждение

Одностадийный метод волосистого корня, опосредованный A. rhizogenes, является более простым и эффективным методом получения сложных растений, чем метод гипокотильной инъекции. Одноэтапный метод ARM значительно повышает эффективность трансформации волосистых корней, сокращает время об.......

Раскрытие информации

У авторов нет конфликта интересов, о котором можно было бы заявлять.

Благодарности

Работа выполнена при поддержке Научно-исследовательского фонда Ляочэнского университета (318012028) и Фонда естественных наук провинции Шаньдун (ZR2020MC034).

....

Материалы

NameCompanyCatalog NumberComments
kanamycinSangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.A506636
LB mediumSangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.B540113
plastic boxLiaoSu8 cm x 11 cm x 9 cm
pumpkinlocal variety Yinsu
streptomycinSangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.A610494 
Tanon-5200Multi machineTanon Co., Ltd., China5200Multichemiluminescence imaging system
tomatolocal variety Zhongshu4
wild soybeancollected in Yanggu County, Liaocheng, China

Ссылки

  1. Chilton, M. D., et al. Agrobacterium rhizogenes inserts T-DNA into the genome of the host plant root cells. Nature. 295, 432-434 (1982).
  2. Fan, Y., et al.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи

Запросить разрешение

Смотреть дополнительные статьи

196

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Исследования

Образование

О JoVE

Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены