Центрифугируют распакованный размороженный образец при 10 000 г в течение двух минут при комнатной температуре. Понаблюдайте за образцом, чтобы определить осадки, цвет и состояние. Нагрейте подготовленную пластину с 1 536 лунками до 23 градусов по Цельсию, а затем центрифугируйте ее при 150 г в течение пяти минут.
Используя светлопольный микроскоп, сфотографируйте тарелку с коктейлем только для использования в качестве отрицательного контроля. Распределите 200 нанолитров образца в каждую лунку с помощью робота для обработки жидкости. После центрифугирования пластины при 150 г инкубируйте ее при желаемой температуре в течение шести недель.
Делайте снимки яркого поля тарелок с образцами с еженедельными интервалами с 1-го по 6-й день. Выполняйте звуковую визуализацию с помощью SHG и UV-TPEF. Автоматизированная визуализация пластин на протяжении всего эксперимента позволила идентифицировать быстрорастущие и медленно растущие кристаллы в светлом поле.
Визуализация УФ-TPEF показала белковую природу, в то время как визуализация SHG подтвердила кристаллическую природу образца. Звуковая визуализация позволила идентифицировать кристаллы, скрытые осаждением или пленкой, которые не производят сигнал SHG, или микрокристаллы, которые могут быть ошибочно приняты за осадок. Также были идентифицированы небелковые кристаллы, в которых отсутствует сигнал УФ-TPEF, но демонстрируются сильные сигналы светлого поля и SHG.
