Вирусная инфекция монослоев органоидов кишечника человека для визуализации живой флуоресценции

Начните с подготовки вирусного посевного материала. Активируйте запас ротавируса, добавив 10 микрограммов на микролитр трипсина Уортингтона и инкубируя при температуре 37 градусов Цельсия в течение одного часа. Затем 50 микролитров активированного вирусного запаса разбавляют 50 микролитрами CMGF-Next, заменяют среды из монослоев HIO 100 микролитрами вирусного посевного материала для заражения монослоев.

При ротавирусной инфекции сделайте одну отметку по всей длине монослоя с помощью иглы 25-го калибра. Инкубируйте пластины при температуре 37 градусов Цельсия в течение двух часов. После инкубации извлеките посевной материал и промойте монослои один раз 1 X PBS.

Затем добавляют 100 мкл дифференцирующей среды, не содержащей фенола. Поместите предметное стекло в инкубатор с температурой 37 градусов Цельсия до тех пор, пока оно не будет готово к изображению.