Подготовка образца для проточной цитометрии для измерения флуоресценции pHluorin2 в живом Trypanosoma brucei

Для начала возьмите клетки Trypanosoma brucei, экспрессирующие pHluorin. Добавьте тетрациклин или доксициклин и инкубируйте в течение ночи, чтобы вызвать экспрессию pHluorin. Затем переложите по три миллилитра каждой культуры в отдельные 15-миллилитровые пробирки.

Затем центрифугируют клетки при комнатной температуре в течение 10 минут при 1000 xg. Удалите надосадочную жидкость и повторно суспендируйте клетки в одном миллилитре PBS. После центрифугирования клеток в четвертый раз удалите надосадочную жидкость и повторно суспендируйте клеточную гранулу в PBS с различными концентрациями глюкозы.

Добавьте либо йодид пропидия, либо тиазол красный, чтобы отличить мертвые клетки от живых. Затем переложите каждый образец в пробирки объемом пять миллилитров, совместимые с проточным цитометром.