生きているTrypanosoma bruceiの動的グリコソームpH変化の測定

グルコース代謝はトリパノソーマ・ブルーセイにとって重要ですが、細胞が環境中のグルコースレベルの変化をどのように感知し、反応するかについてはほとんどわかっていません。私たちは、生きた寄生虫のグリコソームpHをモニターできるpHバイオセンサーを発現する寄生虫を開発し、栄養変動に対する寄生虫の動的応答の理解に役立てています。この実験の課題は、マイクロタイタープレートリーダーを備えたフローサイトメーターと、バイオセンサーの蛍光を測定するための適切なフィルターセットの入手可能性です。

さらに、T.bruceiはリスクグループ2の生物であるため、サイトメーターはバイオセーフティレベル2の施設内に収容する必要があります。ヘキソキナーゼとホスホフルクトキナーゼはpHに敏感であるため、グリコソームのpHレベルが解糖系に影響を与える可能性があることが発見されています。しかし、以前に使用されていたpHプローブは、血流形態のグリコソームを正確に標的としていませんでした。

この寄生虫のライフステージにおけるグリコソームのpHと解糖の関係を研究するには、より優れたツールが必要でした。pHluorin2-PTS1センサーは、このライフステージにおいて、化学的pHプローブよりもグリコソームへの局在化に優れたツールです。pHセンサーの発現を一晩誘導するだけで、細胞がpHluorin2を生成してグリコソームに局在化させるため、ユーザーフレンドリーです。

フローサイトメトリーを使用してpHluorin2を測定すると、顕微鏡検査と比較してスループットが向上し、統計的測定が向上します。