قياس التغيرات الديناميكية في درجة الحموضة الجليكوزومية في المثقبيات الحية بروسي

يعد استقلاب الجلوكوز أمرا بالغ الأهمية بالنسبة للمثقبية البروسية ، ومع ذلك لا يعرف سوى القليل عن كيفية استشعار الخلايا واستجابتها لمستويات الجلوكوز المتغيرة في البيئة. لقد طورنا طفيليات تعبر عن مستشعر حيوي للأس الهيدروجيني يسمح لنا بمراقبة درجة الحموضة الجليكوزومية في الطفيليات الحية ، مما سيساعد في فهم الاستجابات الديناميكية للطفيليات لتقلبات المغذيات. يتمثل التحدي الذي يواجه هذه التجربة في توفر مقياس التدفق الخلوي المجهز بقارئ لوحة المعايرة الدقيقة ، بالإضافة إلى مجموعات المرشحات المناسبة لقياس مضان المستشعر الحيوي.

بالإضافة إلى ذلك ، T.brucei هو كائن حي من المجموعة الثانية من المخاطر ، لذلك يجب وضع مقياس الخلايا داخل مرفق من المستوى الثاني للسلامة البيولوجية. لقد تم اكتشاف أن مستوى الأس الهيدروجيني للجليكوسومات يمكن أن يؤثر على تحلل السكر لأن الهيكسوكيناز والفوسفوفركتوكيناز حساسان لدرجة الحموضة. ومع ذلك ، فإن مجسات الأس الهيدروجيني التي تم استخدامها سابقا لم تستهدف بدقة الجليكوسوم في شكل مجرى الدم.

كانت هناك حاجة إلى أداة أفضل لدراسة العلاقة بين درجة الحموضة الجليكوزومية وتحلل السكر في مرحلة حياة الطفيليات هذه. مستشعر pHluorin2-PTS1 هو أداة أفضل في توطين الجليكوزوم من مجسات الأس الهيدروجيني الكيميائية في هذه المرحلة من الحياة. إنه سهل الاستخدام ، حيث تحتاج فقط إلى تحفيز التعبير عن مستشعر الأس الهيدروجيني بين عشية وضحاها ، وستقوم الخلايا بتكوين وتوطين pHluorin2 إلى الجليكوزوم.

يؤدي استخدام قياس التدفق الخلوي لقياس pHluorin2 إلى زيادة الإنتاجية وتحسين القياسات الإحصائية مقارنة بالفحص المجهري.