Общая цель этой парадигмы заключается в оценке эффективности потенциального антиалкогольных наркотиков с использованием грызунов модели расстройства употребления алкоголя. Расстройство употребления алкоголя представляет собой серьезный кризис общественного здравоохранения. Текущее лечение является неэффективным и текущие доклинические исследования необходимы.
Наш протокол позволяет нам оценить безопасность и полезность потенциального лечения, а также взглянуть на основные нейробиологии самого расстройства. Начните процедуру с нагрева полезного ножа на горелке Bunsen. Используя этот нож, вырезать примерно дюйм от верхней и нижней части пластиковых 18 миллилитров серологической пипетки.
Затем разогрейте пипетки под тепловой пушкой. Вставьте шарик подшипник sipper пробку в нижний конец pipette. Затем с помощью коммерчески доступных сжать обернуть пистолет, печать sipper трубки на месте с усадочной пленкой.
Крышка с другого отверстия с силиконовой пробкой. Для животных привыкание, по прибытии, один дом каждой мыши в стандартной поликарбонатной полисульфоной клетке с постельными принадлежностями, пищей и водой и металлической сеткой клетки сверху. Начиная с первого дня одной недели одного жилья акклиматизации, измерения и записи ежедневного тела мыши и веса пищи.
Измерьте потребление воды с помощью офортов рядом с перевернутой бутылкой, чтобы записать самую высокую точку мениска. После того, как потребление воды стабилизировалось до плюс-минус 10% изменчивости от среднего за последние три дня, начать доступ этанола либо с TBC или DID. Для проведения TBS, подготовить 10%ethanol раствор в 1000 миллилитров, добавив 105,3 миллилитров 190 доказательство этанол зерна до 894,7 миллилитров воды, а затем встряхнуть его тщательно.
Учитывая, что этанол быстро испаряется, замените раствор два раза в неделю. В первый день TBC, в каждой клетке, опорожните одну из двух бутылок с водой и заполните ее до краев свежеприготовленным раствором этанола. Учитывая, что этанол и воду трудно отличить визуально, четко обозначить бутылки своим соответствующим содержанием.
Добавьте больше раствора в бутылку с водой по мере необходимости. Затем поместите бутылку обратно в клетку, убедившись, что крышка закрыта надежно и лишена каких-либо пузырьков воздуха или утечки из носика. Удалите любые пузырьки воздуха, просто нажав на бутылку, так что воздух может избежать бутылки.
Чередуйте положение бутылки через день, чтобы исправить для обусловленного места предпочтение связанных влияний в питьевой деятельности. Запись уровня потребления этанола и проанализировать 10%ethanol потребление и соотношение предпочтений. Как только потребление этанола стало стабильным, управлять одним контролем внутриперитонеальной инъекции каждой мыши во время ежедневного измерения рутины, чтобы приучить мышь к инъекциям.
После того, как базовый уровень этанола с низкой изменчивостью восстановился, разделите мышей на контрольные и экспериментальные группы, использующие значения потребления этанола, чтобы все группы имели примерно аналогичные средние значения потребления этанола. Начните ежедневно дозирование наркотиков, либо для острой или многодневной продолжительности. Для проведения DID, на каждый день запланированного доступа этанола, записывать измерения объема воды, потребление пищи и массы тела и выполнять передозировки наркотиков.
Выполните это в заранее выбранное время во время светового цикла, который выбирается в соответствии с фармакокинетикой препарата так, чтобы соединение приближалось к максимальной концентрации мозга в период питья. Затем приготовьте 20%этаноловый раствор в 1000 миллилитров, добавив 210,5 миллилитров 190 доказательного зернового этанола до 789,5 миллилитров воды. Затем встряхните его тщательно.
Заполните бутылку этанола до начала питьевой сессии, так что, как только did начинается, бутылка воды может быть просто заменена бутылкой алкоголя. В течение всего сеанса DID используйте фару красного света, чтобы не беспокоить животное. В начале сессии DID питьевой, который планируется начать за три часа до темного цикла до светового цикла, записывать объем воды для каждой мыши.
Затем замените каждую бутылку воды бутылкой раствора 20%этанола и замитмит стартовый объем этанола. Прочитайте и завечите окончательный том этанола 2 часа более поздно на конце выпивая встречи на днях одно до 3 и 4 часа более поздно на день 4. Затем проанализируйте потребление 20% этанола.
Впоследствии замените бутылку этанола бутылкой с водой и замилите объем воды. Эта цифра показывает оценку воздействия острой дозы моксидестина на пять миллиграммов на килограмм на потребление этанола и предпочтения. Разовая доза моксидестина значительно сократила потребление алкоголя свыше 45% по сравнению с предмиксидетин инъекций и предпочтения свыше 30%10%этанола и предпочтения оба остаются значительно ниже, чем солевой раствор на следующий день сразу после лечения MOX.
Здесь, выпивка питьевой была смоделирована с помощью процедуры DID. Мышам вводили солевой раствор в дни один-четыре с базовым 20%этанолом, установленным на четвертый день. В дни от одного до трех второго еженедельного цикла, все мыши получили еще один ежедневный солевой инъекции.
Значения потребления этанола с первого дня были затем использованы для разделения мышей на две группы, которые впоследствии получили либо одну инъекцию моксидестина в пять миллиграммов на килограмм или солевой раствор на четвертый день. На следующей неделе все мыши получали ежедневные солевые инъекции в дни один-четыре, а потребление этанола измерялось еще раз на четвертый день. Было проанализировано острое введения MOX и установлено, что потребление алкоголя значительно сократилось более чем на 54% по сравнению с предмедикаментозной инъекцией.
Имейте в виду, что будущие эксперименты с использованием этого протокола должны быть сделаны для оценки механизма, досирования и токсичности потенциального препарата, а также для оценки его эффективности по отношению к текущим вариантам лечения.
