Das übergeordnete Ziel dieses Paradigmas ist es, die Wirksamkeit einer potenziellen Anti-Alkohol-Droge mit Nagetier-Modelle der Alkoholkonsumstörung zu bewerten. Alkoholkonsumstörungen stellen eine große Krise im Bereich der öffentlichen Gesundheit dar. Aktuelle Behandlungen sind ineffektiv und eine kontinuierliche präklinische Forschung ist erforderlich.
Unser Protokoll ermöglicht es uns, die Sicherheit und den Nutzen einer möglichen Behandlung zu bewerten sowie einen Blick auf die zugrunde liegende Neurobiologie der Erkrankung selbst zu werfen. Beginnen Sie den Vorgang, indem Sie ein Gebrauchsmesser auf dem Bunsenbrenner erhitzen. Schneiden Sie mit diesem Messer etwa einen Zoll von den oberen und unteren Enden einer 18 Milliliter serologischen Pipette aus Kunststoff ab.
Als nächstes wärmen Sie die Pipette unter einer Wärmepistole. Setzen Sie das Kugellager-Sipperrohr in das untere Ende der Pipette ein. Dann mit einer handelsüblichen Schrumpfpistole, versiegeln Sie das Sipperrohr an Ort und Stelle mit Schrumpffolie.
Kappen Sie die andere Öffnung mit einem Silikonstopfen. Für die Tieransiedlung, bei der Ankunft, Einzelne Haus jede Maus in der Standard-Polycarbonat Polysulfon Käfig mit Bettwäsche, Nahrung und Wasser und einem Metallgitter Käfig oben. Beginnend am vierten Tag der einwöchigen Einzelwohnung Akklimatisierung, messen und erfassen Sie die täglichen Körper- und Nahrungsgewichte der Maus.
Messen Sie die Wasseraufnahme mit den Radierungen neben der invertierten Flasche, um den höchsten Punkt des Meniskus zu erfassen. Sobald sich die Wasseraufnahme auf plus oder minus 10% Variabilität gegenüber dem Mittelwert der letzten drei Tage stabilisiert hat, beginnen Sie den Ethanol-Zugang entweder mit TBC oder DID. Um TBS zu leiten, bereiten Sie 10% Ethanol-Lösung in 1.000 Milliliter, indem Sie 105,3 Milliliter 190-prozentiges Getreide-Ethanol zu 894,7 Milliliter Wasser hinzufügen, dann schütteln Sie es gründlich.
Da Ethanol schnell verdunstet, ersetzen Sie die Lösung zweimal pro Woche. Am ersten Tag von TBC, in jedem Käfig, eine der beiden Wasserflaschen leeren und bis zum Rand mit der frisch zubereiteten Ethanollösung füllen. Da Ethanol und Wasser optisch schwer zu unterscheiden sind, kennzeichnen Sie die Flaschen eindeutig mit ihrem entsprechenden Inhalt.
Fügen Sie der Wasserflasche je nach Bedarf weitere Lösungen hinzu. Legen Sie dann die Flasche wieder in den Käfig, um sicherzustellen, dass die Kappe sicher geschlossen ist und frei von Luftblasen oder Lecks aus dem Auslauf. Entfernen Sie alle Luftblasen, indem Sie einfach auf die Flasche tippen, damit die Luft der Flasche entweichen kann.
Wechseln Sie die Position der Flasche jeden zweiten Tag, um für konditionierte Platz Präferenz bezogene Einflüsse in der Trinkaktivität zu korrigieren. Erfassen Sie den Ethanol-Aufnahmegrad und analysieren Sie das Ethanol-Aufnahme- und Präferenzverhältnis von 10 %. Sobald die Ethanolzufuhr stabil geworden ist, verabreichen Sie jeder Maus während der täglichen Messroutine eine einzige intraperitoneale Injektion, um die Maus an die Injektion zu gewöhnen.
Sobald sich eine Ethanol-Basislinie mit geringer Variabilität wiederhergestellt hat, teilen Sie die Mäuse in Kontroll- und Versuchsgruppen auf, die die Ethanolaufnahmewerte verwenden, so dass alle Gruppen ungefähr ähnliche durchschnittliche Ethanolaufnahmewerte haben. Beginnen Sie tägliche Drogendosis, entweder für eine akute oder mehrtägige Dauer. Um DID durchzuführen, zeichnen Sie an jedem Tag des geplanten Ethanolzugriffs die Messungen für Wasservolumen, Nahrungsaufnahme und Körpergewicht auf und führen Sie eine Medikamenten-Dosierung durch.
Führen Sie dies während einer vorgewählten Zeit während des Lichtzyklus, der in Übereinstimmung mit der Pharmakokinetik des Medikaments gewählt wird, so dass die Verbindung nähert sich der maximalen Gehirnkonzentration während der Trinkzeit. Als nächstes bereiten Sie 20% Ethanol-Lösung in 1.000 Milliliter, indem Sie 210,5 Milliliter von 190 proof Getreide Ethanol zu 789,5 Milliliter Wasser. Dann schütteln Sie es gründlich.
Füllen Sie die Ethanolflasche vor Beginn der Trinksitzung, damit die Wasserflasche, sobald DID beginnt, einfach durch die Alkoholflasche ersetzt werden kann. Verwenden Sie während der gesamten DID-Sitzung einen Rotlichtscheinwerfer, um das Tier nicht zu stören. Zu Beginn der DID-Trinksitzung, die drei Stunden vor dem Lichtzyklus in den dunklen Zyklus einfließen soll, wird die Wassermenge für jede Maus aufzeichnen.
Dann ersetzen Sie jede Wasserflasche durch eine Flasche 20% Ethanol-Lösung und erfassen Sie das Start-Ethanol-Volumen. Lesen und aufzeichnen Sie das endgültige Ethanolvolumen zwei Stunden später am Ende der Trinksitzung an den Tagen eins bis drei und vier Stunden später am vierten Tag. Analysieren Sie dann die 20%Ethanol-Aufnahme.
Anschließend die Ethanolflasche durch eine Wasserflasche ersetzen und das Wasservolumen aufzeichnen. Diese Abbildung zeigt die Bewertung der Auswirkungen einer akuten Dosis von Moxidectin auf fünf Milligramm pro Kilogramm auf die Ethanolaufnahme und -präferenz. Eine Einzeldosis Moxidectin reduzierte den Alkoholkonsum signifikant von mehr als 45 % im Vergleich zu Pre-Moxidectin-Injektionen und bevorzugt über 30%10% Ethanol-Aufnahme und Präferenz bleiben beide deutlich niedriger als die Saline am Tag unmittelbar nach der MOX-Behandlung.
Hier wurde Binge-Trinken nach dem DID-Verfahren modelliert. Mäusen wurde die Saline an den Tagen eins bis vier verabreicht, wobei am vierten Tag 20% Ethanol basisig festgestellt wurden. An den Tagen eins bis drei des zweiten Wochenzyklus erhielten alle Mäuse eine weitere tägliche Saline-Injektion.
Die Ethanol-Aufnahmewerte vom dritten Tag wurden dann verwendet, um die Mäuse in zwei Gruppen aufzuteilen, die anschließend entweder eine Injektion von Moxidectin mit fünf Milligramm pro Kilogramm oder eine Saline am vierten Tag erhielten. In der darauffolgenden Woche erhielten alle Mäuse täglich Saline-Injektionen an den Tagen eins bis vier und die Ethanolaufnahme wurde am vierten Tag erneut gemessen. Akute Verabreichung von MOX wurde analysiert und festgestellt, dass deutlich reduziert Alkoholaufnahme von mehr als 54%im Vergleich zu Pre-Drogen-Injektionen.
Denken Sie daran, dass zukünftige Experimente mit diesem Protokoll durchgeführt werden müssen, um den Mechanismus, die Wahl und die Toxizität eines potenziellen Arzneimittels zu bewerten und seine Wirksamkeit in Bezug auf die aktuellen Behandlungsmöglichkeiten zu bewerten.
