このパラダイムの全体的な目標は、アルコール使用障害のげっ歯類モデルを使用して潜在的な抗アルコール薬の有効性を評価することです.アルコール使用障害は、主要な公衆衛生上の危機を表しています。現在の治療は効果がなく、進行中の前臨床研究が必要です。
私たちのプロトコルは、潜在的な治療の安全性と有用性を評価するだけでなく、障害自体の基礎となる神経生物学を見ることを可能にします。ブンゼンバーナーにユーティリティナイフを加熱して手順を開始します。このナイフを使用して、プラスチック18ミリリットルの血清ピペットの上端と下端から約1インチを切ります。
次に、ヒートガンの下でピペットを暖めます。ボールベアリングシッパーチューブをピペットの下端に挿入します。次に市販のシュリンクラップガンを使用し、シッパーチューブをシュリンクラップで所定の位置に密封します。
シリコーンストッパーで他の開口部をキャップオフします。動物の習慣のために、到着時に、寝具、食べ物と水と金属グリッドケージトップと標準的なポリカーボネートポリスルホンケージ内の各マウスをシングルハウス。1週間の単一住宅の順応の4日目から、マウスの毎日の体と食べ物の重みを測定し、記録します。
転立ボトルと一緒にエッチングを使用して水分摂取量を測定し、半月板の最高点を記録します。水の摂取量が過去3日間の平均からプラスマイナス10%の変動に安定したら、TBCまたはDIDのいずれかでエタノールアクセスを開始します。TBSを実施するには、105.3ミリリットルの190の証拠穀物エタノールを894.7ミリリットルの水に加えて105.3ミリリットルで10%エタノール溶液を調製し、十分に振ります。
エタノールが速やかに蒸発することを考えると、溶液を週に2回交換してください。TBCの初日、各ケージに2つの水筒のうちの1つを空にし、準備したてのエタノール溶液で満たします。エタノールと水を目視で区別することが困難であることを考えると、ボトルに対応する内容物を明確にラベル付けします。
必要に応じて、水筒にさらにソリューションを追加します。その後、ボトルをケージに戻し、キャップがしっかりと閉じられ、気泡や噴出口からの漏れが欠けていることを確認します。空気がボトルから逃げることができるように、ボトルをタップするだけで気泡を取り除きます。
飲み物活動における条件付き場所の好みに関連する影響を修正するために、ボトルの位置を1日おきに交互に行う。エタノール摂取量を記録し、10%エタノール摂取量と選好率を分析した。エタノール摂取量が安定になるとすぐに、毎日の測定ルーチン中に各マウスに腹腔内注射を1回制御し、マウスを注射に慣す。
変動性の低いエタノールベースラインが再確立したら、マウスをエタノール摂取量値を用いて対照群と実験群に分け、全群がほぼ同じ平均エタノール摂取量値を有するようにする。急性または複数日の期間のいずれかの毎日の薬物の服用を開始します。DIDを実施するには、スケジュールされたエタノールアクセスの各日に、水量、食物摂取量および体重の測定値を記録し、薬物投与を行う。
薬物の薬物動態に従って選択された光サイクル中に事前に選択された時間の間にこれを実行し、化合物が飲酒期間中に最大脳濃度に近づくようにする。次に、1,000ミリリットルに20%エタノール溶液を調製し、190の証拠穀物エタノールを210.5ミリリットルの水に加えます。その後、徹底的にそれを振ります。
飲み会の開始前にエタノールボトルを充填し、DIDが始まるとすぐに、水筒をアルコールボトルに置き換えることができます。DIDセッション全体で、動物を邪魔しないように赤いライトのヘッドランプを使用してください。光サイクルの前に暗いサイクルに3時間開始する予定のDID飲酒セッションの開始時に、各マウスの水の量を記録します。
次に、各水ボトルを20%エタノール溶液のボトルに交換し、エタノールの開始量を記録します。飲み会の終わりに2時間後に最終エタノール量を読んで記録し、4日目の1〜3時間と4時間後に記録します。その後、20%エタノール摂取量を分析する。
その後、エタノールボトルを水筒に交換し、水量を記録します。この図は、エタノールの摂取量と好みに対する1キログラム当たり5ミリグラムの急性用量のモオセクチンの影響の評価を示す。1回の用量のマオキシクチンは、30%10%エタノール摂取量および好みがMOX治療直後の日に、前のメキシクチン注射および好みと比較して45%を超えるアルコール摂取量を有意に減少させた。
ここで、暴飲暴飲はDID手順を用いてモデル化した。マウスは、4日目に確立されたベースライン20%エタノールで1日目から4日目に生理液化物を投与した。第2週周期の1日目から3日目に、すべてのマウスはさらに別の毎日の生理液注射を受けた。
その後、3日目からのエタノール摂取量の値を使用してマウスを2つのグループに分割し、その後、1キログラム当たり5ミリグラムまたは4日目に生理食糸で1回のモキシクチン注射を受けた。翌週、すべてのマウスは1日目から4日目に毎日生理液注射を受け、エタノール摂取量は4日目に再び測定された。MOXの急性投与を分析し、薬物注射前と比較して54%を超えるアルコール摂取量を有意に減少させることがわかった。
このプロトコルを使用した将来の実験は、潜在的な薬物のメカニズム、服用および毒性を評価し、現在の治療オプションに関連して有効性を評価するために行われなければならないことを覚えておいてください。
