За последние несколько лет, печень инженерных стала горячей темой во всем мире из-за его потенциал генерации трансплантации способны печени трансплантатов. Однако жизнеспособная долгосрочная функция и трансплантация инженерных органов по-прежнему видение будущего. В последнее время in-vivo печени доли изобилие стало перспективной стратегией, чтобы начать печень инженерии.
Основным преимуществом этой техники является то, что in-vivo заселены частичной печени эшафот подвергается скатологического изобилия крови. Это обеспечивает эшафот с надлежащей температурой, достаточным количеством кислорода, питательных веществ и факторов роста в отличие от экс-vivo изобилие с искусственной среды культуры. Еще одним преимуществом является то, что оставшаяся печень поддерживает печеночную функцию и тем самым в основном обеспечивает долгосрочное выживание.
Однако в-vivo одной доли изобилия модель технически сложной задачей и послеоперационного выживания до сих пор не достигнуто. Здесь мы собираемся представить еще одну хирургическую модель с долгосрочным выживанием в качестве основы для дальнейшего in-vivo одной инженерии доли печени. Прежде чем мы продемонстрируем хирургическую модель, мы хотели бы дать краткое введение в анатомии печени крыс.
Для создания нашей одной модели изобилия доли печени мы выбрали левую лобную долей. Это единственная доля печени с отчетливым сосудистым снабжением и дренажем, позволяющая создать шунтирование. Это 3-D реконструкция портала венозной системы у крыс.
Наше внимание здесь сосредоточено на левой вены портала, который позже будет служить в качестве жидкого входе. Это 3-D реконструкция печеночным венозной системы у крыс. Здесь наше внимание сосредоточено на левой боковой печеночным вены, которая позже будет служить в качестве жидкости розетки.
Эта иллюстрация анатомии сосудов печени подчеркивает сосудистые точки доступа, используемые для частичной модели перфузии. Эта анимация иллюстрирует схему генерации in-vivo левой боковой доли печени перфузии модели. Для того, чтобы создать хирургическую модель, мы собираемся создать обход цепи в левой боковой доле.
Для этого нам необходимо блокировать следующие сосуды левой портальной вены, левой печеночным артерией, левым желчным протоком, левой средней протальной вены, печеночными артерий и желчных протоков, а также левой боковой печеночными венами. Затем нам нужно cannulate левой вены портала с 24 гейдж катетер. После этого левая боковой печеночным вену канюлируется с помощью 22 гейдж катетера.
Затем катетер в левой вены портала подключен к перфузионому насосу. Сухая марля помещается в розетку катетера в левой боковой печеночным вену для поглощения отходов жидкости. Таким образом создается шунтирование.
Затем левая латеральная доля пронизана гепаринизированным солевым раствором при скорости потока 0,5 миллилитров в минуту. Физиологическая перфузия левой боковой доли восстанавливается после повторного открытия заблокированных сосудов. Сейчас устанавливается хирургическая перфузионная модель.
Все процедуры, продемонстрированые в этом видео, были оценены и одобрены местными властями. Поле операции брюшной полости продезинфицируется тремя раундами йодной настойки с последующим двумя раундами по 70% алкоголя. Стерильная марля помещается на живот, оставляя только поле операции открытым.
Поперечный разрез делается на брюшной стенке крысы. 4-0 пролен шов используется для исправления процесса xiphoid и тянуть его к голове. Обе стороны верхних стенок брюшной полости втягиваются с помощью двух подреберумых крючков для достижения полного воздействия органа.
Тогда мы увидим доли печени. Вот левая доля боковой, которая используется для селективной перфузии. Мы покрываем двенадцатиперстную кишку и тонкой кишки в брюшной полости с увлажненной марлей до сухости яичников.
Мы подвергаем хилу печени, поднимая средние доли с увлажненной марлей. Крыса помещается под стерильный микроскоп. Мы рассекаем левую вену портала.
Затем мы ligate левой протальной вены с 6-0 шелковый шов. Левая печеночная артерия, левый желчный проток, а также левая средняя вена портала, левая средняя печеночная артерия и левый средний желчный проток блокируются с помощью микрозажимов. Мы блокируем левую боковой печеночных вен с микрозажимами у основания левой боковой доли.
Для создания жидкого входного, стебель портальной вены прокалывается катетером 24 гаге иглы. Но катетер не вставляется. Затем мы удаляем иглу из катетера и подключаем катетер к перфузиольной насосу.
Чтобы изгнать воздух из трубки и катетера, мы перелив с гепаринизированным солевым раствором в течение минуты. Затем мы выключаем насос. Далее в левую вену портала вставляется катетер без иглы, который теперь подключен к перфузионому насосу.
Таким образом, мы минимизируем манипуляции с канюшьемным сосудом. Вот открытые области левой боковой печеной вены мы собираемся cannulate аналогичным образом. Сначала мы создаем дренажное отверстие в левой боковой печеночным вену, прокалыв его с 22 gage или 24 gage иглы жилой катетер.
Рекомендуем, чтобы катетер был немного меньше сосуда. Затем мы начинаем окутыться левой боковой долей с гепаринизированным солевым раствором со скоростью потока 0,5 миллилитров в минуту. Вытекающая отходная жидкость поглощается марлей.
Чтобы свести к минимуму внутриабдоминального загрязнения сточных вод жидкости мы reinsert иглы свободный катетер в левую боковой печеночным вену. Таким образом, канюлированная левая боковой печеночным вену служит выходом жидкости. Мы продолжаем переливания левой боковой доли с гепаринизированным солевым раствором.
Кровавая жидкость можно увидеть капает из розетки. Стрелка указывает на то, что левая боковой доли пожелтели во время перфузии с гепаринизированный солевой раствор. В конце перфузии катетеры выходят из сосудов.
Дренажное отверстие на левой боковой печеночным вену закрывается одним 11-0 шовом поллумита. Вход открытия на левом портале вены закрыт с 11-0 pollumite шов, а также. Re perfusion начинается с обратного потока из супрагепатической кавы вены после удаления зажима на левой боковой печеночных вен.
Физиологическая перфузия дополнительно восстанавливается после удаления зажима из левой печеночным артериям и желчным протоком, а также левой средней сосудистой структуры. Полная переливка достигается после повторного открытия левой вены портала, о чем свидетельствует изменение цвета на темно-красный. Перфузия левой более поздней доли.
Белая стрелка на этом изображении указывает на то, что целевая доля печени действительно выборочно проникнута. Здесь белые стрелки показывают, что оставшиеся доли, которые составляют около 70% печени, сохраняют физиологическую перфузию на протяжении всей процедуры. Re перфузии левой боковой доли.
Здесь красная стрелка указывает на то, что левая лобная доля физиологически переливается после повторного открытия заблокированных сосудов. Синяя стрелка показывает, что левая средняя доля устойчивых ишемии. Выборочно проникнутая левая боковой доли была гисто логически изучена с помощью H E окрашивания.
Рисунок А показывает, что в перелитой левой боковой доле нет клеток крови, обнаруженных в ветке портальной вены и синуоидов. Как и ожидалось, красные клетки видны в ветке печеночные артерии. На рисунке B нижняя доля каудата служит контролем.
Клетки крови хорошо видны и ветви протальной вены и печеночные артерии, а также синуоиды. Рисунок C показывает, что в пролитой левой боковой доле нет клеток крови, видимых в центральной вене. В отличие от этого, рисунок D показывает, что в контроле нижней caudate доли клеток крови видны в центральной вене.
Мы достигли 100%однонедельной выживаемости в 12 процедурах подряд. Мы сравнили нашу модель перфузии печени in-vivo с моделью Pan и коллегами. Основные различия в методологии и результатах между Pan и нашей группой: они выбрали правую нижняя доля, в то время как мы выбрали левую лобную долей в качестве целевой доли печени; они заблокировали вена и основную вену портала, ведущую к портальной гипертензии.
В отличие от этого мы поддерживали портал perfusion 70% печени; они пожертвовали крыс между оперативно в то время как наша одна неделя выживаемости составляет 100%Преимущества нашей новой хирургической модели: что это технически сложной, но осуществимой; и что это хорошо переносится, как попродемонстрировано 100%выживаемости. Однако одним из ограничений является то, что левая средняя доля устойчивых ишемии из-за блокировки портала вены. Потенциальные применения нашей техники включают в себя: то есть может быть использован для внутрививо частичного лечения органов путем перфузии с наркотиками;in-vivo частичная децеллюляризация органов как химическая ресекция;in-vivo клеточной культуры системы по сравнению с ex-vivo; и in-vivo печени инженерии.
