Общая цель этой процедуры заключается в выборочной целевой стволовых клеток полученных тератомы у мышей для оценки эффективности in vivo малых животных внешней лучевой лучевой лучевой терапии. Основным преимуществом внешней лучевой терапии является то, что это целевая терапия для стволовых клеток, связанных с терамтомами, что позволяет избежать вне цели неблагоприятное воздействие системно доставлены терапии. Достижения в области внешней лучевой лучевой лучевой терапии позволили конкретной ориентации малых тератом, избегая при этом повреждения нормальных тканей, что делает эту терапию идеально подходит для лечения чувствительных к радиации тератом.
Этот метод может не только дать представление об оптимизации стратегий клеточной терапии, но и может стать клинически применимым в человеческой терапии. Начните с шести-хорошо пластины, содержащей iPSCs. Для индуцирования образования тетратомы у иммунодефицитных животных добавьте один миллилитр рекомбинантной клеточной диссоциации фермента смеси на колодец 6-хорошо пластины, содержащей человеческие индуцированные плюрипотентные стволовые клетки, трансдуцированные с двойным геном репортера синтеза в течение пяти минут инкубации при комнатной температуре.
В конце инкубации рассеивают клетки путем пипетки и остановить энзиматической реакции, добавив равный объем клеточной культуры среды к каждому хорошо. Потяните одноклеточные подвески в 15 миллилитровую коническую трубку для подсчета. После того, как центрифугация завершена, аспирировать супернатант и повторно процедить гранулы в 30 микролитров матричного раствора Matrigel и поместить трубку на лед.
При использовании двойного синтеза reportagen трансфицированных клеток, эти двойные положительные влияют клетки также должны быть приостановлены в 30 микролитров матрицы. Далее, загрузить каждую популяцию клеток в один миллилитр шприц оснащен 28,5 калибровочных иглы и подтвердить отсутствие ответа на щипец щепотку в каждом анестезировал от восьми до 10 недель амимической обнаженной мыши получателя. Затем подкожно введите одну клеточную матричную смесь в спинной фланг каждого животного-реципиента.
В соответствующую экспериментальную точку времени после прививки вводят 375 миллиграммов на килограмм делуциферона инстраперитонически в каждого получателя. После 10 минут изображения биолюминесценции сигнала в каждом анестезированной репортер зонд вводил животных в течение 30 минут с использованием одной минуты приобретения окна с пятиминутными интервалами, в соответствии со стандартными протоколами биолюминесценции изображения. Для облучения тератомы, в соответствующей экспериментальной точке времени, первое место анестезированной животного-получателя на кровать изображения управляемых доклинерического облучения и приобрести набор из 400 проекционных микро-компьютерных томографии изображения более 360 градусов с использованием 40 пик килоэлектрог, 2 миллиампер рентгеновский луч, и реконструировать изображение в объемных изображений с изотропных пикселей размером 0,2 миллиампер.
Очень важно реконструировать объемные изображения тератомы. Эти изображения помогут спланировать лучевую терапию только для конкретной доставки терапии в тератомы, минимизируя при этом любое внецелевое излучение окружающих тканей. Затем используйте микро-КТ изображения и пакет программного обеспечения для изображения RT для планирования протокола лучевой терапии.
Администрирование лечения в течение трех дней подряд, чтобы доставить в общей сложности 18 серых к целевой опухоли. Инъекционные мыши обычно демонстрируют образование роста тератомы через четыре-три недели после инъекции опухолевых клеток, что подтверждается биолюминесценцией. При облучение кумулятивным делает 18 серых через месяц после доставки клеток опухоли будут сокращаться резко в результате значительного совпадения сигнала люциферазы.
Важно отметить, что, как показывают эти изображения, нормальная биопсия тканей, собранная пять миллилитров из облученных участка, как представляется, не понести каких-либо значительных повреждений. После просмотра этого видео, вы должны иметь четкое понимание того, как создать стволовые клетки, полученные тератомы in vivo и эффективно и безопасно лечить их с внешним лучом излучения. Этот простой подход требует приобретения изображений КТ высокого разрешения субъекта, после чего серия лучевой терапии может быть предписано облучение опухолей-мишеней, избегая при этом смежных тканей.
Не забывайте, что работа с радиацией может быть чрезвычайно опасной и что меры предосторожности, такие как использование соответствующих щитов, всегда должны быть приняты при выполнении этой процедуры.
