Сепсис может привести к многоохокторной недостаточности и смерти. Эндотоксин является фундаментальным компонентом грамотрицательных бактерий. Повышенный циркулирующий уровень эндотоксина может выявить пациента с более высоким риском развития более тяжелого заболевания.
Анализ активности эндотоксина может быть использован в качестве простого, быстрого и надежного биомаркера системной эндотоксии. Раннее выявление этого токсина может помочь врачам лечения пациентов с септическим шоком. У пациента с септическим шоком раннее выявление быстро развивающегося состояния может привести к более быстрой и интенсивной терапии жизнеобеспечения, что потенциально приведет к лучшим результатам.
Демонстрацией этой процедуры будет Лиза Матиасен, молекулярный биолог, который сотрудничает с нашей исследовательской группой. Чтобы начать эту процедуру, установите набор тестов EA и распаковать пять различных видов труб. Используйте трубку номер один, контрольную трубку, для измерения базальной активности неспецифического окислительного всплеска нейтрофилов пациента при отсутствии конкретного антитела.
Используйте трубку номер два, образец трубки, для измерения окислительного всплеска в ответ на lpS-антитела комплекса. Используйте трубку номер три, трубку Макса, для измерения максимального окислительного всплеска нейтрофилов пациента в ответ на избыток эндотоксина. Используйте трубку номер четыре, трубку LPS, в качестве источника экзогенного эндотоксина.
И используйте трубку номер пять, трубку Aliquot, для хранения крови. Соберите образцы крови пациента в стерильных трубках, содержащих антикоагулянт ЭДТА, и храните их при комнатной температуре перед запуском теста EA. Перед началом теста включите химилюминометр и инкубатор шейкер и подогреете инкубатор до 37 градусов по Цельсию.
Во-первых, поместите трубки EA, которые будут использоваться в трубчатых стеллажах, и удалите колпачки. Используйте combipipette для передачи одного миллилитров реагента EA из бутылки в трубки номер один, номер два, и номер три, трубя вниз стороне труб. Аккуратно инвертировать трубку сбора крови 20 раз, чтобы смешать образец крови пациента.
Затем пипетка 0,5 миллилитров крови пациента в трубку номер четыре и трубку номер пять. Вихревая трубка номер четыре в течение 10 секунд. Поместите трубчатые стойки со всеми пробирками EA в шейкер инкубатора.
Закройте крышку и инкубировать при 37 градусах по Цельсию в течение 10 минут. После этого откройте крышку инкубатора и снимите трубчатые стойки со шейкера. Вихревая трубка номер пять.
Используя стерильный наконечник, пипетка 40 микролитров крови в трубки номер один и номер два, в дубликате. Вихревая трубка номер четыре. Используя тот же наконечник пипетки, перенесите 40 микролитров крови из трубки номер четыре в трубку номер три, в дубликат.
Вихрь шесть окончательных пробирок один за другим. Поместите трубки стойки обратно в инкубационный шейкер, и закрыть крышку. Установите шейкер до 100 об/мин, и начать движение в течение 14 минут.
Вставьте чип-карту с маркировкой EA в химилюминометр и нажмите Start. После 14-минутной инкубации следуйте инструкциям, отображаемым на хемилюминометре. Аккуратно вихрь каждой трубки в течение 10 секунд, прежде чем поместить его на образец держателя хемилюминометра.
Откройте ящик образца и поместите трубку номер один в держатель образца. Затем закройте ящик образца и дождите относительное чтение светового блока. Повторите этот процесс чтения для трубок два и три и все дубликаты, как указано в текстовом протоколе.
После обработки всех труб результаты советника будут рассчитываться и печататься автоматически. Повторите весь процесс анализа для каждого образца крови, который должен быть проверен. Храните комплект EA Assay и его компоненты в оригинальной герметичной упаковке при температуре от двух до 25 градусов по Цельсию.
В этом исследовании проводится анализ активности эндотоксина для выявления эндотоксемии всей крови у тяжелобольных пациентов. Значение советника менее 0,40 единиц EA указывает на низкий уровень активности эндотоксина, равный низкой концентрации циркулирующих LPS, что представляет собой низкий риск прогрессирования в тяжелом состоянии заболевания. Результат от 0,40 до 0,59 единиц ЕА указывает на промежуточный уровень активности эндотоксина, что представляет собой промежуточный риск развития тяжелого сепсиса и септического шока.
Результаты, равные или более 0,60 единиц EA, указывают на высокий уровень активности эндотоксина, что представляет высокий риск септических шоков и плохих исходов пациентов. Кровь из трубок номер четыре и пять должны быть смешаны с правильной пробирки. Необходимо принять дополнительные меры для следовать правильному порядку, указанного в протоколе.
Каждая трубка работает в дубликатах, что потенциально приводит к ошибкам на этом этапе. После его введения, EA Assay был предложен в качестве биомаркера для стратификации риска пациента с системной гипоперфузией. Кроме того, он был изучен в качестве скрининг-теста для отбора пациентов для передовых стратегий лечения гемопурификации.
