אלח דם יכול להוביל לכשל רב איברים ומוות. אנדוטוקסין הוא מרכיב בסיסי של חיידקים גרם שלילי. רמות גבוהות במחזור של אנדוטוקסין עשוי לזהות חולה בסיכון גבוה יותר לפתח מחלה חמורה יותר.
אנדוטוקסין פעילות Assay יכול לשמש סמן ביולוגי פשוט, מהיר ואמין של אנדוטוקסמיה מערכתית. הגילוי המוקדם של רעלן זה עשוי לעזור לרופאים בטיפול בחולים עם הלם ספיגה. בחולה עם הלם ספיגה, הזיהוי המוקדם של מצב המתפתח במהירות עשוי לגרום לטיפול מהיר ואינטנסיבי יותר בתמיכה בחיים, מה שעלול להוביל לתוצאות טובות יותר.
הפגנת הליך זה תהיה ליסה מתיאסן, ביולוגית מולקולרית שמשתפת פעולה עם קבוצת המחקר שלנו. כדי להתחיל בהליך זה, הגדר ערכת בדיקה של EA ופרק את חמשת הסוגים השונים של צינורות. השתמש צינור מספר אחד, צינור הבקרה, כדי למדוד את הפעילות הבסיסית של פרץ חמצוני לא ספציפי של נויטרופילים של המטופל בהיעדר נוגדן מסוים.
השתמש צינור מספר שתיים, צינור מדגם, כדי למדוד את פרץ חמצוני בתגובה לתסביך LPS-נוגדנים. השתמש צינור מספר שלוש, צינור מקס, כדי למדוד את פרץ חמצוני מקסימלי של נויטרופילים של המטופל בתגובה עודף של אנדוטוקסין. השתמש צינור מספר ארבע, צינור LPS, כמקור של אנדוטוקסין אקסוגני.
ולהשתמש בצינור מספר חמש, צינור Aliquot, לאחסון דם. לאסוף דגימות דם החולה צינורות סטריליים המכילים נוגד קרישה EDTA, ולאחסן אותם בטמפרטורת החדר לפני הפעלת הבדיקה EA. לפני תחילת הבדיקה, להפעיל את chemiluminometer ואת שייקר אינקובטור לחמם את החממה ל 37 מעלות צלזיוס.
ראשית, מניחים את צינורות EA לשימוש במדפים צינור, ולהסיר את הכובעים. השתמש combipipette להעביר מיליליטר אחד של ריאגנט EA מהבקבוק לצינורות מספר אחד, מספר שתיים, ומספר שלוש על ידי צינורות בצד של הצינורות. בעדינות להפוך את צינור איסוף הדם 20 פעמים כדי לערבב את דגימת הדם של המטופל.
ואז, פיפטה 0.5 מיליליטר של דם מטופל לצינור מספר ארבע וצינור מספר חמש. צינור וורטקס מספר ארבע במשך 10 שניות. מניחים את מתלי הצינור עם כל מבחנות EA לתוך שייקר החממה.
סוגרים את המכסה, ודגירה ב 37 מעלות צלזיוס במשך 10 דקות. לאחר מכן, לפתוח את מכסה החממה ולהסיר את מתלי הצינור מן השייקר. צינור וורטקס מספר חמש.
באמצעות קצה סטרילי, פיפטה 40 microliters של דם לתוך צינורות מספר אחד ומספר שתיים, בשכפול. צינור וורטקס מספר ארבע. באמצעות אותו קצה פיפטה, להעביר 40 microliters של דם מצינור מספר ארבע לצינור מספר שלוש, בשכפול.
וורטקס שש המבחנות האחרונות אחת אחרי השניה. מניחים את מתלי הצינור בחזרה לתוך שייקר הדגירה, ולסגור את המכסה. הגדר את השייקר ל 100 סל"ד, ולהתחיל את התנועה במשך 14 דקות.
הכנס את כרטיס השבב המסווים של EA לתוך הכימותרפיה והקש Start. לאחר הדגירה של 14 דקות, בצע את ההוראות המוצגות על כימלומינומטר. בעדינות מערבולת כל צינור במשך 10 שניות לפני הנחת אותו על מחזיק המדגם של chemiluminometer.
פתח את המגירה לדוגמה, והצב צינור מספר אחד לתוך מחזיק הדגימה. לאחר מכן, סגור את מגירה לדוגמה והמתן לקריאת יחידת האור היחסית. חזור על תהליך קריאה זה עבור צינורות 2 ו- 3 וכל הכפילויות, כמתואר בפרוטוקול הטקסט.
לאחר שכל הצינורות עובדו, תוצאות EA יחושבו וידפסו באופן אוטומטי. חזור על כל תהליך הבדיקה עבור כל דגימת דם שיש לבדוק. אחסן את ערכת EA Assay ואת מרכיביה בחבילה האטומה המקורית בטמפרטורה שבין שתיים ל -25 מעלות צלזיוס.
במחקר זה, אנדוטוקסין פעילות Assay מבוצעת כדי לזהות אנדוטוקסמיה דם שלם בחולים אנושים. ערך EA של פחות מ 0.40 יחידות EA מציין רמת פעילות אנדוטוקסין נמוכה, שווה ריכוז LPS במחזור נמוך, המייצג סיכון נמוך להתקדמות למצב מחלה חמורה. תוצאה בין 0.40 ל 0.59 יחידות EA מצביעה על רמת פעילות אנדוטוקסין ביניים, המהווה סיכון ביניים להתפתחות אלח דם חמור והלם ספיגה.
תוצאות שוות או גדולות מ- 0.60 יחידות EA מצביעות על רמת פעילות אנדוטוקסין גבוהה, המייצגת סיכון גבוה להלם ספיגה ולתוצאות גרועות של המטופל. דם מצינורות מספר ארבע וחמש חייב להיות מעורבב עם המבחנה הנכונה. יש לנקוט בזהירות נוספת כדי לבצע את הסדר הנכון המצוין בפרוטוקול.
כל צינור מנוהל בכפילויות, מה שעלול להוביל לטעויות בשלב זה. לאחר הצגתו, EA Assay הוצע כסמן ביולוגי עבור ריבוד הסיכון של המטופל עם hypoperfusion מערכתית. כמו כן, הוא נחקר כמבחן סינון כדי לבחור חולים עבור אסטרטגיות טיפול hemopurification מתקדם.
