Долгосрочная синаптическая пластичность, в частности, долгосрочная потенция и долгосрочная депрессия были широко исследованы вдоль поперечной ориентации гиппокампа. Он также был рассмотрен вдоль продольной ориентации. Однако, когда дело доходит до продольной ориентации, очень мало внимания было уделено продольной оси CA1 гиппокампа в отношении синаптической пластичности.
Предыдущая публикация из нашей лаборатории показала, что пирамидальные нейроны CA1 гиппокампа образуют уютовые связи, которые могут поддерживать синаптической пластичности. Для дальнейшего понимания этого протокола рекомендуется обратиться к предыдущей публикации с данной ссылкой ниже. Введать уретан для анестезии мыши.
Поместите полностью анестезировалую мышь на грелку, установленную до 37 градусов по Цельсию. Нанесите гель для глаз, чтобы увлажнить глаза. Зафиксните череп мыши твердо с помощью глазного зажима.
Глазной зажим дает свободу подвижности экспериментатору во время хирургических процедур. И это может быть особенно полезно для экспериментов с участием слуховой коры, а также. Тем не менее, необходимо принять меры для того, чтобы получить точные стереотаксисные координаты.
Разделите подкожные ткани и мышцы в конце межпариетальной и затылочной кости мыши скальпелем. Пятно dura вопрос сухой с ватным тампоном. Затем вы проколите цистерна магна для слива спинномозговой жидкости.
Прикрепите ватный тампон, чтобы сохранить слив спинномозговой жидкости. Вырезать и удалить кожу на кожу головы и сохранить открытые области сухой. Отметйте точки, соответствующие области гиппокампа с помощью вениярного калипера.
Сделайте разрез в черепе над спинной областью гиппокампа вдоль отмеченных точек с помощью скальпеля или высокоскоростной дрели во время наблюдения под микроскопом. Держите открытые ткани мозга влажной, применяя физиологический солевой раствор или инертное масло. Исправить и положение стимуляции и записи электродов твердо в стереотаксис держателя.
Отрегулируйте стимуляцию и запись электродов выше спинного гиппокампа CA1. Используйте мозг мыши в стереотаксисной координате в качестве руководства в поиске координат для спинной продольной области гиппокампа CA1. Для записи с использованием многоканальных электродов, сначала найдите свои стереотаксисные координаты для региона гиппокампа CA1 с помощью Первого канала.
Распоистив оставшиеся электроды таким образом, чтобы угол стимуляции и записи электродов был в диапазоне от 30 градусов до 60 градусов по отношению к средней линии от точки брегмы. Этот угол соответствует продольной ориентации региона гиппокампа CA1. Включите систему записи.
Откройте нейронное программное обеспечение для записи и сбора данных. Снижение записи и стимуляции электродов медленно с помощью микроманипулятора, пока он просто касается поверхности мозга. Наблюдайте увеличение неустумности только тогда, когда электрод касается поверхности мозга.
Это можно наблюдать в красном канале, показанного на экране. Медленно опустите электроды на приблизительную глубину, соответствующую выбранным стереотаксисным координатам гиппокампа CA1. Дайте стимуляции до стабильного вызывают заполненные возбуждающей пост-синаптический потенциал наблюдается.
Выполните кривую ввода-выхода для обнаружения максимальной интенсивности стимула. Используйте кривую ввода-выхода, чтобы установить базовую интенсивность и установить интенсивность стимула для вызова высокочастотной стимуляции или низкочастотной стимуляции. Запись местного полного потенциала в течение часа после высокочастотной стимуляции или низкочастотной стимуляции.
Экспортируйте данные и анализируйте с помощью программного обеспечения по выбору. Бедные 400 мл уже подготовленного нарезания раствора в отдельную колбу и оксигенировать в течение примерно 20 минут. Бедные 200 мл кислородом нарезки раствора.
Обложка в пара пленки и передачи в 80 градусов морозильник в течение примерно 20 минут, чтобы сделать слякоть. Бедные оставшиеся 200 мл нарезки раствора в мозге ломтик удерживая камеру и держать в воде бот 32 градусов по Цельсию с непрерывным восходящей. Вывести охлажденный нарезающий раствор и бедных примерно 50 мл в стакане.
Обезглавить обезболивающее мышь. Вырежьте кожу, покрывающую череп мыши, и вырежьте кусок черепа вдоль средней линии до затылочной кости. Откройте череп тупыми типсами.
Аккуратно вычерпыв мозг шпателем и поместите в охлажденный нарезающий раствор в стакане. Разделите два полушария мозга вдоль средней линии скальпелем. Изолировать гиппокамп, аккуратно отделяя его от коры шпателем.
Вырежьте перегородку и височный конец изолированного гиппокампа. Нанесите небольшое количество клея на нарезку пластины. Для продольного ломтика гиппокампа CA1 прикрепите область CA3 гиппокампа к нарезной пластине клеем.
Для поперечного ломтика, который будет служить в качестве контроля, приложите брюшной конец гиппокампа к нарезке пластины вибромы. Поместите его в камеру нарезки. Установите параметры вибромы.
Нарежьте прикрепленный гиппокамп вибратом. Хороший продольный гиппокамп CA1 ломтик мозга будет иметь один слой CA1, и два слоя зубной извилины. Также будут присутствовать слой орьены и слой излучения региона CA1.
Кроме того, поперечный ломтик мозга гиппокампа будет иметь дентат извилины CA3 и CA1 регионов в такт. Перенесите ломтики мозга на срез мозга, удерживав камеру в водяном боте. Инкубировать в течение 20 минут при температуре 32 градуса по Цельсию и довести до комнатной температуры для восстановления.
Непрерывно перелить крепостного ACS в камеру записи со скоростью 2 мл в минуту. Перенесите срез мозга в камеру записи, отрегулируйте положение ломтика мозга тупыми типсами и удерживайте его на месте с помощью хпа. Включите программное обеспечение для сбора данных.
Продольный кусочек мозга. Для продольных ломтиков, положение стимуляции и записи электрода в прослойки oriens. Поместите электрод стимуляции либо на перегородку, либо на височную сторону мозга с записью из того же слоя.
Кроме того, положение стимуляции и записи электрода в слой излучения, место стимуляции электрода в перегородке или височной стороне мозга ломтик. Для поперечных срезов в качестве контроля, располагаем электродом стимуляции в области коллатеративного пути CA3 Schaffer и записывающим электродом в регионе CA1. Включите генератор стимула изолятора и дайте стимуляцию.
Отрегулируйте глубину электрода записи до стабильного вызывают возбуждающей пост-синаптической заполненный потенциал наблюдается. Выполните кривую ввода-выхода для обнаружения максимальной интенсивности стимула. Используйте кривую ввода-выхода, чтобы установить интенсивность стимула для базовой записи, вызывающей высокочастотную стимуляцию или низкочастотную стимуляцию.
Обратитесь к прилагаемому PDF для параметров в индуцировании одинокого срока потенции или долгосрочной депрессии. Вызванный возбудительный пост-синаптический потенциал увеличился в ответ на высокочастотную стимуляцию in vivo. Это показывает, что продольный гиппокамп CA1 поддерживает долгосрочное потенцию.
Для продольных ломтиков мозга гиппокампа CA1, увеличение в ответ на высокочастотную стимуляцию наблюдалось как на перегородке, так и на височной стороне слоев орьена и слоя излучения. Это показывает, что синаптическая пластичность, индуцированная вдоль продольной области гиппокампа CA1, не является линейной или направленной специфичной. Используя уже установленные протоколы для длительной депрессии, никакая долгосрочная депрессия не была вызвана как in vivo, так и in vitro.
В заключение мы показали вам, как исследовать долгосрочную синаптической пластичности в продольной области гиппокампа CA1 как in vivo, так и in vitro. Более подробную информацию о протоколе можно найти в PDF сопровождающих это видео, чтобы помочь вам в расследовании долгосрочной пластичности синаптической вдоль продольного гиппокампа CA1 области в ваших собственных лабораториях.
