Механизм, лежащий в основе КРБС I, по-прежнему остается неясным. Создание доклинической модели животных, имитирующих КРБС I, будет иметь решающее значение для изучения механизмов, лежащих в основе CRPS I.The крыса CPIP модель экспонатов многих КРБС мне нравится simitance, которые включают отек задней конечности и гиперемии на ранней стадии. После создания модели, а затем стойкие тепловые и механические гиперчувствительности.
Начните с анестезии всех крыс фенобарбиталом натрия. Убедитесь, что крысы должным образом анестезии, ущипнув их заднюю лапу или хвост с щипцы. И поместите ветеринарную мазь на глаза.
Держите крысу на 37 градусов по Цельсию нагретой площадке во время процедуры. Смазать правую заднюю лапу и лодыжку глицеролом. Затем сдвиньте нитрил 70 durometer O кольцо в большую сторону одной точки пять миллилитров трубки с оснастки крышка отрезали.
Аккуратно вставьте заднюю лапу в полую трубку, пока она не достигнет дна. Постепенно сдвиньте кольцо O из трубки в правый задний рядом с голеностопного сустава. И оставьте его там на три часа.
Применить такое же лечение к фиктивной группе крыс, за исключением сломанного кольца O, которые не должны вызывать ишемию. Через три часа, отрезать кольцо O и контролировать крысы, пока он не приходит достаточно сознания для поддержания sternal recumbency. Не помойт крысу в компанию других крыс, пока она полностью не оправиться от анестезии.
Поместите крысу в прозрачную плексигласовую камеру на сетчатый пол и обитаем к окружающей среде в течение 30 минут перед любым поведенческим тестированием. Используйте нити фон Фрей, чтобы проверить крысу на механическую алодинию. Начните тест со средней нити, вертикально применяя его к средней подошве задней лапы.
Нанесите подходящую силу, чтобы согнуть нить на срок до пяти секунд. Внезапное опровержение лапы считается ноцифенсивным поведением. Проведи механический тест на ародинию в дни три, два, один и через день до 13-го дня.
Применить метод тестирования вверх вниз, чтобы проверить порог и Диксон метод для расчета 50 процентов порог вывода лапы. Для проверки на тепловую гипералгезию используйте метод харгривов, непосредственно нацеливая световой луч, испускаемый из лампы мощностью 50 ватт, на заднюю лапу. Измерьте задержку вывода лапы, установив 20 секунд в качестве порога отсечения, чтобы избежать чрезмерной травмы.
Повторите каждый тест три раза в пять минут интервалы для каждой задней лапы, и принять в среднем, как задержка вывода лапы. Проведение теста тепловой гипералгезии в дни три, два, один и через день до 13-го дня. Чтобы проверить на капсаицин индуцированной острого ноцифенсивного поведения, подготовить 200 миллимолярд капсаицин фондовый раствор с DMSO, и далее разбавить его от одного до 1000 в PBS для инъекций.
Капсаицин является реагентом, который может вызвать раздражение суставов кожи, глаз и дыхания. Важно носить маску и очки при подготовке раствора капсаицина. Затем ввимите 50 микролитров капсаицина или транспортного средства в заднюю лапу с помощью 30 калибровочных игл, прикрепленных к одному миллилитровому шприцу.
Запись nocifensive поведение, такие как лизать, кусаться, или вздрогнув вводили лапу с помощью видеокамеры в течение 10 минут после инъекции. Оцените отек задней лапы, измерив увеличение диаметра лапы на 15 минут, 24 часов, 48 часов и 72 часов после создания модели. После размещения O кольцо на лодыжке, ипсилатеральной кожи задней лапы показал цианоз, признак гипоксии тканей.
После разрезания кольца O, лапа начала заполняться кровью и показала сильный отек, указывающий на интенсивную гиперемию. Опухоль постепенно уменьшилась и вернулась в нормальное русло через 48 часов после процедуры. На следующий день после создания модели, ипсилатеральная задняя лапа группы CPIP продемонстрировали очевидные механические allodynia, которые сохраняются в течение 13 дней наблюдения сроки.
Контралатеральная задняя лапа группы CPIP также демонстрировала механическую гипералгезию в течение 13 дней. При измерении тепловой гипералгезии двусторонние задние лапы крыс CPIP значительно сократили задержку вывода в ответ на вредные тепловые стимулы, по сравнению с крысами фиктивной группы. Тепловая гиперальгезия ипсилатеральной задней лапы сохранялась до конца сроков наблюдения, в то время как термическая гиперальгезия контралатеральной задней лапы длилась семь дней.
Фиктивные и CPIP группы были протестированы на ноцифенсивное поведение с инъекцией капсаицина. Когда транспортное средство было введено, фиктивная группа показала небольшой ноцифенсивный ответ, и группа CPIP показала значительно более высокую реакцию. Что еще более важно, CPIP крысы показали значительно более высокие ответы на инъекции капсаицина, чем фиктивной группы, что свидетельствует о том, что КРЫСЫ CPIP экспонат явление, аналогичное человеческих пациентов с КРБС I.By эта процедура, крысы анестезии до и во время создания модели.
Модель крыс CPIP, описанная в этом протоколе, установленном ишемией и КРБС человека, мне нравится одновременность. Семьи этих моделей, больше механизма о КРБС я могу быть изучены.
