Этот метод может помочь ответить на вопросы об эффективном или мотивационном состоянии животных при различных болевых условиях. Это важный шаг в улучшении перевода доклинических исследований. Основным преимуществом этой техники является то, что она относительно быстра и проста в выполнении, но все же оценивает сложные мотивации, которые влияют на поведение, связанное с болью.
Начните с строительства боковых стен, пола и потолка камеры, используя непрозрачный белый акрил толщиной три миллиметра. Для передней облицовочной стены используйте прозрачный акрил толщиной три миллиметра. Прикрепите крышку камеры шарниром, чтобы мышей можно было легко поместить в камеру и извлечь из нее.
Затем прикрепите самоклеящуюся светодиодную ленту к внутренней поверхности крышки, чтобы обеспечить освещение около 4 800 люкс. Сдвиньте непрозрачный акриловый лист в положение и из него, чтобы закрыть камеру от остальной части устройства MCA. Затем сконструируйте двухнеосвещенную камеру длиной 270 миллиметров, испытательную камеру MCA, используя полупрозрачный темно-красный акрил со всех сторон с откидной крышкой сверху.
Затем поместите сетку 13 x 31 с двумя миллиметровыми отверстиями на полу камеры, через которую может выступать массив тупых зондов с наконечниками диаметром 0,5 миллиметра. Отрегулируйте высоту зондов, поместив дополнительные акриловые листы под опорную пластину зонда. Используя этот подход, настройте устройство с нулевой, двух- и пятимиллиметровой высотой зонда.
В качестве альтернативы притупленным штифтам карты или аналогичным материалам используйте файлы 3D-принтера для печати пола второй камеры и пластины зонда моющимся и биосовместимым материалом, таким как пластик нейлон 12. Наконец, сконструируйте темную камеру три, используя полупрозрачный темно-красный акрил со всех сторон с откидной крышкой, похожей на камеры один и два. Поместите его на противоположный конец камеры один, чтобы служить затемненной областью выхода из механических зондов во второй камере.
За один день до планирования базового тестирования акклиматизируйте мышей к блоку MCA в течение 5-15 минут со своими товарищами по клетке, чтобы облегчить социальное исследование всего устройства. Убедитесь, что светодиоды в первой камере выключены, барьер между первой и двумя камерами остается открытым, а зонды не выступают через пол второй камеры. Затем настройте видеокамеру, способную записывать 1080-пиксельные кадры на штатив с боковым видом всего устройства MCA.
Настройте поле зрения таким образом, чтобы MCA заполнял записанное изображение. Как только запись начнется, удерживайте ручную доску сухого стирания в поле обзора камеры, чтобы пометить начало видео идентифицирующей информацией о тестировании животного. Для первого запуска установите высоту зонда на ноль и переместите тестируемую мышь из домашней клетки в камеру с барьерной дверцей на месте.
Запустите таймер, который виден в записанных кадрах. Через 10 секунд включите в камере один светодиод. После того, как мышь находилась в освещенной камере в течение 20 секунд, снимите барьер между камерами один и два.
Наблюдайте за животным в течение двух минут и измеряйте задержки или время ожидания с помощью секундомера, пока тест продолжается. Запишите задержку до первого входа во вторую камеру, задержку до пересечения более чем на полпути через вторую камеру, общее время пребывания во второй камере, задержку для достижения третьей камеры и общее время ожидания в каждой камере в течение двух минут и преобразуйте их в пропорции. После завершения тестирования верните мышь в ее домашнюю клетку.
Очистите камеры MCA 70% этанолом и дайте ему полностью высохнуть. После запуска всех мышей в когорте с высотой зонда, установленной на ноль, вставьте трехмиллиметровый лист акрила под механическую опорную пластину зонда и повторите пробег с высотой зонда в два миллиметра. После запуска всех мышей с высотой зонда, установленной на два миллиметра, вставьте еще один трехмиллиметровый лист акрила под опорную плиту зонда и повторите пробег с высотой зонда в пять миллиметров.
Выполните заключительную уборку дезинфицирующим средством в конце сеанса тестирования. В полной модели воспаления, вызванной адъювантами Фройнда, солевой раствор не изменяет латентность побега по сравнению с исходным уровнем. Мыши, которым вводили адъювант, показали значительное увеличение задержки побега через четыре дня после инъекции, но только тогда, когда высота зонда была увеличена до пяти миллиметров.
Эта повышенная латентность не наблюдалась у мышей, которые получали карпрофен за 90 минут до начала тестирования. Модель травмы нерва при невропатической боли значительно увеличила латентность для побега по сравнению с исходным уровнем, когда высота зонда была установлена на уровне пяти миллиметров. Это увеличение было предотвращено введением опиоидного анальгетика бупренорфина за 90 минут до тестирования.
Повышенная задержка побега также наблюдалась у мышей, которые не проходили базовый раунд тестирования MCA до повреждения нерва. Повышенная задержка побега у спасенных мышей с повреждением нерва на пять миллиметров была предотвращена габапентином, введенным за 90 минут до тестирования. В модели перелома или литья задержка при выходе из камеры увеличивалась пропорционально высоте зонда до травмы.
После травмы задержка осталась неизменной на уровне нуля миллиметров, но значительно увеличилась на высоте двух миллиметров и пяти миллиметров для мужчин и пятимиллиметровой высоте зонда для женщин по сравнению с исходным уровнем. Самое главное, что нужно помнить при попытке этой процедуры, это убедиться, что все мыши привыкли к устройству MCA, и поддерживать правильную рандомизацию и ослепление на протяжении всего исследования. Этот метод может использоваться наряду с другими показателями болевой чувствительности, включая фон Фрея или условное предпочтение места.
