O mecanismo subjacente ao CRPS I ainda não está claro. Estabelecer um modelo animal pré-clínico imitando CRPS I será crucial para explorar os mecanismos subjacentes ao CRPS I.O modelo CPIP de rato exibe muitos CRPS I como simitance, que incluem edema de subida traseira e hiperemia no estágio inicial. Após o estabelecimento do modelo, seguido por persistentes hipersensibilidades térmicas e mecânicas.
Comece anestesiando todos os ratos com fenobarbital de sódio. Certifique-se de que os ratos estão devidamente anestesiados beliscando sua pata traseira ou cauda com fórceps. E coloque pomada veterinária nos olhos.
Mantenha o rato em uma almofada aquecida de 37 graus Celsius durante o procedimento. Lubrifique a pata traseira direita e o tornozelo com glicerol. Em seguida, deslize um anel de 70 durometer O para o lado maior de um tubo de um ponto cinco mililitros com a tampa de encaixe cortada.
Insira cuidadosamente a pata traseira no tubo oco até chegar ao fundo. Deslize gradualmente o anel O do tubo para a linha traseira direita perto da articulação do tornozelo. E deixe lá por três horas.
Aplique o mesmo tratamento ao grupo falso de ratos, exceto com um anel O quebrado que não deve induzir isquemia. Depois de três horas, corte o anel O e monitore o rato até que ele recupere a consciência suficiente para manter a recumbência severa. Não coloque o rato na companhia de outros ratos até que ele esteja totalmente recuperado da anestesia.
Coloque o rato em uma câmara de plexiglass transparente em um piso de malha e habite o rato ao ambiente por 30 minutos antes de qualquer teste comportamental. Use filamentos von frey para testar o rato para a aodínia mecânica. Inicie o teste a partir do filamento médio aplicando-o verticalmente à superfície plantar média da pata traseira.
Aplique força adequada para dobrar o filamento por até cinco segundos. Uma retração súbita da pata é considerada um comportamento não-defensivo. Realize o teste de aodínia mecânica nos dias três, dois, um, e todos os dias até o dia 13.
Aplique o método de teste para cima para baixo para testar o limiar e um método dickson para calcular o limiar de retirada da pata de 50%. Para testar a hiperalgesia térmica, use o método hargreaves apontando diretamente o feixe de luz emitido de uma lâmpada de 50 watts para a pata traseira. Meça a latência da retirada da pata, definindo 20 segundos como o limiar de corte para evitar ferimentos excessivos.
Repita cada teste três vezes em intervalos de cinco minutos para cada pata traseira, e tome a média como latência de retirada da pata. Realize o teste de hiperalgesia térmica nos dias três, dois, um, e todos os dias até o dia 13. Para testar o comportamento não defensivo agudo induzido por capsaicina, prepare a solução de caldão de capsaicina de 200 milimos milialares com DMSO e dilua-a ainda mais de 1 a 1.000 em PBS para injeção.
Capsaicina é um reagente, que pode causar irritação articular na pele, olhos e respiração. É importante usar máscara e óculos ao preparar a solução de capsaicina. Em seguida, injete 50 microliters da capsaicina ou um veículo na pata traseira usando uma agulha de calibre 30 presa a uma seringa de um mililitro.
Regisso comportamento não defensivo, como lamber, morder ou vacilar a pata injetada usando uma câmera de vídeo por 10 minutos após a injeção. Avalie o edema da pata traseira medindo o aumento do diâmetro da pata em 15 minutos, 24 horas, 48 horas e 72 horas após o estabelecimento do modelo. Depois de colocar o anel O no tornozelo, a pele da pata traseira ipsilateral mostrou cianose, uma indicação de hipóxia tecidual.
Após cortar o anel O, a pata começou a se encher de sangue e mostrou inchaço robusto, indicando hiperemia intensa. O inchaço diminuiu gradualmente e voltou ao normal 48 horas após o procedimento. Um dia após o estabelecimento do modelo, a pata traseira ipsilateral do grupo CPIP exibiu alusionia mecânica óbvia que persistiu por 13 dias do período de observação.
A pata traseira contralateral do grupo CPIP também apresentou hiperalgesia mecânica por 13 dias. Quando a hiperalgesia térmica foi medida, as patas traseiras bilaterais dos ratos DO CPIP apresentaram latência de retirada significativamente reduzida em resposta a estímulos térmicos nocivos, em comparação com os ratos do grupo falso. A hiperalgesia térmica da pata traseira ipsilateral persistiu até o fim do período de observação, enquanto a hiperalgesia térmica da pata traseira contralateral durou sete dias.
Os grupos sham e CPIP foram testados para comportamento não-defensivo com a injeção de capsaicina. Quando um veículo foi injetado, o grupo falso apresentou uma ligeira resposta não-defensiva e o grupo CPIP apresentou uma resposta significativamente maior. Mais importante, os ratos do CPIP apresentaram respostas significativamente maiores à injeção de capsaicina do que o grupo falso, o que sugere que os ratos do CPIP apresentam um fenômeno semelhante aos pacientes humanos com CRPS I.By esse procedimento, os ratos são anestesiados antes e durante o estabelecimento do modelo.
O modelo de rato CPIP descrito neste protocolo estabelecido pela isquemia e CRPS Humano I gosta de simitance. Famílias desses modelos, mais mecanismo sobre CRPS eu posso ser explorado.
