Il meccanismo alla base del CRPS I rimane ancora poco chiaro. Stabilire un modello animale preclinico che imita CRPS I sarà fondamentale per esplorare i meccanismi alla base del CRPS I.Il modello CPIP del ratto mostra molti CRPS che mi piacciono la simitance, che includono edema posteriore e iperemia nella fase iniziale. Dopo la creazione del modello, seguito da persistenti ipersensibilità termiche e meccaniche.
Inizia anestetizzando tutti i ratti con fenobarbital di sodio. Assicurarsi che i ratti siano adeguatamente anestetizzati pizzicando la zampa posteriore o la coda con le forcep. E metti un unguento veterinario sugli occhi.
Tenere il topo su un tampone riscaldato di 37 gradi Celsius durante la procedura. Lubrificare la zampa posteriore destra e la caviglia con glicerolo. Quindi far scorrere un anello O nitrile da 70 durometri nel lato più grande di un tubo da cinque millilitri di un punto con il tappo a scatto tagliato.
Inserire con cura la zampa posteriore nel tubo cavo fino a raggiungere il fondo. Far scorrere gradualmente l'anello O dal tubo all'arto posteriore destro vicino all'articolazione della caviglia. E lascialo lì per tre ore.
Applicare lo stesso trattamento al gruppo fittizio di ratti, tranne che con un anello O rotto che non dovrebbe indurre ischemia. Dopo tre ore, taglia l'anello O e monitora il topo fino a quando non riacquista abbastanza coscienza da mantenere la reclinazione sternale. Non posizionare il topo in compagnia di altri ratti fino a quando non viene completamente recuperato dall'anestesia.
Posizionare il topo in una camera di plexiglass trasparente su un pavimento in rete e abituare il topo all'ambiente per 30 minuti prima di qualsiasi test comportamentale. Utilizzare filamenti von frey per testare il ratto alla ricerca di allodinia meccanica. Inizia il test dal filamento centrale applicandolo verticalmente alla superficie plantare centrale della zampa posteriore.
Applicare la forza adatta per piegare il filamento per un massimo di cinque secondi. Un'improvvisa retrazione della zampa è considerata un comportamento nocifensivo. Condurre il test meccanico di allodinia nei giorni tre, due, uno e a giorni e giorni fino al giorno 13.
Applicare il metodo di test verso l'alto per testare la soglia e un metodo dickson per calcolare la soglia di prelievo della zampa del 50%. Per testare l'iperalgesia termica, utilizzare il metodo hargreaves puntando direttamente il fascio di luce emesso da una lampadina da 50 watt alla zampa posteriore. Misurare la latenza di prelievo della zampa, impostando 20 secondi come soglia di taglio per evitare lesioni eccessive.
Ripeti ogni test tre volte in intervalli di cinque minuti per ogni zampa posteriore e prendi la media come latenza di prelievo della zampa. Condurre il test di iperalgesia termica nei giorni tre, due, uno e a giorni diversi fino al giorno 13. Per testare il comportamento nocifensivo acuto indotto dalla capsaicina, preparare la soluzione di stock di capsaicina 200 millimolare con DMSO e diluirla ulteriormente da uno a 1.000 in PBS per l'iniezione.
La capsaicina è un reagente, che può causare irritazione articolare alla pelle, agli occhi e alla respirazione. È importante indossare una maschera e una maschera quando si prepara la soluzione di capsaicina. Quindi iniettare 50 microlitri della capsaicina o un veicolo nella zampa posteriore usando un ago calibro 30 attaccato a una siringa da millilitro.
Registra il comportamento nocifensivo, come leccare, mordere o battere la zampa iniettata usando una videocamera per 10 minuti dopo l'iniezione. Valuta l'edema della zampa posteriore misurando l'aumento del diametro della zampa a 15 minuti, 24 ore, 48 ore e 72 ore dopo lo stabilimento del modello. Dopo aver posizionato l'anello O sulla caviglia, la pelle ipsilaterale della zampa posteriore ha mostrato cianosi, un'indicazione di ipossia tissutale.
Dopo aver tagliato l'anello O, la zampa cominciò a riempirsi di sangue e mostrò un forte gonfiore, indicando un'intensa iperemia. Il gonfiore è gradualmente diminuito ed è tornato alla normalità 48 ore dopo la procedura. Un giorno dopo la creazione del modello, la zampa posteriore ipsilaterale del gruppo CPIP mostrava un'ovvia allodinia meccanica che persistette per 13 giorni del periodo di osservazione.
La zampa posteriore contralaterale del gruppo CPIP ha anche mostrato iperalgesia meccanica per 13 giorni. Quando è stata misurata l'iperalgesia termica, le zampe posteriori bilaterali dei ratti CPIP mostravano una latenza di astinenza significativamente ridotta in risposta a stimoli termici noxious, rispetto ai ratti del gruppo fittizio. L'iperalgesia termica della zampa posteriore ipsilaterale persistette fino alla fine del periodo di osservazione, mentre l'iperalgesia termica della zampa posteriore controlaterale durò sette giorni.
I gruppi sham e CPIP sono stati testati per il comportamento nocifensivo con l'iniezione di capsaicina. Quando un veicolo è stato iniettato, il gruppo fittizio ha mostrato una leggera risposta nocifensiva e il gruppo CPIP ha mostrato una risposta significativamente più elevata. Ancora più importante, i ratti CPIP hanno mostrato risposte significativamente più elevate all'iniezione di capsaicina rispetto al gruppo fittizio, il che suggerisce che i ratti CPIP mostrano un fenomeno simile ai pazienti umani con CRPS I.By questa procedura, i ratti vengono anestetizzati prima e durante la creazione del modello.
Il modello di ratto CPIP descritto in questo protocollo stabilito dall'ischemia e dal CRPS umano mi piace la simitance. Famiglie di questi modelli, più meccanismo su CRPS posso essere esplorato.
