Этот метод может быть использован для воспроизведения воспалительных явлений, возникающих при остром билиарном панкреатите. Возможно изучение изменений ткани поджелудочной железы на ранних стадиях, что в клинике, как правило, невозможно. Основные преимущества этой методики заключаются в том, что она быстро и легко воспроизводится для обученного исследователя, и она предлагает результаты, аналогичные острому панкреатиту у людей.
Метод может быть использован для изучения фармакологических иммунных реакций молекул лекарственных средств и других терапевтических вмешательств, так как позволяет изучать воспалительно-опосредующие клетки в поджелудочной железе и прилегающих органах. При попытке этого протокола обнаружение органов и установление области канюляции имеет решающее значение. Запомните расположение органов и сначала выполните инъекционное применение, используя цветной раствор, такой как метиленовый синий.
После проверки глубины анестезии щипцом пальца ноги очистите брюшную область обезболенной мыши 5%-ным раствором повидонового йода. Используя триммер, удалите волосы между грудью и нижней частью живота и очистите хирургическую область площадью около двух квадратных сантиметров 70% спиртом. Обездвижить животное на хирургической доске и с помощью ножниц разрезать пять миллиметров кожи горизонтально на верхней части живота и на один сантиметр ниже мечевидного отростка.
Повторите разрез на брюшине для выполнения лапаротомии с минимальным обнажением полости. Используя ретрактор, потяните печень к голове примерно на один сантиметр от кишечника и найдите область поджелудочной железы и двенадцатиперстной кишки. Используя щипцы, поднимите печень по направлению к голове животного.
Осторожно потянув часть тонкой кишки, зафиксируйте два боковых конца полипропиленовым швом 6-0 для лучшего обзора дистальной части общего желчного протока. Используя микрозажим сосуда, временно закупорите проксимальный общий желчный проток. Обнажите орган вне брюшной полости.
Затем сделать временную окклюзию дистального общего желчного протока с 8-0 шов. Чтобы получить доступ к общему желчному протоку, проколите периампулярную область, которая выглядит как беловатая часть стенки тонкой кишки. С помощью 0,4-миллиметровой иглы, соединенной с 0,54-миллиметровой полиэтиленовой трубкой, запустите инфузионный насос для инфузии 2,5% раствора таурохолата натрия с постоянной скоростью 10 микролитров на 10 грамм массы тела в течение трех минут.
После инфузии удалите микрозажим сосуда, временный 8-0 шов, а также инъекционная игла из желчного протока поджелудочной железы. Зашить брюшную полость 6-0 неабсорбирующим монофиламентным полипропиленовым швом. Время между лапаротомией и торцевым швом не должно быть более 30 минут.
После операции поместите животных в полиэтиленовые коробки, выложенные древесной стружкой и водой и пищей ad libitum. Осторожно удерживайте животное с оттянутой назад кожей, способствуя небольшому выпячиванию глазного яблока, и расположите животное лицом вверх. Заложить в глаз животного каплю глазной мази, содержащей местный анестетик.
Поместите конец капиллярной трубки в медиальный угол глаза и аккуратно вставьте его под глазное яблоко под углом примерно от 30 до 45 градусов. Вращайте капиллярную трубку до тех пор, пока не начнется кровоток. Как только сбор закончится, обеспечьте гомеостаз, держа веки закрытыми при легком сжатии.
Позже, используя иглу 27 калибра, ввести четыре миллилитра ледяного холода PBS в брюшинную полость мыши. После инъекции аккуратно массируйте брюшину в течение 10 секунд, чтобы удалить прилипшие клетки. С помощью ножниц и пинцета сделайте небольшой разрез в 0,5 сантиметра на внутренней коже и мускулатуре для обнажения брюшной полости.
Вставьте луковичную пипетку в брюшину и соберите как можно больше жидкости, следя за тем, чтобы не аспирировать жировую ткань. Соберите часть поджелудочной железы из области головы для дальнейшей обработки. Поместите собранную жидкость в трубки, хранящиеся на льду.
Затем центрифугируют перитонеальную жидкость в 250 раз больше G в течение пяти минут и сохраняют супернатант для дозирования интерлейкина-6. Для получения сыворотки центрифугируют собранные образцы крови в 700 раз больше G в течение 15 минут и запасают супернатант для дозирования амилазы и интерлейкина-6. Анализ ткани поджелудочной железы через 12 часов после индукции острого панкреатита показал интенсивное воспаление в пораженном органе по сравнению с образцами тканей из фиктивной группы.
Аналогичные результаты были представлены гистологическим исследованием после окрашивания гематоксилиновым эозином образцов тканей из фикции и АПТА. Анализ сыворотки крови показал значительное повышение концентрации амилазы и интерлейкина-6 в группе АП по сравнению с фиктивной группой. В то же время концентрация интерлейкина-6 была достоверно выше в жидкости перитонеальной полости в группе АП.
Тяжесть панкреатита в данной модели пропорционально зависит от концентрации, объема и давления инфузии, а также времени индукции острого панкреатита. С помощью этой методики можно изучить влияние непрерывного промывания брюшины на тяжелый острый панкреатит.
