Хронический панкреатит является сложным заболеванием, включающим воспаление поджелудочной железы, фиброз, боль в животе и другие симптомы. Инфузионный модель желчного протока TNBS воспроизводит невропатичную боль, наблюдаемую у пациентов с хроническим панкреатитом. Этот протокол инфузии желчных протоков TNBS был оптимизирован для индуцирования генерации модели хронического панкреатита у мышей.
Поскольку слияние желчных протоков у мышей технически сложно, его визуализация будет полезна для исследователей, новичков в этом методе. До и через две и три недели после операции используйте мононити фон Фрея для применения различных уровней силы в порядке возрастания к верхней области живота восьми-10-недельной черной шестимышки C57, 10 раз в течение одной-двух секунд за одно применение. Рассмотрите возможность повышения втягивания или облизывания живота в качестве положительного ответа.
Затем загрузите инсулиновый шприц, оснащенный иглой 31 калибра с 50 микролитрами свежеприготовленного 0,75-процентного раствора TNBS. Загрузите второй шприц с 50 микролитрами 10-процентного этанола в физиологическом растворе в качестве управления транспортным средством и поместите оба шприца на лед, защищенный от света. После подтверждения отсутствия реакции на педальный рефлекс удаляют волосы из брюшной области обезболенной мыши путем бритья или нанесения крема для удаления волос и помещают мышь на нагретую хирургическую прокладку под рассекающим микроскопом.
Нанесите ветеринарную мазь на каждый глаз и продезинфицируйте место операции тремя последовательными двухпроцентными йодными и тремя 70-процентными салфетками для этанола, используйте микроножные ножницы, чтобы сделать разрез от 0,5 до одного сантиметра одним непрерывным движением и использовать ватные тампоны, чтобы мягко обнажить двенадцатиперстную кишку и найти общий желчный проток. Чтобы предотвратить поступление лечения в печень и желчный пузырь, используйте микроскоп, чтобы поместить прямой микрохемоклип над проксимальным общим протоком и вставить иглу нагруженного TNBS шприца через сосочек ватера в проток поджелудочной железы. Используйте изогнутый микрохемоклип, чтобы закрепить иглу, и вливать раствор в проток поджелудочной железы в течение одной минуты.
Когда весь раствор будет доставлен, аккуратно снимите микрозажимы и убедитесь, что двенадцатиперстная кишки вернулась в исходное положение. Перед закрытием брюшной полости добавьте 500 микролитров стерильного физиологического раствора от 36 до 37 градусов Цельсия, чтобы помочь двенадцатиперстной кишки вернуться в исходное положение и помочь с восстановлением перистальтики. Используйте непрерывный шов со швом пять О, чтобы закрыть разрез в мышечном слое, и закройте кожу, используя прерванный шов с помощью стежка четырех-О.
Затем поместите мышь в восстановительную клетку на грелку с контролем до полного лежания. Ежедневно контролируйте здоровье и поведение мышей в течение первой недели после операции на наличие признаков дистресса, таких как вокализация, сгорбленная поза спины или уменьшение локомоции и измерение массы тела через день. Как было замечено, инъекция 50 микролитров чернил, как показала, приводит к инфильтрации всей поджелудочной железы, что позволяет индукционировать более однородный фенотип заболевания.
В этом репрезентативном анализе в первые три дня после операции мыши в контрольной группе потеряли около шести процентов своей первоначальной массы тела, прежде чем постепенно восстановиться и набрать более 100% своей первоначальной массы тела к 21-му дню. Напротив, мыши, которые получали TNBS, потеряли около 15 процентов своей первоначальной массы тела в течение первых пяти дней после операции и восстановили чуть менее 100 процентов своей первоначальной массы тела к 21-му дню. По сравнению с контрольными мышами, животные, введенные tNBS, показали повышенную механическую гиперчувствительность брюшной полости в течение второй и третьей недель после операции.
Размер и вес на массу тела поджелудочной железы были значительно снижены у мышей TNBS по сравнению с поджелудочной железой, собранной у контрольных животных, что свидетельствует о выраженной атрофии поджелудочной железы у животных, получавших TNBS, в соответствии с результатами у людей с тяжелым и долгосрочным хроническим панкреатитом. Гистологический анализ участков ткани поджелудочной железы у контрольных мышей, получавших этанол, показал нормальную морфологию, в то время как участки тканей у мышей, обработанных TNBS, продемонстрировали демцебную реализацию с массивной потерей ацинарных клеток, которые были заменены инфильтрацией жировых клеток и фиброзом. Предотвращение попадания введенного TNBS в мочевой пузырь и кишечник важны, поскольку TNBS оказывает повреждающее ткани действие.
Во время инфузии держите руку как можно более стабильной, чтобы избежать прокола, действующего на желчный проток. В дополнение к индуцированию развития хронического панкреатита, эта инфузия желчных протоков мышей может быть использована для разработки других моделей заболеваний поджелудочной железы. Эта мышиная модель TNBS хронического панкреатита может быть использована для изучения как патогенеза, так и лечения хронического панкреатита, а также других заболеваний поджелудочной железы.
