Наука о морфологии и качество клеток, гранул крахмала и белковых тел в ядре определяют вес и качество семян. В этом исследовании мы представляем как простую популяцию целого ядра, встроенного в LR White смолу, и устанавливаем простой сухой метод всасывания целых ядер. Мы выбираем LR Белая смола в качестве встроенной среды по двум основным причинам.
Во-первых, это низкая вязкость и сильная проницаемость, что приводит к его хорошему применению в подготовке этого мощного раздела семян, особенно для зерновых зрелых ядер с большим объемом и высоким содержанием крахмала. Во-вторых, образец, встроенный в LR Белая смола может быть легко окрашены со многими химическими красителями, чтобы четко проявлять морфологию образцов под светом с флуоресцентным микроскопом. Подготовленные разделы могут быть специально окрашены, чтобы показать клетки, крахмал гранулы, и белковые тела четко в появлении всего ядра, и параметры морфологии также могут быть количественно проанализированы.
Метод содержит исследования. Здесь мы используем зрелые ядра кукурузы с большим объемом и высоким содержанием крахмала в качестве образца для выставки процессов шаг за шагом. Для начала зажимы ядра в простую бутылку.
Добавьте около 10 миллиметров 2,5%фосфат-буферного глутаралдегида. еще один рН 7,2 и поместите его на 4 градуса по Цельсию в течение 48 часов, чтобы исправить их обоих. Затем выньте эти ядра и нарежьте их продольно или поперечно, толщиной от двух до трех миллиметров.
Вам нужен острый двусторонний лезвие. И починить их еще на 48 часов. Затем, мыть образцы три раза около 10 миллиметров, так что 0,1 М фосфат буфера, рН 7,2 в течение 30 минут каждый раз.
Чтобы увлажнить образцы шаг за шагом, замочите их примерно в 10 миллиметров 30%этанола aqueous раствор в течение 30 минут во-первых, и последовательно замочить их в 10 миллиметров, так что 50%70%90%один раз, и 100%3 раза. Чтобы проникнуть в образец шаг за шагом, последовательно получить их с 10 миллиметров LR Белая смола раствор разбавлен этанолом 25%50%75%один раз, и 100%дважды при четырех градусах по Цельсию в течение 12 часов каждый раз. Перед встраиванием необходимо подготовить пьедесталы к образцам.
Добавьте 250 микролитров чистой белой смолы LR в две миллиметры центрифуги трубки и полимеризовать его при шести градусах по Цельсию в течение 48 часов. Затем последовательно добавляйте 500 микролитров чистой LR белой смолы и проникайте в образец в центрифугу с пьедесталом. После выпрямления образцов анатомической иглой поставь смолу на шесть градусов по Цельсию в духовку на 48 часов.
Выньте эти встроенные ядра из центрифуги трубки и вырезать избыток смолы вокруг образца с помощью резкого лезвия. Поместите блок смолы в образец держателя микротона и обрезать излишние смолы на поверхности образца и вокруг образца с лезвием. Далее полировать поверхность образца, наконец, со стеклянным ножом, пока полный раздел может быть сформирован.
Теперь пришло время подготовить этот удивительный раздел с толщиной два микрона. Перед нарезкой, положить небольшой меди говорил около двух миллиметров над краем лезвия, чтобы предотвратить раздел от керлинга. Как раздел удлиняет, положить говорил под раздел, чтобы поддержать его.
Затем добавьте 100 микролитров воды на непроверенный слайд и тщательно перенесите полный и непрерывный участок в воду с помощью угодников. Нагрейте и высушите их при температуре 50 градусов по Цельсию, чтобы сгладить морщинистую секцию. Наконец, два важных совета нуждаются во внимании.
Во-первых, если секция рушится или слезы, продлить время для каждого проникновения смолы образца. Во-вторых, если секция имеет несколько линий, параллельных ножу, плотно зажимайте блок образца. Если секция имеет некоторые линии вертикальной к ножу, пожалуйста, используйте новый нож.
Чтобы наблюдать морфологию клеток, крахмала гранул и белковых тел, мы можем испачкать секции флуоресцентным осветлением 28, раствором йода и блестящим синим R250 Кумасси соответственно. Для других конкретных пятен, основывать его на предложении исследования. Здесь мы используем раствор йода, чтобы испачкать гранулы крахмала в качестве примера.
Добавьте 40 микролитров раствора йода, чтобы погрузить секцию. И держать его в банке в течение одной минуты. А затем накройте образец рукавом крышки.
И смыть избыточное решение агента вокруг него. Наблюдайте и фотографуйте образец непосредственно под подсвещаемый микроскоп, оснащенный камерой видеонаблюдения. Мы можем обрабатывать и количественно анализировать сфотографированные изображения для области, длинного или короткого доступа и округливости клеток, гранул крахмала и белковых тел в разных регионах для ядра с помощью программного обеспечения для анализа морфологии.
Мы устанавливаем простой сухой метод сечения для удержания целых секций размером с ядро в смоле LR White. Метод может подготовить поперечные и продольные секции всего ядра с двумя микронами. или примеры, зрелое целое семя рапса масляного семени может быть поперечно и продольно.
Успешно могут быть успешно подготовлены и участки зрелого целого ядра кукурузы с большим объемом. Кроме того, с помощью метода можно изукомить развиваемое ядро, приготовленное ядро и проросное ядро. Подготовленные разделы целых ядер имеют ниже приложения.
Во-первых, участки всего ядра могут быть использованы для наблюдения за структурой тканей семян. Например, разделы всего эмбриона масляного рапса, окрашенные сафранином, могут ясно показать, что это радикальная, гипер-случайная, внутренняя и внешняя части целого ядра могут быть использованы для наблюдения и анализа морфологии клеток. Например, поперечные участки целого эмбриона масляного рапса окрашены флуоресцентным осветлением 28, а клеточные масла окрашены специально.
Микроморфология клеток в любых регионах всего эмбриона может отображаться при высоком увеличении. Параметры морфологии паренхимальных клеток, могут быть количественно проанализированы с помощью программного обеспечения анализа морфологии и показать некоторые различия в различных регионах эмбриона. Поперечные участки целого ядра кукурузы, окрашенные флуоресцентным осветлением 28, также могут проявляться как морфология клеток, а параметры морфологии клеток различны в различных областях эндосперма.
участки целого ядра могут быть окрашены раствором йода, чтобы продемонстрировали свою морфологию крахмала гранул, например, поперечные и продольные участки ядер кукурузы, окрашенных йодом, могут ясно проявлять свою морфологию крахмальных гранул. Гранулы крахмала в различных регионах показывают значительно различную морфологию, размер и количество в эндоспермовых клетках. Таким образом, количественный анализ морфологических параметров гранул крахмала показывает, что они значительно отличаются в различных регионах для эндосперма.
Разделы могут быть использованы для наблюдения и анализа морфологии белковых тел. Например, крахмал белка окрашенных синий использованием Coomassie блестящий синий R250. Пространственное распределение белка крахмала во всем эмбрионе рапса масляного сеяного может наблюдаться в его низком увеличении, и микро структура может быть выставлена четко при высоком увеличении.
Кроме того, можно количественно проанализировать индекс погрешности чисел и параметры морфологии белковых тел в выбранных регионах. Этот метод обеспечивает первое и простое приготовление секций смолы из целых ядер из развивающихся и зрелых семян. Секционные применения в структуре тканей всего ядра, а затем изучение морфологии клеток, крахмала гранул, и белковых тел в различных регионах целого ядра.
Приобретенные изображения могут быть количественно проанализированы, чтобы показать параметры морфологии клеток, крахмала гранул и белковых тел и далее сравнить их в разных регионах целого ядра.
