Протокол постепенного охлаждения имеет более медленную скорость охлаждения, чем современные экспериментальные методы. Эта модель клинически актуальна, потому что время до целевой температуры ближе к диапазону человека. Главным преимуществом этих методик является их простота и недороговизна.
Кроме того, эти модели не требуют специального оборудования. Клиническая скорость охлаждения, достигнутая из постепенной модели, позволит более обоснованно проводить доклиническое исследование преимуществ гипотермии в качестве меры лечения пациентов с инсультом. Начните с размещения анестезированной крысы на хирургический тепловой мат в положении лежа на спине с носом в конусе.
Закрепите нос хирургической лентой. Сбрить мех с нижней правой части живота и подкожно ввести 200 микролитров 0,05% бупивакаина в качестве местного анестетика. Нанесите антисептический раствор на свежевыбритую область.
Сделайте двухсантиметровый продольный разрез вдоль правой брюшной области проксимально к правому бедру достаточно глубоко, чтобы обнажить пространство в вентральной складке бедра, и используйте гемостаты и щипцы, чтобы создать карман под кожей, достаточно большой, чтобы держать устройство регистратора данных. Вставьте устройство регистратора данных о температуре в карман и используйте 5-0 швов, чтобы закрыть мышцу и кожу, убедившись, что регистратор данных не упирается в нагревательный коврик. Чтобы вызвать активное переохлаждение, на первом месте одну ретортную стойку с зажимом в 20 сантиметрах от головы крысы и в 120 сантиметрах от нижней части живота и прикрепите 60-миллиметровый 12-вольтовый вентилятор с настройкой не менее 4000 оборотов в минуту к каждой стойке с вентиляторами, направленными в нижнюю часть спины крысы.
Отрегулируйте тепловой коврик до желаемой целевой температуры для инициирования переохлаждения и включите оба вентилятора. В положении лежа наносите три или четыре спрея 70% этанола каждые пять минут на нижнюю часть спины крысы, одновременно взъероживая шерсть для более быстрой индукции охлаждения и внимательно следя за ректальной температурой. Прекратите применение этанола, когда ректальная температура находится в пределах одного градуса от целевой температуры.
Когда температура находится в пределах 0,5 градуса от цели, выключите вентиляторы, чтобы температура медленно снижалась до цели без чрезмерного охлаждения. В случае чрезмерного охлаждения замените один вентилятор тепловой лампой животного и используйте тепловую лампу, чтобы мягко согреть животное до целевой температуры. Как только целевая температура будет достигнута и стабилизирована, контролируйте температуру в течение оставшегося периода гипотермии.
В конце гипотермического периода установите тепловой коврик на 37 градусов по Цельсию и дайте животному терморегулироваться в течение 30-минутного периода. Чтобы вызвать клинически достижимое постепенное начало гипотермии, снижайте температуру регулируемого температурой ядра гомеотермического теплового мата небольшими шагами для достижения гипотермии в течение определенного заранее определенного периода времени. Когда целевая температура будет достигнута, поддерживайте целевую температуру в течение нужного интервала без какого-либо внешнего охлаждения.
Чтобы согреть животное в конце гипотермического периода, отрегулируйте тепловой коврик, чтобы позволить крысе согреться до 37 градусов по Цельсию в течение желаемого интервала времени. По завершении любого типа эксперимента по гипотермии удалите регистратор данных, чтобы можно было анализировать зарегистрированные температуры тела. В этом анализе гипотермия была достигнута при быстром охлаждении до целевой температуры 32,5 градуса Цельсия за 15 минут, как показано на демонстрации.
Может наблюдаться небольшое превышение температуры из-за неспособности остановить охлаждение примерно на 0,5 градуса Цельсия выше целевой температуры. Целевая температура поддерживалась в течение 30 минут, а согревание начиналось через 1,5 часа. В этом эксперименте был использован подход постепенной индукции гипотермии, чтобы позволить достичь целевой температуры в 33 градуса Цельсия за два часа.
Целевую температуру поддерживали в течение 30 минут перед повторным согреванием через 2,5 часа. Метод постепенного охлаждения привел нас к исследованию того, будет ли более клинически значимый темп охлаждения предотвращать повышение внутричерепного давления после ишемического инсульта у крыс.
