Использование ультразвука и эластографии сдвиговых волн позволяет исследователям измерять изменения в жире печени и фиброзе, неявные в моделях неалкоголичного стеатогепатита. Этот метод визуализации является неинвазивным, высокопроизводимым и клинически переводимым методом и может быть использован для оценки стадии заболевания и эффективности в моделях неалкогольного стеатогепатита во время открытия лекарств. Для начала поместите шести-семинедельных самцов крыс Wistar Han весом от 150 до 175 граммов парами в индивидуально вентилируемые клетки с надлежащей подстилкой примерно при 22 градусах Цельсия и относительной влажности от 40 до 70% с циклом света / темноты от 12 до 12 часов.
Обеспечьте 20 крыс холином дефицитом, диетой с высоким содержанием жиров с 1% холестерина и еще 20 крыс стандартным лабораторным чау-чау грызунов. Чтобы настроить инструмент визуализации, поместите нагретую поверхность в область визуализации, чтобы держать животное в тепле во время визуализации, и зафиксируйте конус носа анестезии для доставки ингаляционной анестезии. Используйте держатель ультразвукового зонда, чтобы переместить ультразвуковой зонд в нужное место и предотвратить покои зонда на животное.
Как только крыса будет полностью обезболена, перенесите ее из индукционной камеры в теплое одеяло с горячей водой. Используйте химический крем для депиляции, чтобы удалить волосы из грудной клетки в таз с правой стороны крысы. Поместите крысу в левое боковое лежачем положении и заклейте верхние лапы над головой на теплой платформе для визуализации.
Нажмите клавишу пациента на панели управления прибором и идентифицируйте субъекта в соответствии с дизайном исследования. Нанесите небольшое количество подогретого ультразвукового геля на депилированную область кожи крысы. Переместите ультразвуковой зонд, чтобы он коснулся области, покрытой гелем.
Как только на экране появится живое изображение внутренних органов в режиме B, переместите ультразвуковой зонд в область чуть выше бедра, как раз параллельно поясничным позвонкам. Используйте дисплей режима B, чтобы найти правую почку, идентифицируя разделение крупной почечной артерии и продолговатого мозга коры. Наблюдайте за частью печени в одной плоскости изображения и убедитесь, что пузырьки воздуха или тени не присутствуют на изображении.
Отрегулируйте фокус и убедитесь, что кора почек и паренхима печени находятся в одной плоскости, чтобы получить четкое изображение. Убедитесь, что животное находится между вдохами при замерзании экрана, чтобы избежать захвата размытых изображений. Выберите коэффициент режима B, чтобы измерить относительную яркость ткани из выбранной области интереса.
Создайте двухмиллиметровый круг и поместите его на интересующей его области на изображении печени, которая расположена справа от почки. Поместите новый круг на изображение коры почек, сохранив глубины кругов на печени и коре почек одинаковыми. Нажмите кнопку выбора на панели управления, чтобы отобразить гепато-почечный индекс в виде соотношения B-мод и повторить измерение три раза на разных глубинах и плоскостях ткани, затем рассчитать среднее значение.
Переместите зонд поперечно в правую подреберную область, чтобы найти печень в режиме B. Найдите четкую область печени, которая в основном состоит из паренхимы и свободна от крупных кровеносных сосудов, таких как воротная вена и печеночная артерия, затем нажмите кнопку SWE на панели управления, чтобы создать карту эластичности сдвига ткани. Отрегулируйте размер и положение коробки SWE под капсулой печени в области, свободной от теней.
Когда коробка будет заполнена и стабильна, нажмите кнопку замораживания на панели управления, пока крыса находится между вдохами. Коснитесь Q-Box на сенсорном дисплее прибора, чтобы вычислить упругость из интересуемой области на карте упругости волны сдвига. Появится круг и окно данных.
Расположите круг в области без тени с равномерной окраской, избегая областей жесткости. Повторите процедуру три раза, перемещая зонд вверх и вниз или вбок на брюшной полости, чтобы собрать изображения, нанесенные на карту SWE, из разных областей печени. Когда закончите, снимите ленту с лап и протрите лишний гель.
Поместите крысу обратно в теплую и сухую клетку и дайте ей полностью восстановиться. Выберите все сканы, необходимые для анализа данных, установив флажок рядом с именем пациента с помощью трекбола и кнопки Выбрать. После экспорта файлов откройте отдельный JPG-файл каждого сканирования и наблюдайте за данными в правой части изображения.
Скопируйте все данные в электронную таблицу или другое программное обеспечение для управления базами данных и выполните необходимый статистический анализ. Репрезентативные изображения гепато-почечных индексов из контрольной и холин-дефицитной групп с высоким содержанием жиров показывают, что яркость печени в коре почек была почти одинаковой, а гепато-почечный индекс был меньше одного в контрольной группе. В группе диеты с высоким содержанием жиров яркость печени увеличилась, а гепато-почечный индекс был повышен до 1,91 через шесть недель и 1,79 в 12-недельные временные точки.
Значения гепато-почечного индекса группы диеты с высоким содержанием жиров быстро росли в течение первых трех-шести недель, прежде чем достичь плато. Участки печени, окрашенные маслом красного красителя O, показали значительно увеличенную площадь окрашивания в группе диеты с высоким содержанием жиров по сравнению с контрольной группой. Также была обнаружена корреляция между процентом окрашенной площади и гепато-почечным индексом.
Жесткость тканей постепенно увеличивалась в группе диеты с высоким содержанием жиров в течение 12 недель и достигла 23,1 килопаскалей из-за фиброза. Образцы печени были окрашены пикрозириусом красного цвета для локализации коллагена в качестве индикатора фиброза. Значительное увеличение процентной окрашенной площади наблюдалось в группе с высоким содержанием жиров по сравнению с контрольной группой.
И также была обнаружена сильная корреляция между процентной окрашенной областью и числами модуля E волны сдвига. Важно правильно разместить датчик и измерительные круги или коробки. Избегание артефактов на изображениях позволит проводить повторяемые и последовательные измерения.
После процедуры измерения ex vivo экспрессии генов триглицеридов печени и коллагена также могут быть выполнены на ткани некропсии для подтверждения результатов, наблюдаемых на визуализации.
