Наш протокол важен, потому что он представляет собой новую парадигму для оценки воздействия хронического стресса, особенно психосоциального стресса, на исходы беременности. В этом протоколе мы подвергаем беременных мышей различным психосоциальным оскорблениям различной интенсивности непредсказуемым образом. Предыдущие парадигмы моделей животных использовали физические стрессоры или ограниченное количество стрессоров, вводимых повторно, что не отражает опыт женщин во время беременности.
Наша модель хронического психосоциального стресса преодолевает эти ограничения. Этот метод имеет широкие последствия для различных областей исследований, включая психическое здоровье матери и неблагоприятные исследования, связанные с развитием младенцев, и, в более широком смысле, для понимания происхождения развития болезни у взрослых через неблагоприятные внутриутробные события. Прежде чем начинать каждый стрессор в парадигме CGS, принесите мышей группы CGS из жилой комнаты в комнату, предназначенную для CGS.
Подвергайте мышей воздействию различных стрессоров после 11-дневного режима стрессоров, идущего с гестационного дня 6,5 до 17,5. Чтобы подвергнуть мышей воздействию посторонних предметов, случайным образом распределите шесть шариков или шесть Лего разной формы в чистую статическую клетку с мышиной подстилкой без мышиных гнезд. Поместите всех мышей из одной домашней клетки в статическую клетку с посторонними предметами на два часа, затем верните мышей в их домашнюю клетку.
Чтобы подвергнуть мышей запаху хищника, поместите грязную подстилку толщиной в один сантиметр от самок крыс в чистую статическую клетку без мышиной подстилки или птенцов. Поместите всех мышей из одной домашней клетки в статическую клетку с грязной крысиной подстилкой на два часа, затем верните мышей в их домашнюю клетку. Чтобы подвергнуть мышей наклону клетки, поместите всех мышей из одной домашней клетки в чистую статическую клетку с подстилкой для мышей без мышиных гнезд.
Держите клетку наклоненным под углом 30 градусов к стене в течение двух часов, а затем верните мышей в их домашнюю клетку. Чтобы подвергнуть мышей частым изменениям подстилки, поместите всех мышей из одной домашней клетки в чистую статическую клетку с мышиной подстилкой без мышеных гнезд. Каждые 10 минут осторожно перемещайте мышей в другую чистую клетку и заменяйте подстилку мыши.
Через два часа верните мышей в их домашнюю клетку. Чтобы подвергнуть мышей удалению подстилки, поместите всех мышей из одной домашней клетки в пустую, чистую статическую клетку без мышиной подстилки или птенцов на два часа, а затем верните мышей в их домашнюю клетку. Чтобы подвергнуть мышей движению на шейкере, поместите всех мышей из одной домашней клетки в чистую статическую клетку с мышиной подстилкой без мышиных гнезд.
Поместите статическую клетку на взаимный лабораторный шейкер, рассчитанный на 140 ударов в минуту в течение двух часов, затем верните мышей в их домашнюю клетку. Чтобы подвергнуть мышей воздействию света на ночь, поместите всех мышей из одной домашней клетки в чистую статическую клетку с мышиной подстилкой без мышиных гнезд. Держите свет включенным на ночь, чтобы помешать темному циклу.
На следующий день верните мышей в их домашнюю клетку. Чтобы подвергнуть мышь новым товарищам по клетке, переведите мышь в чистую статическую клетку с мышиным постельным бельем, содержащим две незнакомые самки мышей. Оставьте мышь в статической клетке с незнакомыми товарищами по клетке на ночь.
На следующий день мыша вернулась в свою домашнюю клетку со знакомыми товарищами по клетке. Чтобы подвергнуть мышей влажному подстилению, насытите подстилку мыши в статической клетке чистой водой, выдерживаемой при 24 градусах Цельсия. Поместите всех мышей из одной домашней клетки в статическую клетку с мокрым постельным бельем на ночь.
На следующий день верните мышей в их домашнюю клетку. После того, как режим стрессора будет завершен на гестационный день 17,5, в одиночку разместят всех экспериментальных мышей, чтобы подготовиться к партовению и последующим функциональным оценкам. Воздействие на беременных самок мышей CGS вызывает изменения в хронических стрессовых параметрах, таких как снижение прироста массы тела во время беременности и увеличение веса надпочечников в раннем послеродовом периоде.
Важно отметить, что плотины CGS демонстрируют послеродовые аномалии и материнскую нейроэндокринную функцию, о чем свидетельствует повышение уровня кортикостерона в сыворотке крови после нового острого инсульта. Кроме того, плотины CGS демонстрируют изменения в материнской помощи, о чем свидетельствует увеличение степени фрагментации материнских сигналов, получаемых детенышами. Средняя продолжительность облизывания / груминга сокращается, в то время как среднее количество схваток увеличивается, что указывает на многочисленные короткие эпизоды питательного поведения.
Предпочтение сахарозы также подавлено в плотинах CGS по сравнению с контрольными плотинами, что свидетельствует о наличии ангедонии. Наконец, плотины CGS также демонстрируют повышенное поведение, связанное с тревогой, что измеряется сокращением времени, проведенного в открытых квадрантах EZM по сравнению с контрольными плотинами. У потомства воздействие CGS внутриутробно приводит к снижению прибавки в весе в течение постнатального периода с 7 по 21 день, хотя нет никаких различий при рождении.
Это снижение прироста массы тела присутствует у потомства обоих полов. При попытке этой процедуры установление графика получения временных беременностей и последовательное внедрение всей серии, переменных непредсказуемых психосоциальных стрессоров имеет решающее значение. Этот метод может помочь ответить на интересные вопросы, такие как может ли материнский психосоциальный стресс вызывать специфические для пола эффекты на функцию плаценты или развитие мозга и поведение потомства?
И могут ли эти эффекты быть обращены вспять или изменены фармакологическим вмешательством или послеродовой материнской помощью?
