Наше исследование направлено на выявление аномалий на уровне цепи, возникающих в результате воздействия травмы на различных этапах развития нервной системы, мы разработали модель ранней подростковой физической травмы, чтобы лучше понять влияние детской травмы на функционирование мозга взрослого человека. Специалисты в области поведенческого здоровья отмечают увеличение числа пациентов, страдающих от долгосрочных последствий жестокого обращения в детстве. Тем не менее, большинство современных исследований на грызунах сосредоточены на воздействии травм во взрослом возрасте или влиянии пренебрежения младенцами.
Ни один из них напрямую не решает уникальные проблемы, наблюдаемые у взрослых, которые в детстве подвергались жестокому обращению. Наш протокол формирует устойчивый избегающий фенотип у более чем двух третей побежденных животных во взрослом возрасте. Кроме того, используя молодых самцов без опыта разведения, содержащихся вместе с самками, наш протокол способен производить агрессивных самцов CFW без использования дополнительных взрослых мышей B6 для разжигания агрессии, что упрощает и тщательно внедряет протокол.
Наше исследование поможет внести свой вклад в растущее понимание того, как воздействие травмы на разных стадиях развития оказывает уникальное биологическое, поведенческое и анатомическое воздействие на мозг, и, как мы надеемся, поможет в разработке новых технологий лечения людей, переживших жестокое обращение в детстве. Для начала объедините домашних самцов CFW с самками CFW OVX на одну неделю, чтобы дать возможность получить сексуальный опыт и увеличить территориальную агрессию у самца. Через неделю извлеките самку CFW OVX из клетки и поместите ее в чистую пустую клетку.
Затем введите стимул самца С57 в клетку с самцом CFW на одну минуту и зафиксируйте задержку атаки. После этого удалите самца раздражителя C 57 и поместите самку CFW OVX обратно в клетку с самцом CFW, прежде чем вернуть ее в комнату для самцов CFW, которые либо не атакуют, либо демонстрируют латентность атаки более 30 секунд в течение двух или более дней. Используйте этих неагрессивных самцов CFW в качестве стимульных животных во время тестирования социального взаимодействия в открытом поле.
Когда самцам-подросткам С57 исполнится четыре недели, взвесьте каждое животное и запишите вес. Разделите животных на две равные когорты, контрольную и побежденную, убедившись, что вес между двумя когортами существенно не отличается. Разместите одного подростка C57 с одной стороны перегородки из плексигласа, а другого управляющего подростка C57 с другой стороны перегородки.
В доме 11-го дня каждый подросток контрольной группы находился рядом с другим контрольным подростком, между ними была перегородка из плексигласа до конца эксперимента. Взвесьте и запишите вес подростка C57, который должен быть побежден. Раны размером более четырех миллиметров в диаметре, показанные здесь в масштабе, требуют немедленной эвтаназии подопытного животного.
Затем удалите самку CFW OVX из клетки с постоянным самцом CFW и поселите ее вместе с другими самками OVX. После этого познакомьте подростка C 57 с клеткой с постоянным самцом CFW и запустите секундомер. Выведите подростка из клетки после 30 укусов или пяти минут, в зависимости от того, что произойдет раньше, и запишите данные об атаке.
Затем поместите перегородку из плексигласа в середину клетки для мужчин-резидентов CFW, следя за тем, чтобы резидент CFW находился с одной стороны, а побежденный подросток — с другой. На 11-й день разместите побежденных подростков рядом с другими побежденными подростками с перегородкой из плексигласа между ними на время эксперимента. Приучайте контрольных и побежденных животных к испытательному залу в течение одного часа.
Записывайте все сеансы с помощью программного обеспечения для отслеживания животных. Поместите проволочную чашку у левой стены акриловой арены размером 44 на 44 на 44 сантиметра в середине стены. Нарисуйте вокруг чашки двухсантиметровую круговую зону взаимодействия.
Теперь поместите C 57 в угол арены с пустой проволочной чашкой на 150 секунд. Затем извлеките C 57 из арены и поместите его в чистую пустую клетку. Поместите неагрессивного незнакомого взрослого самца CFW внутрь проволочной чашки и поместите проволочную чашку внутрь арены.
Снова введите C 57 на арену с помощью проволочной чашки CFW, содержащей ее, на 150 секунд. После возвращения обоих животных в соответствующие клетки, очистите арену водой и 70% этанолом, чтобы очистить все участки с мочой или фекалиями перед тестированием следующего C 57. Вычислите продолжительность времени, в течение которого любая точка тела находится в зоне взаимодействия как для сеанса с пустой чашкой, так и для сеанса с чашкой, содержащей CFW.
Разделите время, проведенное в зоне взаимодействия с чашкой, содержащей CFW, на время, проведенное в зоне взаимодействия с пустой чашкой, чтобы получить коэффициент социального взаимодействия. Выполняйте социальное взаимодействие в открытом поле в любое время после 10-дневного периода поражения, в зависимости от интересующего вас окна развития. Побежденные животные показали значительное снижение как коэффициента социального взаимодействия, так и времени чистого социального взаимодействия по сравнению с контрольной группой во всех протестированных временных точках.
Наиболее выраженное снижение коэффициента и времени социального взаимодействия произошло через две недели после поражения, при этом побежденные животные показали увеличение времени, проведенного с пустой чашкой. Тепловые карты подтвердили, что побежденные мыши проводили больше времени в углах и меньше времени в зоне взаимодействия во всех временных точках.
