Il nostro protocollo è significativo perché rappresenta un nuovo paradigma per valutare gli effetti dello stress cronico, in particolare lo stress psicosociale, sugli esiti della gravidanza. In questo protocollo, esponiamo topi gravidi a vari insulti psicosociali di diversa intensità in modo imprevedibile. I precedenti paradigmi di modelli animali impiegavano fattori di stress fisici o un numero limitato di fattori di stress somministrati ripetutamente, il che non riflette l'esperienza delle donne durante la gravidanza.
Il nostro modello di stress psicosociale cronico supera queste limitazioni. Questo metodo ha ampie ramificazioni per varie aree di ricerca, tra cui la salute mentale materna e la ricerca correlata allo sviluppo infantile avverso e, più in generale, per comprendere le origini dello sviluppo della malattia adulta attraverso eventi intrauterini avversi. Prima di iniziare ogni fattore di stress nel paradigma CGS, portare i topi del gruppo CGS dalla stanza di alloggiamento nella stanza designata per CGS.
Esporre i topi a diversi fattori di stress seguendo un regime di stress di 11 giorni che va dal giorno gestazionale 6,5 al 17,5. Per esporre i topi a oggetti estranei, distribuisci in modo casuale sei biglie o sei Lego di forme diverse in una gabbia statica pulita con biancheria da letto per topi senza i nidiacei del topo. Metti tutti i topi da una gabbia domestica nella gabbia statica con oggetti estranei per due ore, quindi riporta i topi nella loro gabbia di casa.
Per esporre i topi all'odore dei predatori, posizionare una lettiera sporca spessa un centimetro da ratti femmine in una gabbia statica pulita senza lettiere o nidiacei di topi. Metti tutti i topi da una gabbia domestica nella gabbia statica con lettiera sporca per topi per due ore, quindi riporta i topi nella loro gabbia di casa. Per esporre i topi a un'inclinazione della gabbia, posizionare tutti i topi da una gabbia domestica in una gabbia statica pulita con biancheria da letto per topi senza i nidiacei del topo.
Tenere la gabbia inclinata di 30 gradi contro il muro per due ore, quindi riportare i topi nella loro gabbia di casa. Per esporre i topi a frequenti cambi di biancheria da letto, posizionare tutti i topi da una gabbia domestica in una gabbia statica pulita con biancheria da letto per topi senza i nidiacei del topo. Ogni 10 minuti, spostare delicatamente i topi in una gabbia pulita diversa e sostituire la lettiera del mouse.
Dopo due ore, riporta i topi nella loro gabbia di casa. Per esporre i topi alla rimozione della lettiera, posiziona tutti i topi da una gabbia domestica in una gabbia statica vuota e pulita senza lettiere o nidiacei per due ore, quindi riporta i topi nella loro gabbia di casa. Per esporre i topi al movimento su uno shaker, posizionare tutti i topi da una gabbia domestica in una gabbia statica pulita con biancheria da letto per topi senza i nidiacei del topo.
Posiziona la gabbia statica in cima a uno shaker da laboratorio reciproco impostato su 140 colpi al minuto per due ore, quindi riporta i topi nella loro gabbia di casa. Per esporre i topi alle luci durante la notte, posiziona tutti i topi da una gabbia domestica in una gabbia statica pulita con biancheria da letto per topi senza i nidiacei del topo. Tenere le luci accese durante la notte per interferire con il ciclo buio.
Il giorno seguente, riporta i topi nella loro gabbia di casa. Per esporre un topo a nuovi compagni di gabbia, trasferire il mouse in una gabbia statica pulita con lettiera del topo contenente due topi femmina sconosciuti. Lascia il topo nella gabbia statica con i compagni di gabbia sconosciuti durante la notte.
Il giorno seguente, ha riportato il topo nella sua gabbia di casa con compagni di gabbia familiari. Per esporre i topi alla biancheria da letto bagnata, saturare la lettiera del topo in una gabbia statica con acqua pulita mantenuta a 24 gradi Celsius. Metti tutti i topi da una gabbia domestica nella gabbia statica con biancheria da letto bagnata durante la notte.
Il giorno seguente, riporta i topi nella loro gabbia di casa. Dopo che il regime di stress è completo il giorno gestazionale 17.5, ospitare tutti i topi sperimentali per prepararsi al parto e alle valutazioni funzionali a valle. L'esposizione di topi femmina gravide a CGS provoca cambiamenti nei parametri cronici rilevanti per lo stress, come la riduzione dell'aumento di peso corporeo durante la gravidanza e l'aumento del peso delle ghiandole surrenali nel primo periodo postpartum.
È importante sottolineare che le dighe CGS presentano anomalie postpartum e funzione neuroendocrina materna, come evidenziato dall'aumento dei livelli sierici di corticosterone a seguito di un nuovo insulto acuto. Inoltre, le dighe CGS mostrano alterazioni nell'assistenza materna come riflesso da un aumento del grado di frammentazione dei segnali materni ricevuti dai cuccioli. La durata media degli attacchi di leccatura / toelettatura è ridotta mentre il numero medio di attacchi è aumentato, indicando numerosi brevi episodi di comportamento nutritivo.
La preferenza per il saccarosio è anche depressa nelle dighe CGS rispetto alle dighe di controllo, suggerendo la presenza di anedonia. Infine, le dighe CGS mostrano anche un aumento dei comportamenti legati all'ansia misurato da una riduzione del tempo trascorso nei quadranti aperti dell'EZM rispetto alle dighe di controllo. Nella prole, l'esposizione alla CGS in utero provoca una diminuzione dell'aumento di peso durante il periodo postnatale dal giorno 7 al 21 postnatale, sebbene non ci siano differenze alla nascita.
Questa riduzione dell'aumento di peso corporeo è presente nella prole di entrambi i sessi. Quando si tenta questa procedura, stabilire un programma per ottenere gravidanze a tempo e implementare costantemente l'intera serie, sono fondamentali fattori di stress psicosociali imprevedibili variabili. Questa tecnica può aiutare a rispondere a domande interessanti come lo stress psicosociale materno può causare effetti specifici del sesso sulla funzione placentare o sullo sviluppo e sul comportamento del cervello della prole?
E questi effetti possono essere invertiti o modificati dall'intervento farmacologico o dalla cura materna postnatale?
