Сочетание внеклеточных везикул с биоматериалами является желательным подходом для исследований регенеративной медицины. Таким образом, в этом исследовании сообщается о функционализации титана с помощью электромобилей в качестве практического инструмента для ортопедии и регенерации костей. Функционализация капельного литья является простым и недорогим методом по сравнению с другими стратегиями, такими как полимерная ловушка или биохимическое связывание.
Начинают функционализацию титановой поверхности с промывки титановых дисков деионизированной водой в стеклянном стакане. Затем выбросьте воду перед промывкой дисков с 70% этанолом. Декантируйте раствор для обработки промытых имплантатов ультразвуком при 50 С в течение пяти минут в деионизированной воде.
После выбрасывания воды инкубируют титановые имплантаты в 40%-ном растворе гидроксида натрия при 50 С в течение 10 минут с перемешиванием, а затем обрабатывают имплантаты ультразвуком в деионизированной воде, как показано на рисунке. Затем выполните не менее пяти промывок имплантатов деионизированной водой. До тех пор, пока pH не будет нейтральным по показателю pH.
Повторите процесс обработки ультразвуком и инкубации, как объяснялось ранее, заменив гидроксид натрия 50% азотной кислотой. Выполните промывку и обработку ультразвуком деионизированной водой перед хранением имплантатов в 70% растворе этанола. Инкубируйте титановые имплантаты в 30%-ном растворе азотной кислоты в течение 30 минут при комнатной температуре с мягким перемешиванием.
После инкубации выполняют не менее пяти промывок деионизированной водой до тех пор, пока рН не станет нейтральным по показателям рН. Затем инкубируйте титановые имплантаты в течение ночи при комнатной температуре в деионизированной воде. На следующий день высушите имплантаты под вакуумом при 40 С в течение 10 минут.
Работая под шкафом для культивирования клеток, поместите титановые имплантаты в 96-луночную пластину стороной машины вверх. Организуйте внеклеточные везикулы капельного литья ev путем размораживания раствора EV и вихревого раствора при импульсе трех секунд. После смешивания нанесите 40 микролитров раствора EV на поверхность титана, чтобы обездвижить максимум 4 x 10^11 EV на имплантат, в соответствии с концентрацией, определенной анализом отслеживания наночастиц.
Затем поместите пластины в вакуумные условия при 37 ° C в течение примерно двух часов или до тех пор, пока капли не станут полностью сухими. Отрегулируйте время высыхания в зависимости от количества титановых имплантатов и воды, присутствующей в вакуумной камере. Количество электромобилей, высвобождаемых из титановых дисков, измерялось с помощью анализа отслеживания наночастиц.
На 2-й день было выпущено около 10^9 электромобилей, за которыми последовало продолжение выпуска на 6, 10 и 14 день. Биосовместимость клеток титана in vitro оценивали с помощью лактатдегидрогеназы, или анализа высвобождения ЛДГ, через 48 часов после посева клеток на имплантаты. Титановые электромобили демонстрировали более низкое количество ЛДГ, чем максимально допустимое цитотоксическое значение.
Принимая во внимание, что контрольная группа титана показала более высокие уровни активности ЛДГ. Наиболее важным этапом является вакуумная сушка имплантата с покрытием. Важно убедиться, что вся вода испаряется, чтобы получить оптимальную физисорбцию.
