A combinação de vesículas extracelulares com biomateriais é uma abordagem desejável para estudos de medicina regenerativa. Assim, este estudo relata a funcionalização de titânio com EVs como ferramenta prática para ortopedia e regeneração óssea. A funcionalização do fundição de gota é um método fácil e de baixo custo comparado com outras estratégias, como armadilha polimérica ou ligação bioquímica.
Inicie a funcionalidade da superfície de titânio lavando os discos de titânio com água deionizada em um copo de vidro. Em seguida, descarte a água antes de lavar os discos com 70% de etanol. Decante a solução para sonicar os implantes lavados a 50 C por cinco minutos em água deionizada.
Depois de descartar a água incubar implantes de titânio em uma solução de hidróxido de sódio de 40% a 50 C por 10 minutos com agitação e, em seguida, sonicar os implantes em água desionizada como demonstrado. Em seguida, realize pelo menos cinco lavagens dos implantes com água desionizada. Até que o pH seja neutro no indicador pH.
Repita o processo de sônica e incubação, como explicado anteriormente, substituindo o hidróxido de sódio por ácido 50%. Realizar as lavagens e sônica com água deionizada antes de armazenar os implantes em uma solução de 70% de etanol. Incubar os implantes de titânio em uma solução de ácido nítrico de 30% por 30 minutos em temperatura ambiente com agitação suave.
Após a incubação realizar pelo menos cinco lavagens com água desionizada até que o pH seja neutro em indicadores de pH. Em seguida, incubar implantes de titânio durante a noite em temperatura ambiente em água deionizada. No dia seguinte, seque os implantes sob vácuo a 40 C por 10 minutos.
Trabalhando sob o armário de cultura celular, coloque implantes de titânio em uma placa de 96 poços com o lado da máquina voltado para cima. Organize para os EVs de vesículas extracelulares soltarem a fundição descongelando a solução de EVs e a solução de vórtice a um pulso de três segundos. Após a mistura, deposite 40 microliters da solução EVs na superfície de titânio para imobilizar um máximo de 4 x 10^11 EVs por implante, de acordo com a concentração determinada pela análise de rastreamento de nanopartículas.
Em seguida, coloque as placas em condições de vácuo a 37 C por aproximadamente duas horas ou até que as gotas estejam completamente secas. Ajuste o tempo de secagem dependendo do número de implantes de titânio e da água presente na câmara de vácuo. A quantidade de EVs liberados de discos de titânio foi medida pela análise de rastreamento de nanopartículas.
No dia 2, cerca de 10^9 EVs foram lançados, seguidos de um lançamento sustentado nos dias 6, 10 e 14. A biocompatibilidade in vitro celular dos EVs de titânio foi avaliada com lactato desidrogenase, ou ensaio de liberação de LDH, a 48 horas após a semeadura celular nos implantes. Os EVs de titânio apresentaram uma quantidade menor de LDH do que o valor citotóxico máximo aceito.
Considerando que o grupo de controle de titânio apresentou níveis mais elevados de atividade LDH. O passo mais importante é a secagem a vácuo do implante revestido. É importante ter certeza de que toda a água é evaporada para obter a fissuração ideal.
