La combinazione di vescicole extracellulari con biomateriali è un approccio desiderabile per gli studi di medicina rigenerativa. Pertanto, questo studio riporta la funzionalizzazione del titanio con i veicoli elettrici come strumento pratico per l'ortopedia e la rigenerazione ossea. La funzionalizzazione del drop casting è un metodo facile e a basso costo rispetto ad altre strategie come l'intrappolamento polimerico o il legame biochimico.
Inizia la funzionalizzazione della superficie in titanio lavando i dischi di titanio con acqua deionizzata in un becher di vetro. Quindi scartare l'acqua prima di lavare i dischi con il 70% di etanolo. Decantare la soluzione per sonicare gli impianti lavati a 50 C per cinque minuti in acqua deionizzata.
Dopo aver scartato l'acqua incubare gli impianti in titanio in una soluzione di idrossido di sodio al 40% a 50 C per 10 minuti con agitazione e quindi sonicare gli impianti in acqua deionizzata come dimostrato. Successivamente, eseguire almeno cinque lavaggi degli impianti con acqua deionizzata. Fino a quando il pH non è neutro sull'indicatore di pH.
Ripetere il processo di sonicazione e incubazione, come spiegato in precedenza, sostituendo l'idrossido di sodio con il 50% di acido nitrico. Eseguire i lavaggi e la sonicazione con acqua deionizzata prima di conservare gli impianti in una soluzione di etanolo al 70%. Incubare gli impianti in titanio in una soluzione di acido nitrico al 30% per 30 minuti a temperatura ambiente con una delicata agitazione.
Dopo l'incubazione eseguire almeno cinque lavaggi con acqua deionizzata fino a quando il pH è neutro sugli indicatori di pH. Quindi incubare impianti in titanio durante la notte a temperatura ambiente in acqua deionizzata. Il giorno successivo, asciugare gli impianti sotto vuoto a 40 C per 10 minuti.
Lavorando sotto l'armadio di coltura cellulare, posizionare gli impianti in titanio in una piastra a 96 pozzetti con il lato della macchina rivolto verso l'alto. Disporre per le vescicole extracellulari ev goccia colata scongelando la soluzione EV e vorticoso soluzione ad un impulso di tre secondi. Dopo la miscelazione, depositare 40 microlitri della soluzione EV sulla superficie del titanio per immobilizzare un massimo di 4 x 10 ^ 11 EV per impianto, in base alla concentrazione determinata dall'analisi di tracciamento delle nanoparticelle.
Quindi, posizionare le piastre in condizioni di vuoto a 37 C per circa due ore o fino a quando le gocce sono completamente asciutte. Regolare il tempo di asciugatura in base al numero di impianti in titanio e all'acqua presente nella camera a vuoto. La quantità di veicoli elettrici rilasciati dai dischi di titanio è stata misurata mediante analisi di tracciamento delle nanoparticelle.
Il giorno 2, sono stati rilasciati circa 10 ^ 9 veicoli elettrici, seguiti da un rilascio prolungato nei giorni 6, 10 e 14. La biocompatibilità cellulare in vitro dei veicoli elettrici in titanio è stata valutata con la lattato deidrogenasi, o test di rilascio di LDH, a 48 ore dopo la semina cellulare sugli impianti. I veicoli elettrici in titanio hanno mostrato una quantità inferiore di LDH rispetto al valore citotossico massimo accettato.
Considerando che, il gruppo di controllo in titanio, ha mostrato livelli di attività LDH più elevati. Il passo più importante è l'essiccazione sottovuoto dell'impianto rivestito. È importante assicurarsi che tutta l'acqua sia evaporata per ottenere un fisisorbimento ottimale.
