Ti İmplantların TrombositTen Türetilmiş Hücre Dışı Veziklin İşlevselleştirilmesi

Biyomalzemelerle hücre dışı vezikül kombinasyonu rejeneratif tıp çalışmaları için arzu edilen bir yaklaşımdır. Bu nedenle, bu çalışma ortopedi ve kemik yenilenmesi için pratik bir araç olarak EV'lerle titanyum fonksiyonelleştirmeyi rapor eder. Damla döküm fonksiyonelleştirme, polimerik tuzak veya biyokimyasal bağlama gibi diğer stratejilerle karşılaştırıldığında kolay ve düşük maliyetli bir yöntemdir.

Titanyum diskleri bir cam beherde deiyonize su ile yıkayarak titanyum yüzey fonksiyonelleştirmeye başlayın. Daha sonra diskleri% 70 etanol ile yıkamadan önce suyu atın. Yıkanmış implantları 50 C'de deiyonize suda beş dakika boyunca sonicate etmek için çözeltiyi dekante edin.

Su inkübasyon titanyum implantları 50 C'de %40 sodyum hidroksit çözeltisinde ajitasyon ile 10 dakika attıktan sonra, gösterildiği gibi implantları deiyonize suya sonicate edin. Daha sonra, implantların deiyonize su ile en az beş yıkamasını gerçekleştirin. pH göstergesinde pH nötr olana kadar.

Sodyum hidroksitleri% 50 nitrik asitle değiştirerek, daha önce açıklandığı gibi sonikasyon ve inkübasyon işlemini tekrarlayın. İmplantları% 70 etanol çözeltisinde saklamadan önce yıkamaları ve sonication'ı deiyonize su ile gerçekleştirin. Titanyum implantları oda sıcaklığında 30 dakika boyunca% 30 nitrik asit çözeltisinde hafif ajitasyonla kuluçkaya yatırın.

Kuluçkadan sonra pH göstergelerinde pH nötr olana kadar deiyonize su ile en az beş yıkama gerçekleştirin. Daha sonra titanyum implantları deiyonize suda oda sıcaklığında bir gecede kuluçkaya yatırın. Ertesi gün, implantları vakum altında 40 C'de 10 dakika kurutun.

Hücre kültürü kabini altında çalışarak, titanyum implantları makine tarafı yukarı bakacak şekilde 96 kuyulu bir plakaya yerleştirin. EV'lerin çözeltisini çözerek hücre dışı vezikli otlar damla dökümü ve üç saniyelik bir darbeyle girdaplama çözeltisini düzenleyin. Karıştırdıktan sonra, nanopartikül izleme analizi ile belirlenen konsantrasyona göre, implant başına maksimum 4 x 10^11 EV'yi hareketsiz hale getirmek için titanyum yüzeye 40 mikrolitre EV çözeltisi biriktirin.

Daha sonra, plakaları vakum koşulları altında yaklaşık iki saat boyunca veya damlalar tamamen kuruyana kadar 37 C'ye yerleştirin. Titanyum implantların sayısına ve vakum odasında bulunan suya bağlı olarak kuruma süresini ayarlayın. Titanyum disklerden salınan EV miktarı nanopartikül izleme analizi ile ölçüldü.

2. günde, yaklaşık 10^9 EV serbest bırakıldı ve ardından 6, 10 ve 14. Titanyum EV'lerin in vitro hücre biyouyumluluğu, implantlara hücre tohumlamadan 48 saat sonra laktat dehidrogenaz veya LDH salınım tahlilleri ile değerlendirildi. Titanyum EV'ler maksimum kabul edilen sitotoksik değerden daha düşük miktarda LDH sergiledi.

Titanyum kontrol grubu ise daha yüksek LDH aktivite seviyeleri gösterdi. En önemli adım kaplamalı implantın vakumla kurutmasıdır. Optimal fitorpsiyon elde etmek için tüm suyun buharlaştığından emin olmak önemlidir.