Наш подход позволяет минимизировать инвазивную болезнь при лечении синдрома Майера-Рокитанского-Кустера-Хаузера путем сочетания лапароскопической вагинопластики и извлечения ооцитов для будущих методов лечения бесплодия. Основными преимуществами нашего подхода являются потребность в однократной анестезии и преодоление невозможности трансвагинального извлечения ооцитов у молодых рокитанских больных. Процедуру продемонстрируют Диана Дельпрато, старший гинеколог нашего отделения бесплодия, а также Алессандра Альтери и Грета Чермисони, два старших клинических эмбриолога из нашей лаборатории вспомогательной репродукции.
Начните контролируемую стимуляцию яичников на 14-й день со дня операции. Мониторинг реакции яичников с помощью серийного трансабдоминального УЗИ и сопутствующих измерений эстрадиола и прогестерона. Устанавливают пневмоперитонеум открытой методикой.
Поместите один 10-миллиметровый пуповинный троакар для установки лапароскопа и три пятимиллиметровых троакара в центральном, правом и левом нижних квадрантах. При лапароскопическом зрении используйте иглу с одним просветом 17-го калибра, подключенную к аспирационному насосу, как это обычно используется для трансвагинального извлечения через центральный и левый троакары для пункции правого и левого яичника соответственно. Поднимите и удерживайте яичники лапароскопическими щипцами, чтобы облегчить воздействие фолликулов.
При аспирации нескольких фолликулов, которые находятся один близко к другому, сохраните кончик иглы в яичнике, чтобы уменьшить количество раз, когда кора яичников трансфиксируется, и присущий риск кровотечения. Рассекните брюшину, подняв и разрезав брюшную нить поперечно между двумя рудиментарными рогами матки, а затем, расширив разрез латерально, спереди и сзади. Обнажите влагалищную ямочку на промежностном подходе и выполните Н-образный разрез и создайте неовагинальное пространство путем резкого и тупого рассечения везикоректального пространства.
Затем потяните вниз рассеченные перитонеальные края к краю влагалищного вестибулума. Положение прерванных швов в полидиоксаноне синтетически рассасывающееся 3-0 при перитонеальном вестибулярном анастомозе. Начинают пучковый струнный шов в полидиоксаноне синтетический рассасывающийся 2-0 мононити в каждом гемипельвисе из мобилизованной брюшины над мочевым пузырем с соединительной трансфиксией круглой связки, трубного перешейка, маточно-яичниковой связки и латерального брюшинного листа.
Затем включите в два шва боковой аспект мезоректа и передний аспект ректальной серозы непосредственно под ректозигмовидным соединением. Наконец, поместите марлю с парафиновым покрытием в покрытую брюшины неовагину. Соберите фолликулярные аспираты в 10-миллиметровые трубки с круглым дном, хранящиеся в теплом состоянии в переносном инкубаторе, и немедленно транспортируйте их в эмбриологическую лабораторию со временем транспортировки примерно 10 минут.
По мере сбора всех кучевых ооцитарных комплексов поместите их в четырехлуночную посуду, содержащую среду для оплодотворения, и пометьте крышку и дно данными, относящимися к личности пациента. Инкубируйте их при 37 градусах Цельсия в контролируемой атмосфере, содержащей 6% углекислого газа и 5% кислорода. Убедитесь, что двойная проверка процедуры выполняется вторым сотрудником лаборатории.
Выполните удаление кучевых коронных клеток в течение 38 часов после запуска овуляции. Поместите кучевые ооцитарные комплексы в центральный колодец, содержащий фермент, чтобы диспергировать кучевые клетки стеклянной пипеткой Пастера, осторожно пипетируя раствор, содержащий кучевые ооцитарные комплексы, вверх и вниз на срок до 30 секунд. Переместите ооциты во вторую центральную лунку, содержащую только буферную среду HEPES, убедившись, что вытесняет минимальное количество фермента.
Удалите оставшиеся коронные клетки с помощью оголенных пипеток с уменьшением внутренних диаметров. Оценивают стадию созревания ооцитов, разделяя метафазные II ооциты. Перенос метафазы II ооцитов в культуре ЭКО 60-миллиметровой чашки Петри, содержащей девять капель непрерывной одиночной питательной среды, покрытой шестимиллиметровым минеральным маслом.
Инкубируйте их при 37 градусах Цельсия в контролируемой атмосфере, содержащей 6% углекислого газа и 5% кислорода. Заполните охлаждающую коробку до верха свежим жидким азотом и накройте до тех пор, пока не будет использовано, чтобы свести к минимуму диспергирование и испарение. Используйте пипетку стриппера с внутренним диаметром 170 микрометров, чтобы избежать повреждения ооцитов во время манипуляции.
Осторожно встряхните каждый флакон с раствором для уравновешивания, раствором для витрификации и моющим раствором, чтобы перемешать содержимое перед использованием. Приготовьте крышку 60-миллилитра чашки Петри одной каплей 50 микролитров моющего раствора одной. Поместите капли непосредственно перед использованием, чтобы ограничить испарение среды.
Возьмите посуду с ооцитами из инкубатора и перенесите метафазные II ооциты с минимальным объемом среды из культуральной посуды в 50 микролитров промывочного раствора. Дозировать 50-микролитровые капли моющего раствора два, раствор для уравновешивания один и раствор для уравновешивания два в непосредственной близости и перевести ооциты из раствора для промывки каплями один в раствор для промывки капель два. Слейте каплю раствора равновесия один с моющим раствором два и подождите две минуты для спонтанного перемешивания обоих растворов.
Затем объедините каплю раствора равновесия два с ранее объединенными каплями и оставьте еще на две минуты. Наконец, объедините новую 100-микролитровую каплю раствора равновесия три с ранее объединенными каплями и оставьте на одну дополнительную минуту. Поместите ооциты в 100-микролитровую каплю раствора равновесия четыре раза на 10 минут.
Дозировать две 50-микролитровые капли раствора для витрификации и одну 100-микролитров витрификационного раствора. Переместите ооциты последовательно в три капли раствора витрификации в течение 60 секунд, чтобы ооциты оставались в каждой капле в течение примерно 20 секунд. Когда до окончания 60 секунд инкубации останется примерно 10 секунд, поместите криодевицу под микроскоп.
Вынесите ооциты на кончик пипетки и поместите их на криопроцедуру с минимальным количеством раствора для витрификации. Аспирируют избыток витрификационного раствора, оставляя ооциты покрытыми тонким слоем витрификационного раствора. Погрузите криодержку непосредственно в жидкий азот и быстро перемещайте ее.
Храните прибор в жидком азоте и накройте его защитной крышкой. Сопутствующие лапароскопические процедуры извлечения ооцитов и вагинопластики были успешно объединены у всех пациентов. В среднем было извлечено 11,4 5,4 ооцитов и криоконсервировано 9,6 4,3 ооцитов М2.
Общее среднее оперативное время составило 114 17 минут. Интраоперационная кровопотеря была незначительной у всех пациентов и не наблюдалось интраоперационных нежелательных явлений. На третий день после операции пациенты начали ежедневное использование расширителя и были выписаны на день 6.0 1.0.
Рекомендуется осторожное аспирирование фолликулов в яичнике, с должным вниманием к автоматической мобилизации яичников, чтобы обеспечить оптимальный доступ и извлечение.
